珠江口万山群岛黄鳍棘鲷食性随年龄的变化特征

黄鳍棘鲷(Acanthopagruslatus)是我国东南沿海地区分布的特色经济鱼类和增殖放流鱼类,研究黄鳍棘鲷的食性变化特征有助于了解其的食物来源及其在食物网中的功能地位。通过胃含物形态学和18SrRNA基因高通量测序的方法分析了万山群岛海域不同年龄(1～3龄)黄鳍棘鲷的食性变化特征。形态学鉴定发现黄鳍棘鲷胃含物中有贝类、蟹类和食糜。18S rRNA基因高通量测序共鉴定出黄鳍棘鲷胃含物中有真核生物16门84种,黄鳍棘鲷主要的食物来源为节肢动物门的锈斑蟳(Charybdis feriatus)和腹针胸刺水蚤(Centropages abdominalis),软体动物门的变化短齿蛤(Brachidontesvariabilis),脊索动物门的圆吻海鰶(Nematalosanasus),红藻门的条斑紫菜(Neopyropia yezoensis),其共占总食物来源的66.73%。万山群岛黄鳍棘鲷主要以动物性饵料为食,对植物性饵料的摄食相对较少。对1～3龄黄鳍棘鲷食性的研究发现,随着年龄的增加,黄鳍棘鲷的主要摄食种类逐渐由节肢动物门和软体动物门转向脊索动物门,摄食的生物物种数量逐渐减少。研究...     

黄鳍鲷精子活力以及超微结构的初步研究

本文对黄鳍鲷精子活力进行了初步探讨。发现黄鳍鲷精子在不同的盐度下其运动和存活时间有所不同，在20‰—25‰的盐度下活力最大、存活时间最长。通过对精子的超微结构观察，发现大多数精子细胞只是在其颈部有一个线粒体，且该线粒体的结构非常复杂，这些结果与淡水硬骨鱼类的     

黄鳍棘鲷线粒体D-loop序列的遗传结构

为探明分布于我国华南沿海的黄鳍棘鲷群体的遗传多样性与遗传分化状况,实验采用线粒体控制区(D-loop)基因序列分析华南沿海的厦门、汕尾、阳江、海口、三亚、北海、钦州和防城港8个地理位置的黄鳍棘鲷群体的遗传多样性及群体遗传结构.结果 显示,黄鳍棘鲷8个群体320条D-loop序列全长为947～958bp.共检测到29个插...     

黄鳍棘鲷家系亲缘关系鉴定

为了建立黄鳍棘鲷微卫星亲子鉴定技术,利用荧光引物和自动测序技术检测了自主开发的12对微卫星分子标记在505尾黄鳍棘鲷个体中的遗传多态性,并构建了亲子鉴定技术。结果显示,该研究中筛选的12个微卫星标记共检测到119个等位基因,平均等位基因数(N_a)为9.91,平均观测杂合度(H_o)为0.651,平均期望杂合度(H_e)为0.661,平均多态性信息含量(PIC)为0.621,具有丰富的多态性。此外,运用Cervus 3.0软件对已知系谱信息的112尾黄鳍棘鲷亲本和393尾子代个体进行模拟分析,结果显示,当双亲未知且置信度为95%时,12个标记的累积排除概率达99.58%;当微卫星标记数量为8时,累积排除概率达到99.1%。因此确定AL49、AL37、AL01、AL20、AL14、AL18、AL15和AL51共8个多态性较高的微卫星标记为黄鳍棘鲷微卫星亲子鉴定的核心体系。在双亲性别未知的情况下,其双亲的累积排除率为99.1%。根据黄鳍棘鲷子代的实际基因分型数据,实际鉴定率为89.31%。该研究构建的微卫星标记组合能为黄鳍棘鲷不同...     

云纹石斑鱼精子冷冻保存

以云纹石斑鱼精液为实验材料,对精子稀释液、抗冻剂种类和适宜浓度、冷冻保存液进行了筛选。结果表明,利用9g/L NaCl、10g/L KHCO3和10%小牛血清配制而成的稀释液EM1-2适宜于云纹石斑鱼精子冷冻保存,以2ml冷冻管为精子容器,在60L液氮生物保存罐中冷冻保存精子,冷冻解冻精子活力可达56.67%±5.77%,要优于TS-2、ES1-3和其他EM系列稀释液冷冻保存精子活力。利用EM1-2为基础液对抗冻保护剂进行筛选,结果显示,10%~20%的二甲基亚砜(DMSO)和1-2-丙二醇(PG)冷冻保存后精子活力无显著差异(P0.05),其中15%的DMSO和10%PG冷冻保存精子效果最优,解冻后精子活力分别可达54.52%±7.81%和57.24%±3.69%。利用冷冻保存1年的精液与云纹石斑鱼卵进行受精,受精率和孵化率均达到80%以上,与新鲜精子无显著性差异(P0.05)。本研究表明,利用EM1-2配制15%的DMSO或10%的PG可用于冷冻保存云纹石斑鱼精液。在此基础上,建立了精子冷冻库,保存精子130ml,为人工繁育和杂交育种提供了丰富的精子源。     

