甜菜ISSR-PCR反应体系的优化

以甜菜基因组DNA为模板,研究了ISSR的主要影响因素,建立一套适宜于甜菜的ISSR优化反应体系及程序,并对该优化体系进行了验证.实验结果表明:①优化的ISSR扩增的反应体系为:20μL的反应体积中包括2.5mmol/L MgCl2,0.25mmol/L dNTPs,1.5U Taq DNA聚合酶,0.5μmol/L引物,10×PCR Buffer 2μL,100ng DNA模板.②优化的PCR扩增条件为:94℃预变性3min,然后94℃变性30s,45℃退火30s,72℃延伸1min,35个循环后,72℃延伸5min.③利用优化的反应体系仅用1条引物就能将10份甜菜材料区分开.     

狗牙根与弯穗狗牙根形态鉴别性状的筛选

观测和统计分析了10个狗牙根和8个弯穗狗牙根种源的17个外部形态性状。结果表明:(1)与狗牙根相比,弯穗狗牙根的直立枝和匍匐枝叶片均较宽,节间较粗,差异显著;(2)弯穗狗牙根的叶片浅绿色,柱头紫褐色,而狗牙根的叶片较深,为绿色或深绿色,柱头为紫色、紫红或浅紫色;(3)弯穗狗牙根叶片和叶鞘均无毛,而狗牙根有毛。因此,直立枝和匍匐枝的叶片宽度、节间直径、叶色、柱头颜色、叶片毛况和叶鞘毛况7个外部形态性状可作为鉴别这2个种的形态学指标。     

狗牙根种质资源营养价值评价

测定了91份狗牙根种质营养期干物质、粗蛋白、粗脂肪、粗纤维、粗灰分、无氮浸出物、钙和磷含量等8个营养成分指标,并以粗蛋白、粗脂肪、粗纤维和无氮浸出物作为判断指标,应用层次分析法对其营养价值进行评价,可将91份种质分为高营养型、低营养型和普通营养型3类.旨在为狗牙根作为饲草的应用价值提供理论依据.     

狗牙根研究进展

狗牙根是暖季型草坪草中应用最广泛的草种之一。综述了国内外狗牙根在种质资源、分布范围、遗传育种、抗寒性、抗旱性等方面的相关研究进展,并提出了今后的研究建议。     

大豆ISSR-PCR反应体系的优化

以黑龙江省大豆为材料,利用正交试验设计,对大豆ISSR-PCR反应体系中的5种主要因素(Mg2+、引物、dNTPs、模板DNA量、Taq酶量)在4个水平上进行体系优化.结果确定了大豆ISSR-PCR反应的最佳体系(25 μL)为:Mg2+浓度1.85 mmol·L-1、dNTPs浓度1.2 mmol·L-1、引物浓度1.2 μmol·L-1、模板DNA60 ng、Taq酶量0.7 U.利用该最佳体系,选取引物855对25份材料进行扩增,以验证该体系的稳定性.建立了适于大豆的ISSR-PCR反应体系,为利用ISSR标记技术开展黑龙江省大豆遗传多样性分析提供了依据.     

不同生境的狗牙根形态特征研究

通过观测直立枝和匍匐枝的叶片长度和宽度、草层高度、节间直径和节间长度等7项指标,比较分析了裸露地、荫蔽地、旱地和盐碱地4种生境的狗牙根[Cynodon dactylon(Linnaeus)Persoon]种质的形态差异。结果表明:就狗牙根的坪用价值而言,依次是旱地生长的狗牙根>裸露地生长的狗牙根>盐碱地生长的狗牙根>荫蔽地生长的狗牙根。     

