响应面优化酶法提取牡蛎糖原工艺条件研究

为研究制备牡蛎(Crassostrea angulata)糖原的最佳工艺条件,通过比较分析了碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶等5种不同蛋白酶对牡蛎进行酶解提取糖原的效果,以碱性蛋白酶为最优酶制剂。在对碱性蛋白酶酶解工艺条件进行单因素实验的基础上,应用Box-Bhenken中心组合设计3因素3水平试验方案,通过响应面分析,建立数学模型优化牡蛎糖原的提取条件,以p H、酶解温度和加酶量为自变量,牡蛎糖原提取率为指标,获得碱性蛋白酶水解牡蛎提取糖原的最佳工艺条件,即加酶量4%、p H9、水解温度50℃,此时牡蛎糖原的提取率可达(48.55±0.01)%。试验结果表明,响应面法对牡蛎糖原提取条件的优化方案合理可行,该研究为牡蛎糖原的开发利用提供了理论依据。     

牡蛎酶解工艺条件的研究

比较选择了牡蛎酶解的有效蛋白酶，研究了牡蛎酶解的工艺中各主要因素对提取率的影响。结果表明，A．SI，398枯草芽跑杆菌中性蛋白酶和胰蛋白酶对牡蛎有较好的酶解效果。酶解温度、加酶量、底物浓度对酶解提取率影响较大。确定了牡蛎酶解的最佳工艺条件为：酶解温度50℃；加酶量0．5％；底物浓度6％；酶解时间2h。     

壳聚糖固定化胰蛋白酶制备牡蛎肽的研究

以壳聚糖为载体固定化胰蛋白酶,制备牡蛎肽,然后以肽得率为指标,分别研究了pH值,酶加量,酶解时间和温度等单因子对固定化胰蛋白酶酶解牡蛎蛋白质的影响。实验结果表明,酶解牡蛎蛋白的最佳工艺条件是:底物浓度为200μg/mL,加固定化胰蛋白酶量7mg/3mL,酶解时间3h,pH 8.0,温度40℃。在此条件下水解牡蛎蛋白,肽得率可达到20.39%。     

近江牡蛎的超声波辅助自溶及酶解条件研究

超声波和蛋白酶可以破坏蛋白质结构,提高短肽的得率。本试验以近江牡蛎为原料,在适度水解、控制挥发性盐基氮在合理范围的前提下,以短肽含量为主要目标,首先通过研究超声波功率、时间对牡蛎自溶酶解的影响,优化超声波辅助酶解工艺,然后采用单因素试验研究碱性蛋白酶对超声波—自溶酶解液酶解效果的影响。结果显示,440 W超声波处理牡蛎10min后自溶酶解,短肽含量为(88.75±1.16)mg/mL,是对照组的2.12倍;水解度为(30.38±0.05)%;挥发性盐基氮为(79±2)μg/g。采用碱性蛋白酶对超声波-自溶酶解液进行进一步酶解,优化的酶解条件是:加酶量5kU/g,酶解温度55℃,酶解时间4h,此时短肽含量达到100mg/mL以上,水解度为(35.95±0.05)%;挥发性盐基氮为(178±6)μg/g,处在可接受范围。试验结果表明,超声波预处理后自溶,再进行外源蛋白酶酶解可显著提高酶解效率。     

复合酶提取牡蛎抗氧化肽的工艺研究

以牡蛎为原料,首先从木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶中筛选出胰蛋白酶为内切酶,以水解度为指标,得到最佳的酶解工艺条件:时间4h,温度50℃,pH8.0,料水比1∶2,加酶量3％(7 500 U/g),水解度为49.50％;同时以水解度为指标,得到外切酶风味蛋白酶的最佳酶解工艺:时间5h,温度50℃,pH8.0,料水比1∶2,加酶量3％ (450 U/g),实际水解度50.95％.最后,以清除羟自由基能力和水解度为指标,探讨内切酶(胰蛋白酶)和外切酶(风味蛋白酶)不同复合酶解方式的抗氧化能力.最终确定,复合酶解制备牡蛎抗氧化肽效果最好,其酶解条件为胰蛋白酶为3％(7 500 U/g)、风味蛋白酶加酶量为3％ (450 U/g),pH8.0,时间5h,料水比1∶2,温度50℃时,水解度高达53.94％,体外清除·OH的EC50为0.56 mg/mL.     