黄鳍棘鲷血清IgM的纯化及兔抗血清的制备

分别采用Sepharose-6B凝胶过滤层析、Phenyl Sepharose FF疏水作用层析和rProtein A Sepharose亲和层析技术纯化黄鳍棘鲷（Acanthopagrus latus）血清IgM,并将这3种层析纯化方法进行了比较。纯化产物进行SDS—PAGE,电泳结果扫描后经Band Scan5．0软件分析显示,单独使用Sepharose-6B凝胶过滤层析或Phenyl Sepharose FF疏水作用层析得到的IgM纯度只有56％左右;二者联合使用纯度可以达到69％,而rProtein A Sepharose亲和层析一步就可以达到89％的纯度;纯化得到的黄鳍棘鲷血清IgM的重链和轻链分子量分别为73．6kD和26．5kD。本研究还以rProtein A Sepharose亲和层析纯化的黄鳍棘鲷血清IgM为抗原,制备其兔抗血清,采用Western Blot和双向琼脂扩散检测抗血清免疫学活性,并用间接ELISA检测其效价达到1：25600,为进一步开展黄鳍棘鲷免疫学方面的研究奠定了基础。     

瓦氏黄颡鱼精子的生理特性及其超低温冷冻保存的初步研究

对瓦氏黄颡鱼(Pelteobagrus vachelli)精子在不同盐度和pH下的精子活力进行观察,同时研究了精子在4种不同稀释液与2种不同浓度抗冻剂组成的保存液中的超低温冷冻保存,并开展了冻精的授精实验。结果表明,瓦氏黄颡鱼精子浓度为(2.035±0.179)×1012cell·mL-1,在盐度为5.8、pH为7.17时,精子的活力都高达95%。以A液作为稀释液、10%甲醇作为抗冻剂时,冷冻保存精子效果最好,解冻后精子活力为(81.7±0.9)%。用解冻后的精子进行人工授精,获得的受精率为(88.4±2.1)%,孵化率为(74.0±0.8)%;而鲜精受精率为(91.0±0.8)%,孵化率(82±1.6)%,冻精与鲜精均无显著性差异。人工授精实验证明了解冻后的精子能正常用于该鱼的人工繁殖。     

黄鳍棘鲷重组IL-1β的表达及生物学活性检测

将扩增得到的黄鳍棘鲷Acanthopagrus latus白细胞介素1β（Interleukin 1β,IL-1β）基因克隆到表达载体pQE30,并转化到大肠杆菌M15中进行表达。采用Ni^2＋-Chelating Sepharose FF层析对重组蛋白进行纯化,并用梯度透析对纯化蛋白进行复性。经SDS-PAGE和Western Blot分析,获得了分子量为21kD的重组白细胞介素1β（Recombinant Interleukin 1β,rIL-1β）。采用Percoll不连续密度梯度离心分离黄鳍棘鲷头肾白细胞,在分离液密度1．080g／ml的界面上可以有效富集白细胞。用不同终浓度的rlL-1β和5μg／ml脂多糖（LPS）刺激培养的黄鳍棘鲷头肾白细胞,23℃培养4h后提取细胞的总RNA,经RT-PCR半定量检测,当培养基中rIL-1β的浓度达到20ng／ml时可以提高IL-1β基因的转录水平,与5ug／ml LPS的刺激效果相当,表达的重组蛋白表现出很好的生物学活性。     

黄鳍棘鲷幼鱼对不同开孔形状和直径的人工鱼礁模型的行为响应

为了分析岩礁性鱼类在不同开孔形状及不同开孔大小下的趋礁行为及空间分布,以黄鳍棘鲷(Acanthopagrus latus)幼鱼为研究对象,观察了不同开孔形状(菱形、圆形、正方形)、不同开孔大小(2.5、5、7.5、10cm)人工鱼礁对鱼类的行为影响,并通过行为分析软件LoliTtrackVersion5对黄鳍棘鲷幼鱼的平均速度、平均加速度、平均转弯速度、活动时间百分比以及平均分布坐标位置进行分析。结果表明,在放入人工鱼礁后黄鳍棘鲷幼鱼在礁区的平均分布率有明显上升,幼鱼在菱形开孔实验组人工鱼礁区的平均分布率最高,为(27.32±4.93)%,其次为正方形和圆形开孔实验组,分别为(25.48±3.41)%和(19.83±5.59)%。另外开孔大小为7.50 cm的实验组中,黄鳍棘鲷幼鱼在VI区的平均分布率最高,为(29.18±4.75)%;开孔大小为2.50 cm和5.00 cm的实验组中在VI区的平均分布率次之,分别为(23.45±3.86)%及(23.04±5.51)%;开孔大小为10.00 cm的实验组最低,为(21.17±5.14)%。在运动能力方面,黄鳍棘鲷幼鱼的平均速度、平均加...     

