植物根围外来微生物定殖的检测方法

检测植物根围微生物定殖情况的方法分为可培养的微生物和不能培养的微生物两种.传统做法是用培养方法检测投入到根围的微生物;而现在逐渐注重研究对于不可培养土壤微生物定殖的检测.综合检测方法有四种：天然抗生素抗性的标记;外来基因标记;DNA和RNA探针以及免疫学方法.前两种方法往往结合在一起应用于可培养的根围外来微生物的检测;而后二者可用于检测可培养的或不可培养的根围微生物包括活细胞或死细胞.根围不能培养的微生物已逐渐由于土壤DNA文库的建立而能被检测.     

淡紫拟青霉E7菌株在海南白木香根际的定殖

通过田间试验,确定了淡紫拟青霉E7菌株在白木香根际的生长和定殖情况.试验结果表明,淡紫拟青霉E7菌株以孢子液浇灌和固体发酵物拌土施入,其定殖量差异明显;固体发酵物拌土形式较利于淡紫拟青霉E7菌株孢子在根际土壤中长期存活.当固体发酵物施入量为40g/株、时间为18 d、施人深度为25 cm时,淡紫拟青霉E7菌落数最多、为8.55x106个/g.     

黄瓜PGPR菌株根部定殖的扫描电镜研究

扫描电镜观察植物根际促生细菌(PGPR)菌株在限菌状况下黄瓜根部的定殖，结果显示根部定殖具宏观不均匀性，只在根面的少部分能够定殖，即存在有利于PGPR生长繁殖的生态位点；供试PGPR菌株在根部的扩展方式主要有2种：由根尖的被动携带和随根表水膜转移。     

铜绿假单胞菌脂肪酶Lipase基因的原核表达(英文)

[Objective] The aim of this study was to investigate the prokaryotic expression of pseudomonas aeruginosa Lipase gene.[Method]Lipase gene was amplified by PCR from the genome DNA of pseudomonas aeruginosa,and its nucleotide sequence was determined.The prokaryotic expression vector of Lipase gene was constructed by the gene recombination technique.The protein expression was induced for 4 hours by IPTG with the final concentration of 1.0 mmol/L,and then SDS-PAGE electrophoresis was analyzed.[Result]The sequence of mature peptides in Lipase gene cloned from pseudomonas aeruginosa had a 99.36% homology with that of pseudomonas aeruginosa lipase submitted in NCBI,so the prokaryotic expression vector of Lipase gene pET32a-Lip was successfully constructed.Furthermore,the results of SDS-PAGE electrophoresis showed that the target gene was expressed highly and effectively.[Conclusion]The cloned pseudomonas aeruginosa lipase with its signal peptide could be normally expressed in E.coli and also used for further study.     

内生木霉P3.9菌株在枇杷根际土壤中的定殖能力测定

采用土壤稀释分离法与平板计数法测定内生木霉P3.9菌株在枇杷根际土壤中的种群密度,跟踪测试90 d内其在枇杷根际土壤中的定殖动态,结果表明,P3.9菌株在枇杷根际土壤中的定殖过程大致可划分为3个阶段,前25 d内,菌株相对含量以10 d为1个周期呈增减增减变化趋势,且于10 d时达到最大值,为9.52×10~5 CFU/g,该时期木霉P3.9菌株在根际土壤中快速适应并定殖存活;25～65 d期间,P3.9菌株相对含量的变化周期延长至20 d,也呈增减增减变化趋势,且波动幅度较5～25 d期间小,该时期木霉能够相对稳定地定殖存活于根际土壤中;65～90 d期间,P3.9菌株相对含量在65～75 d期间出现小幅度增加后呈近直线状下降态势;5～75 d期间,P3.9菌株相对含量维持在10~5 CFU/g水平上,且75 d时较接种量只下降1个数量级,说明木霉P3.9菌株在枇杷根际土壤中的持效期可达75 d。     

枯草芽孢杆菌BS-208和BS-209菌株在番茄叶面及土壤中定殖能力的研究

对拮抗枯草芽孢杆菌BS-208和BS-209在番茄叶面和土壤中的定殖情况进行了研究。结果表明,在温室和田间条件下,BS-208菌株的定殖菌量分别为11×108～5 6×108cfu/g鲜叶和15×108～0 02×108cfu/g鲜叶,BS-209菌株的定殖菌量分别为222×106～55×106cfu/g鲜叶和205×106～0 48×106cfu/g鲜叶;扫描电镜观察表明,BS-208菌株在番茄叶面分布不均匀,大多定殖于伤口周围、叶面的凹陷处和绒毛的根部;并且都能够在自然土和灭菌土中定殖,自然土中的菌量低于在灭菌土中的菌量。     