马氏珠母贝闭壳肌活性肽制备及其辅助降血糖功效评价

为挖掘贝类活性肽潜在的营养功能价值,选用复合蛋白酶和风味酶分别水解马氏珠母贝(Pinctada martensii)、华贵栉孔扇贝(Chlamys nobilis)和栉江珧(Atrina pectinate)的闭壳肌,以α-葡萄糖苷酶抑制活性为主要考察指标,探讨了蛋白酶种类、酶解时间、pH、温度以及酶添加量对酶解产物α-葡萄糖苷酶抑制活性的影响,筛选出最佳酶解产物,通过动物实验进一步验证其辅助降血糖的活性。结果显示,3种贝类的酶解产物均具有良好的α-葡萄糖苷酶抑制活性,其中,马氏珠母贝闭壳肌酶解物(Enzymatic hydrolysate of P. martensii adductor muscle, EHPA)活性最强,在酶解条件时间为3 h、酶添加量为5 000 U·g^-1、酶解温度为50℃、酶解pH为7.0的条件下,EHPA的α-葡萄糖苷酶抑制活性为24.54%,其抑制活性与短肽浓度有一定相关性。动物实验结果显示,EHPA具有辅助降血糖的活性。综上,EHPA具有开发辅助降血糖功能食品的潜在应用价值。     

黄缘盒龟肉的酶解工艺优化及其体外抗氧化活性研究

龟类不仅营养价值高,而且具有潜在的药用价值,通过研究龟肉酶解产物的功能特性,可以科学认识其营养保健功能.以黄缘盒龟肉为原料,羟自由基清除率为指标,碱性蛋白酶为水解酶,通过正交试验L9(34)得到制备抗氧化肽的最佳酶解条件为pH值8.0、酶解温度55℃、料液比1.5∶20 g/mL、加酶量(酶/底物,E/S)3.0％、酶解时间3h,酶解液对羟自由基清除率达到82.08％.酶解产物体外抗氧化活性的结果表明,酶解产物对羟自由基、超氧阴离子自由基、DPPH自由基和过氧化氢均有较好的清除作用,还具一定的还原能力、亚铁离子螯合能力和亚油酸自氧化抑制能力.总体而言,黄缘盒龟酶解产物在不同的体外抗氧化体系中均表现出一定的抗氧化效果,具有良好的开发利用前景.     

大鲵肉酶解产物的制备及其抗氧化性的研究

以大鲵肉为原料,利用Aspergillus sp.酸性蛋白酶进行酶解,研究其最佳的酶解条件以及酶解产物的抗氧化作用。结果表明,大鲵肉酶解的最佳工艺条件为Aspergillus sp.酸性蛋白酶加酶量为0.4%(质量比)及底物浓度为0.1g/mL时,酶解时间5.5h,pH 2.0,温度45℃。时间飞行质谱表明酶解产物的分子量小于2 000,苯酚硫酸法测定糖含量为2%,Folin-酚试剂法测蛋白含量为93%。大鲵酶解产物清除羟基自由基(.OH)和DPPH自由基的能力随浓度升高而增强。     