鱼类精子超低温冷冻保存技术及其应用

鱼类精子的超低温冷冻保存对鱼类种质资源保护、低温生物学、遗传育种和水产养殖业都具有重要的意义。鱼类精子超低温冷冻保存技术主要包括冷冻保存方法、抗冻保护液、降温、解冻速率、冷冻保存温度、抗冻剂去除等过程。本文就鱼类精子超低温冷冻保存技术及其应用进行了综述。     

横带髭鲷精子超微结构及其生理特征

为探究横带髭鲷(Hapalogenys mucronatus)精子形态和生理特性, 以提高人工繁殖的受精率, 利用扫描电子显微镜和透射电子显微镜观察其精子结构, 并设置不同梯度的盐度、pH 和温度, 探讨横带髭鲷精子快速运动时间、寿命与环境因子的关系。结果表明: 横带髭鲷精子由头部、中部和鞭毛3 段组成, 精子头部呈近球形或椭球形, 头部直径为(1.56±0.05) μm, 细胞核中染色质高度浓缩, 核膜紧贴于质膜, 无顶体; 中段主要由袖套腔与中心粒复合体构成; 鞭毛细长有侧鳍, 为典型“9+2”微管结构。横带髭鲷精子的适宜盐度范围为22~28, 盐度为26 时精子寿命达到最大值425 s; 适宜pH 范围为7~10, 在pH 为7 时, 精子活力最强, 精子寿命达到最大值430 s; 适宜温度范围18~26 ℃, 在水温为22 ℃时精子寿命最长, 为427 s。综上所述, 建议横带髭鲷卵子和精子受精时的最佳水环境盐度为24~26、pH 为7~8、温度为20~22 ℃。     

舟山海域4种鲷科鱼类线粒体Cyt b基因全序列克隆分析

克隆测序了分布于舟山海域的真鲷（Pagrus pagrus）、黑鲷（Sparus macrocephalus）、黄鳍棘鲷（Acanthopagrus latus）和二长棘鲷（Parargyrops edita）4种鲷科鱼类的线粒体Cyt b基因1 141 bp的全序列。通过对4种鲷科鱼类Cyt b基因序列的比对分析,发现了292个核苷酸变异位点,其中存在186个信息位点,序列中的转换大于颠换,碱基替换多发生于密码子第3位。遗传距离分析表明,4种鲷科鱼类的遗传差异在0.096 7~0.227 5之间,其中真鲷与二长棘鲷之间遗传距离最小,为0.096 7,黄鳍棘鲷与二长棘鲷的遗传距离最大,为0.227 5;序列变异的转换/颠换比值在2.293 0~7.358 7之间。以25种鲈总科鱼类构建的系统树表明鲷科鱼类与其他科的鱼类存在较远的遗传亲缘关系。     

鱼类精子冷冻保存研究进展

鱼类精子的长期保存对于遗传育种、生物多样性保护、濒危物种保护、渔业可持续发展具有重要意义,引起了人们越来越广泛的关注和重视.低温生物学的不断研究和发展为精子的长期稳定保存提供了理论和技术方面的支持.近年来鱼类精子的冷冻保存在保存原理和技术方面都取得了极大的成就,实现了多种鱼类精子冷冻保存的技术突破,并对冷冻保存的原理、冷冻损伤机制等方面有了更深刻的认识,在冷冻精子的生产应用方面也越来越趋于成熟稳定.本文仅针对鱼类精子冷冻保存的研究现状及发展前景作以阐述,以期对更加深入广泛的研究工作有所帮助.     