芒果SSR-PCR反应体系的优化

通过正交实验,以芒果品种金煌芒为材料,对影响芒果SSR-PCR反应体系中的Mg2+、dNTPs、Taq酶、模板DNA、引物这5个因素进行了优化。结果表明,各因素水平变化对PCR反应影响的显著性依次为:模板DNAdNTPs引物Mg2+Taq酶。最终确立SSR反应体系的最优条件为:20μL体系中,10×buffer2μL,模板DNA80ng,dNTPs0.4mmol/L,引物0.2μmol/L,Mg2+1.8mmol/L,Taq酶0.75U。     

不同生境条件下的狗牙根形态变异研究

通过野外调查和田间测定,对海南岛狗牙根(Cynodon dactylon[L.]Pers.)不同野生种群的形态学变异,以及同一种群在不同生境条件下的形态变异进行了研究。结果表明:狗牙根不同种群在野外原生境与田间栽培两种条件下外部形态性状均发生了较大的变异,说明狗牙根种质资源有较丰富的遗传多样性。对形态学测定结果进行聚类分析,将16个种群分为3大类,聚类结果与材料的生境基本一致,IC类种群可望作为优良的草坪草选种育种材料。     

狗牙根耐盐性材料初步筛选

狗牙根(Cynodon dactylon)是暖季型草坪草中得分最高,应用最广泛的草种之一,具有耐盐碱,生长快、建坪迅速等优点。本试验采用荷格伦特营养液培养法,依次用20、26、31 g/L的NaCl营养液对403份狗牙根材料进行耐盐处理30 d,筛选出在26 g/L的NaCl溶液中存活的耐盐种质21份,再对这些耐盐种质进行不同盐质量分数梯度(20、22、25、28和30 g/L)复选,初步筛选出较耐盐种质11份,次耐盐种质10份,这些材料为培育耐盐狗牙根品系提供了优良亲本。     

广东地区野生狗牙根遗传多样性的ISSR分析

应用ISSR标记,对广东地区30份野生狗牙根进行遗传多样性研究。从50个ISSR引物中筛选出15个多态性明显、反应稳定的引物,共扩增出151条谱带,平均每个引物能扩增出10.07条带,其中多态性条带总数为142条,多态性条带比率达93.7%。材料间遗传相似系数GS=0.58278～0.92715。基于遗传相似系数,利用UPGMA聚类分析表明,供试材料可聚为4类。POPGENE分析软件结果表明,平均Shannon信息指数I=0.5689,平均Nei's基因多样性h=0.3813,每位点平均有效等位基因数ne=1.6196。     

狗牙根对铝胁迫响应及临界浓度的研究

以狗牙根为研究对象,利用水培法进行耐铝鉴定,初步研究不同铝浓度胁迫对狗牙根叶色、耐铝指数、坪用质量、枯黄率、相对地上部干重、相对根系干重的影响。结果表明,在250、500、750、1 000、1 250μmol/L铝浓度处理下,狗牙根受胁迫影响较小,不同浓度处理之间差异不明显。在1 500、1 750、2 000、2 250μmol/L铝浓度处理下,狗牙根随着胁迫时间的增长,叶色、均一性逐渐降低。在2 500、2 750、3 000、3 250、3 500μmol/L铝浓度处理下,狗牙根受胁迫影响较大,叶色、均一性明显降低,与对照相比表现出显著差异或极显著差异。通过建立回归方程,以狗牙根耐铝指数下降到60%作为狗牙根存活临界铝离子浓度,求得狗牙根致死临界铝浓度为2 520μmol/L。     

柱花草DNA提取及ISSR反应体系的正交优化

报道了以新鲜嫩叶提取高纯度、完整性好的柱花草基因组DNA方法.并利用正交设计,从Taq聚合酶、Mg2 、dNTP、DNA模板、引物浓度5个因素、4个水平对柱花草ISSR反应体系进行优化试验,确立了适合柱花草的快速而又高效的ISSR反应体系,即20 μL反应体系中含1×PCR缓冲液,2.0 mmol/L Mg2 ,0.2 mmol/LdNTP,0.4 μmol/L引物,60 ng DNA模板,1 U Taq聚合酶.     