具有结合胆酸盐作用卵形鲳鲹蛋白酶解物的制备和分子量分布研究

以卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)鱼肉为原材料,以酶解产物与胆酸盐的体外结合率为指标,从5种常用食品用蛋白酶中筛选最优蛋白酶。进而采用正交法优化酶解条件,以提高酶解产物的胆酸盐结合率,并采用GPC法分析产物中蛋白肽的分子量分布情况。结果表明,胰蛋白酶酶解产物(100 mg·m L~(-1))与胆酸钠、甘氨胆酸钠和牛磺胆酸钠等3种胆酸盐的体外结合能力均好于其他4种蛋白酶,结合率分别达到42.1%、33.5%和30.1%,分别相当于降血脂药物考来烯胺散(20 mg·m L~(-1))的78.3%、74.4%和76.8%;经过正交试验优化的制备卵形鲳鲹蛋白肽的工艺条件为酶解时间2 h,加酶量2 000 U·g~(-1),料液比1∶4(g·m L~(-1)、p H 8、37℃)。该条件下酶解产物(20 mg·m L~(-1))对甘氨胆酸钠体外结合率达到同浓度阳性对照物(考来烯胺散)的48.3%,酶解产物中相对分子量3 k D以下的肽类组分占总蛋白水解物的77.30%。     

中国毛虾ACE抑制肽的初步研究

对以中国毛虾为原料酶法制备具有抑制血管紧张素转换酶(ACE)活性的酶解产物的方法作了探讨。以体外活性(ACE抑制率)为指标,通过正交试验确定胃蛋白酶的最佳酶解条件为pH2.4、温度41℃、酶量900U·g-1底物、底物浓度8%;酶解产物的IC50为0.65mg·mL-1,再分别利用SephadexG 25和SephadexG 15对其进行进一步分离提纯,IC50降至0.084mg·mL-1和0.046mg·mL-1,活性组分中的疏水性氨基酸含量增高,最终活性产物的分子量分布在700～1900。     

牡蛎酶解液的抗氧化活性

检测了牡蛎(Crassotera gigas)木瓜蛋白酶和中性蛋白酶酶解液的抗氧化活性。由Sephadex G-15葡聚糖凝胶柱层析分析牡蛎酶解液,得到具抗氧化活性组分的分子量分布。分子量为1191 D和826 D左右的木瓜蛋白酶酶解活性肽组分的自由羟基清除活性最强,当其质量浓度分别为0.184 mg/mL和0.673 mg/mL时,体外自由羟基清除活性分别为53.6%和66.5%;分子量分别为1074 D和735 D左右的中性蛋白酶酶解活性肽的自由羟基清除活性最强,当其质量浓度分别为0.166 mg/mL和0.830 mg/mL时,体外自由羟基清除活性分别57.6%和70.5%。HPLC分析结果表明,木瓜蛋白酶与中性蛋白酶酶解的活性肽组分分别由几种抗氧化肽组成。抗氧化活性最强的木瓜蛋白酶与中性蛋白酶酶解的肽组分在质量浓度为2.5 mg/mL时,活性分别可达83.6%和80.8%。用牡蛎原浆与各酶解液灌胃昆明小白鼠。研究结果表明,用木瓜蛋白酶与中性蛋白酶酶解原液及经超滤纯化的酶解液对小白鼠实施灌胃,其肝脏组织的SOD活力都显著提高(P<0.05);灌胃经超滤纯化的木瓜蛋白酶和中性蛋白酶酶解液,小白鼠肝脏组织GSH-PX活力、GSH含量显著提高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05)。     

酶解罗非鱼鱼皮胶制备降血压肽的研究

为探讨罗非鱼鱼皮胶制备降血压肽的酶解工艺,研究选用Neutrase中性蛋白酶、Alcalase碱性内切蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和复合蛋白酶分别对罗非鱼鱼皮胶进行酶解,对其酶解液的水解度进行比较。结果表明复合蛋白酶的酶解效果最好。对复合蛋白酶的酶解工艺进行单因素优化,确定其最佳酶解工艺为:温度50℃、pH值7.0、料液比1∶5、酶量为底物量的1.5%。在此条件下水解6h时,水解度为60%,酶解产物对血管紧张素转化酶(ACE)的抑制率最高,达到78.96%。     

华贵栉孔扇贝肉及其酶解产物对半去势雄性大鼠生殖能力的影响

为探究华贵栉孔扇贝(Chlamys nobilis)肉及其酶解产物对改善男性生殖能力的功效,该研究以半去势SD雄性大鼠为动物实验模型,考察华贵栉孔扇贝肉及其酶解产物对半去势雄性大鼠的性行为表现、脏器系数、血清性激素水平、阴茎组织一氧化氮(NO)和总一氧化氮合酶(NOS)活力等的影响.结果表明,华贵栉孔扇贝肉及其酶解产物...     