畜禽冷冻精液稀释液的研究进展

畜禽精液冷冻保存是人工授精技术的一个重大发展。在精液冷冻保存中稀释液起关键作用。稀释液通过粘附到精子膜上,保护膜结构,增加膜流动性,调低精子对冷休克的易感性,增加了精子冻存能力及解冻后精子活力。     

不同稀释液对香港牡蛎精子冷冻保存效果的研究

分别以生理盐水、柠檬酸钠-甘氨酸液、海水、KCl-NaCl溶液、Hank’s液、D-Hank’s液为稀释液,不同浓度二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)及海藻糖为抗冻剂,研究超低温冷冻保存香港牡蛎(Crassostrea hongkongensis)精子方法及不同浓度含氨海水对复苏精子的激活效果,以筛选出最适宜精子冷冻保存的稀释液和抗冻剂及其浓度。结果显示,柠檬酸钠-甘氨酸液为稀释液复苏后精子成活率最高,为(82.90%±0.19%);其次是生理盐水(77.57%±0.49%)、D-Hank’s液(72.22%±0.36%)、Hank’s液(70.00%±0.28%)。氨海水终浓度为0.0313%时,复苏后精子活力最强,柠檬酸钠-甘氨酸溶液为稀释液精子活力为(61.25%±3.06%),生理盐水为稀释液精子活力为(68.70%±0.74%)。以生理盐水为稀释液、DMSO浓度为14%冷冻保存时,复苏精子存活率最高,含海藻糖精子存活率为(86.91%±3.14%),不含海藻糖精子存活率为(81.81%±3.68%),以柠檬酸钠-甘氨酸液为稀释液、DMSO浓度为12%时,复苏后精子存活率最高,含海藻糖的为(79.62%±1.95%),不含海藻糖的为(70.58%±2.41%)。     

舟山海域4种鲷科鱼类线粒体Cytb基因全序列克隆分析

摘要：克隆测序了分布于舟山海域的真鲷（Pagrus pagrus）、黑鲷（Sparus macrocephalus）、黄鳍棘鲷（Acanthopagrus latus）和二长棘鲷（Parargyrops edita）4种鲷科鱼类的线粒体Cytb基因1141bp的全序列。通过对4种鲷科鱼类Cytb基因序列的比对分析,发现了292个核苷酸变异位点,其中存在186个信息位点,序列中的转换大于颠换,碱基替换多发生于密码子第3位。遗传距离分析表明,4种鲷科鱼类的遗传差异在0．0967～0．2275之间,其中真鲷与二长棘鲷之间遗传距离最小,为0．0967,黄鳍棘鲷与二长棘鲷的遗传距离最大,为0．2275;序列变异的转换／颠换比值在2．2930～7．3587之间。以25种鲈总科鱼类构建的系统树表明鲷科鱼类与其他科的鱼类存在较远的遗传亲缘关系。     

鲷科鱼类精子超低温保存技术

鲷科鱼类精子超低温保存研究始于80年代，现已进行黑鲷Sparus macrocephalus (Bssilewsky)、真鲷Pagrosamus major(Temmminck et Schleget)、日本犁齿鲷Evynnis japonica Tanaka和黄鳍鲷Sparuslatns Houttuyn的精子超低温保存。     

鲷科鱼类种质资源与利用

近日,中国水产科学研究院南海水产研究所完成了“鲷科鱼类种质资源与利用”科技项目,并通过了由广东省海洋与渔业局组织的鉴定。该项目采用RAPD,AFLP、线粒体控制区序列分析等技术研究了我国近海黄鳍棘鲷、二长棘犁齿鲷、黑棘鲷、黄牙鲷和真赤鲷的遗传多样性和种群遗传结构;采用RAPD技术、线粒体cyt—b基因序列分析等方法研究了我国近海主要鲷科鱼类的亲缘关系和分子系统;     

刀鲚精子超低温冷冻保存技术的研究

本文对刀鲚精子的超低温冷冻保存技术进行了研究.以解冻后精子的运动力为参数,分别探讨了不同的稀释液、不同种类不同浓度的保护剂、不同的平衡时间以及不同的稀释比例对刀鲚精子进行超低温冷冻保存的保护效果.结果显示:采用D-15稀释液,将精液和稀释液按1:2稀释,4℃平衡20 rmin,加入10％ DMSO,混匀后液氮面上方6 cm处平衡10 min,接着在液氮面上平衡5 min,最后投入液氮中保存,一周后,液氮蒸气中平衡5min,37℃水浴解冻,活力效果最佳,达70％左右.     

鲑鳟鱼类精子超低温保存研究进展

鱼类精子超低温冷冻保存技术发展至今已有60年的历史,取得了巨大的成就,尤其在鲑科鱼类的精液冷冻保存及应用方面。经过统计发现,国外学者在精子超低温冷冻方面取得的主要突破都集中在鲑鳟鱼类领域。本文综述了鲑鳟鱼类精子超低温保存技术的发展史、相应的关键技术和冷冻保存研究的意义、基本生物学原理以及有关精液冷冻保存的研究现状与进展。