黄秋葵叶粉对海兰褐蛋鸡部分生产性能及蛋品质的影响

研究了黄秋葵叶粉对产蛋高峰期海兰褐蛋鸡部分生产性能和蛋品质的影响,旨在找出最适宜添加量,为进一步开发新型天然饲料添加剂奠定基础。试验组黄秋葵叶粉添加量分别为3％（T3）、4％（T4）、5％（T5）、6％（T6）,对照组为不添加黄秋葵叶粉组（0％,T0）。试验共进行12周,预饲期1周。结果表明：试验组蛋重较对照组均有不同程度的提高,T3、T4组的产蛋率、产蛋量比对照组有所提高,T4、T5组采食量和T4组的料蛋比较对照组有所降低;各试验组在试验鸡蛋黄的着色效果均较对照组有显著提高（p＜0.05）;各试验组哈     

小麦抗叶锈基因 Lr20、 Lr28、 Lr29的STS、SCAR标记在近等基因系上的特异性验证

为了把特异性分子标记与抗病性鉴定有效地结合起来,用含有不同抗叶锈基因的54个以Thatcher为遗传背景的近等基因系（Nearisogenic lines,NILs）对与抗叶锈基因 Lr20、 Lr28和 Lr29（ Lr29UBC和 Lr29OPY）连锁的STS、SCAR标记进行特异性验证,结果分别扩增出片段大小依次为540、378、1 000、900 bp的条带,与报道片段大小一致。同时发现与抗病基因 Lr20、 Lr29连锁的STS分子标记及与 Lr29连锁的两个SCAR标记 Lr29UBC、 Lr29OPY在NILs中特异性较好,但 Lr28的PCRSTS Lr28扩增产物不仅在其亲本中,而且在其余53个近等基因系中都扩增出与报道大小相同的378 bp的条带。验证结果表明,与抗病基因 Lr20、 Lr29连锁的STS、SCAR分子标记在NILs中特异性较好,可方便地用于小麦抗叶锈的分子标记辅助选择育种,而 Lr28的STS分子标记没有特异性,不能用于分子标记辅助选择育种。     

琯溪蜜柚CmPME1的克隆及其在果实发育过程中的表达分析

利用RT-PCR技术从‘琯溪蜜柚’中克隆得到1条PME（pectinmethylesterase）基因的ORF序列,命名为CmPME1。该序列编码一个含有582个氨基酸的蛋白质,分子量63.37 ku,该蛋白属于稳定的碱性亲水性蛋白。同源性分析表明：其编码的氨基酸序列与可可树（Theobroma cacao）、毛果杨（Populus trichocarpa）的同源性分别为76％、74％,与甜橙的氨基酸序列同源性高达99％。实时荧光定量PCR结果表明,随着果实的发育,CmPME1的表达量逐渐升高,在花后170 d达到最高,然后逐渐降低,远中柱汁胞CmPME1的表达量高于近中柱。     

黄花美冠兰生长发育规律及主要营养元素含量变化的研究

对黄花美冠兰[Eulophia flava(Lindl.)Hook.f.]地上部与地下部的生长动态进行了观察,分析了各时期叶片和新假鳞茎中N、P、K、Ca和Mg元素在干物质中的含量。结果表明:2007年1月26日栽植的黄花美冠兰开花母球,在1个半月后迅速进入花期,花芽生长迅速;新形成的假鳞茎的生长速度较慢,横径和纵径的生长速度几乎一致;6月以后新假鳞茎的生长速度加快,但纵径的生长速度大于横径,10月开始生长速度又变慢,11月末以后几乎停止生长。在整个生长期,新假鳞茎的直径大小变化与干鲜重的变化规律基本一致,但不同时期的变化幅度不同。总体来说,随着新假鳞茎的不断生长,N、P、K和Ca的含量不断增加,到后期含量基本稳定或略有下降;而Mg的含量在6月底达到最大值,随后下降再缓慢上升至稳定。