近40年雷公藤生殖毒性研究概述

该研究通过雷公藤甲素 (TP) 损伤TM4细胞构建生殖细胞损伤模型,探究了香港牡蛎 (Crassostrea hongkongensis) 酶解超滤组分对TP诱导的TM4小鼠 (Mus musculus) 睾丸支持细胞氧化损伤的保护作用,并检测了牡蛎酶解超滤组分的分子量分布与微量金属元素含量,比较分析了各个超滤组分对TP诱导的TM4细胞存活率以及还原型谷胱甘肽 (GSH)、丙二醇 (MDA) 和活性氧 (ROS) 水平的影响。结果表明,牡蛎酶解超滤组分富含铜 (Cu)、锌 (Zn)、锰 (Mn) 和硒 (Se) 等微量金属元素;经超滤分级,小分子与大分子物质得到有效分离;与模型组相比,各个超滤组分均不同程度地提高了经TP诱导的TM4细胞存活率,其中<3、3~5和5~10 ku超滤组分的细胞存活率高于>10 ku超滤组分;而<3 ku超滤组分可有效抵抗TP诱导的TM4细胞氧化应激损伤,减少细胞内ROS产生和脂质过氧化,增强TM4细胞的抗氧化能力。     

牡蛎酶解超滤组分对TM4小鼠睾丸支持细胞的氧化损伤保护作用

该研究通过雷公藤甲素(TP)损伤TM4细胞构建生殖细胞损伤模型,探究了香港牡蛎(Crassostrea hongkongensis)酶解超滤组分对TP诱导的TM4小鼠(Mus musculus)睾丸支持细胞氧化损伤的保护作用,并检测了牡蛎酶解超滤组分的分子量分布与微量金属元素含量,比较分析了各个超滤组分对TP诱导的TM4细胞存活率以及还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醇(MDA)和活性氧(ROS)水平的影响。结果表明,牡蛎酶解超滤组分富含铜(Cu)、锌(Zn)、锰(Mn)和硒(Se)等微量金属元素;经超滤分级,小分子与大分子物质得到有效分离;与模型组相比,各个超滤组分均不同程度地提高了经TP诱导的TM4细胞存活率,其中3、3～5和5～10 ku超滤组分的细胞存活率高于10 ku超滤组分;而3 ku超滤组分可有效抵抗TP诱导的TM4细胞氧化应激损伤,减少细胞内ROS产生和脂质过氧化,增强TM4细胞的抗氧化能力。     

罗非鱼皮酶解物钙离子结合能力及其结合物的抗氧化活性

该研究利用中性蛋白酶、Protamex1.5L和碱性蛋白酶酶解罗非鱼(Oreochromis mossambicus)鱼皮,研究了各种酶解产物对钙离子(Ca~(2+))的结合能力,比较了酶解物结合Ca~(2+)后的抗氧化能力,并分析了结合物的傅里叶红外光谱(FT-IR)。结果显示,Protamex1.5L水解罗非鱼皮2 h的酶解产物具有最高的Ca~(2+)结合率(87.79%);3种罗非鱼皮酶解产物均存在抗氧化性,其中Protamex1.5L酶解罗非鱼皮产物的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率、·OH自由基清除率和还原力最高分别为51.46%、17.26%和0.09;罗非鱼皮酶解物(TSH)结合Ca~(2+)后,钙离子结合物(TSH-Ca)的DPPH自由基清除率和羟基自由基清除率减弱,还原力增强;FTIR分析结果表明了Ca~(2+)与TSH中氨基氮原子和羰基氧原子发生了结合。     

响应面法优化末水坛紫菜蛋白酶解工艺及其酶解液抗氧化活性研究

为实现末水坛紫菜(Porphyra haitanensis)的高值化利用,研究了末水坛紫菜的蛋白酶解工艺及其酶解液的抗氧化活性。以酶解产物水解度和还原力为指标,分别采用单因素和响应面优化实验筛选出最适蛋白酶和最佳酶解工艺参数;通过测定酶解液还原力对1,1-二苯基-三硝基苯肼(DPPH)自由基、羟自由基(·OH)和超氧阴离子自由基(O_2^-·)的清除作用,研究了最高水解度下的酶解液的抗氧化性活性。结果表明,中性蛋白酶是6种蛋白酶中的最适用酶;最佳酶解条件为:底物质量浓度35 g·L^-1、加酶量31 200 U·g^-1、温度45℃、pH 7.6、酶解时间5 h,在此条件下坛紫菜水解度达31.37%;酶解液还原力为2.2,对DPPH、·OH和O_2^-·自由基清除率分别为56.26%、85.84%和72.73%。结果表明,中性蛋白酶可以有效水解末水坛紫菜,水解后的酶解产物具有较好的抗氧化能力和应用前景。     

菲律宾蛤仔酶解产物的抑菌活性

以菲律宾蛤仔为原料,比较其胃蛋白酶、酸性蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解产物的抑菌活性;利用正交实验优化抑菌活性最强的酶解产物的制备工艺,并测定最优酶解条件下酶解产物的相对分子质量分布。结果表明,菲律宾蛤仔胃蛋白酶酶解产物的抑菌活性最强,对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和副溶血弧菌均有一定的抑菌活性,其中对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的抑菌活性较高,对四联微球菌则未见明显的抑菌活性。胃蛋白酶的最优酶解工艺条件为：酶解时间2h,温度35℃,pH 2.0,加酶量3 000U/g,料水比1∶4;该条件下酶解产物的相对分子质量主要分布在5000以下。     

添加外源酶类对腌制罗非鱼品质的影响

该研究利用中性蛋白酶、Protamex1.5L和碱性蛋白酶酶解罗非鱼 (Oreochromis mossambicus) 鱼皮,研究了各种酶解产物对钙离子 (Ca²⁺) 的结合能力,比较了酶解物结合Ca²⁺后的抗氧化能力,并分析了结合物的傅里叶红外光谱 (FT-IR)。结果显示,Protamex1.5L水解罗非鱼皮2 h的酶解产物具有最高的Ca²⁺结合率 (87.79%);3种罗非鱼皮酶解产物均存在抗氧化性,其中Protamex1.5L酶解罗非鱼皮产物的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率、·OH自由基清除率和还原力最高分别为51.46%、17.26%和0.09;罗非鱼皮酶解物 (TSH) 结合Ca²⁺后,钙离子结合物 (TSH-Ca) 的DPPH自由基清除率和羟基自由基清除率减弱,还原力增强;FT-IR分析结果表明了Ca²⁺与TSH中氨基氮原子和羰基氧原子发生了结合。

     

北极参多肽酶解工艺优化

北极参(Cucumaria frondosa)营养价值高,体壁质厚,有极高的开发成多肽产品的潜能。本文以北极参为原料,研究最优酶解工艺。基本成分测定结果显示,北极参蛋白质含量95.03%,脂肪1.76%,灰分2.47%。以酶解液中多肽得率为检测标准,通过枯草杆菌中性蛋白酶与风味蛋白酶组成复合酶进行酶解,通过单因素试验与正交试验,优化加酶量、酶解时间、温度与pH,确定最优酶解工艺;正交试验结果显示北极参的最优酶解工艺为:酶解温度为50℃、pH为8.0、料液比1:5、酶解时间为5h、加酶量为2.09%,多肽得率为15.38%;酶解产物的氨基酸组成结果表明氨基酸总量占干重约85%;通过Sephadex G-50对北极参酶解液的多肽分子量进行分析,结果显示分子量范围在1080~12052 Da。