放线菌153菌株的定殖和促生效果研究

研究放线菌菌株153对番茄和茄子的促生效果、基本促生机制以及在植株体内的定殖规律。结果表明,不同菌液浓度的153发酵菌液对种子萌发和芽的生长均具有促进作用,且对植株的生长性状有明显的影响,对植株鲜质量和干质量的影响最显著,鲜质量和干质量分别比对照增加114.69%、99.75%和124.06%、96.60%。放线菌菌株153在番茄、茄子根际及体内都可稳定定殖;14~30 d之间,153在植株根内及茎内的定殖数量随时间推移基本不变,菌量分别保持在104和103cfu/g。放线菌153可通过定殖提高植株体内的叶绿素含量以及根系还原强度而促进番茄和茄子的生长。     

拮抗菌B501在草莓根际的定殖及对其他根际微生物的影响

对B501在草莓根际的定殖范围，群体数量的动态变化及对其他根际微生物种群与数量的影响进行了研究，结果表明，B501主要定殖于草莓根际与根表，B501的群体数量随草莓的生长呈动态变化，在根际，B501的数量水平以盛花期最高，在根表，数量水平呈渐增趋势，B501对草莓根际与根系可培养丝状真菌群体数量，对根系细菌总量的影响不显著，对根际细菌总量、根际与根系芽孢杆菌的数量有明显促进作用，连续两年的田间防效分别达到了93．9％和96．8％。     

利用GFP标记研究秸秆还田对假单胞菌PW9土壤定殖能力的影响

[目的]本文利用GFP标记系统研究秸秆还田对假单胞菌PW9土壤定殖能力的影响.[方法]将可产生绿色荧光蛋白(GFP)的质粒pBBR1MCS2-Tac-EGFP电转化至假单胞菌PW9中,通过抗生素鉴定及质粒检测,获得了能够产生稳定的强烈绿色荧光且具有较高解磷能力的标记菌株PW9-gfp,并以此为试验菌株进行土壤定殖能力研...     

萤光假单胞菌根部定殖对水培系统中香石竹生长的影响

 用筛选的萤光假单胞细菌(fluorescent Pseudomonas spp.)菌株WCS X.13,WCS417和WCS 358处理栽培于水培系统中不同香石竹栽培品种的根部,试验结果表明,在通气的三角烧瓶培养中,香石竹品种Pallas经WCS X.13菌株处理后根长、根重显著高于对照,植株鲜重相对增长率高于对照40%;经WCS417菌株处理根长高于对照,香石竹品种Lena经WCS 417菌株处理植株鲜重相对增长率高于对照32%,在营养膜培养中,在人工接种病原菌Fusarium oxysporum f.sp.dianthi的条件下,中抗品种Pallas经试验菌株处理根部6周以后,植株(根上部)鲜重均高于对照,表现促进植株生长的趋势。     

铜绿假单胞菌脂肪酶Lipase基因的原核表达

[目的]对铜绿假单胞菌脂肪酶Lipase基因进行原核表达。[方法]利用PCR方法从铜绿假单胞菌基因组DNA中扩增得到脂肪酶基因,测定其核苷酸序列,利用基因重组技术构建脂肪酶基因的原核表达载体,加IPTG至终浓度为1.0 mmol/L诱导蛋白表达4 h,并进行SDS-PAGE电泳。[结果]从铜绿假单胞菌中克隆的脂肪酶基因成熟肽的序列,与NCBI上所递交的铜绿假单胞菌脂肪酶序列同源性很高,达99.36%。成功构建了脂肪酶基因的原核表达载体pET32a-Lip,进一步SDS-PAGE电泳结果显示目的基因得到高效表达。[结论]克隆的铜绿假单胞菌脂肪酶带有自身的信号肽,也可以在大肠杆菌中正常表达,可以用于进一步的研究。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药性的检测与分析

目的分析我院耐亚胺培南铜绿假单胞菌(IRPA)的发生率及对其他抗生素耐药性的变迁。方法收集我院2002年1月至2007年12月分离的铜绿假单胞菌的药物敏感试验结果。结果2005-2007年间IRPA检出率(40.2%)明显高于2002-2004年(29.5%)(P<0.01),其中痰标本中分离的菌株最多。2002-2004年IRPA对β-内酰胺类、喹诺酮类和氨基甙类均耐药,2005-2007年IRPA对庆大霉素和头孢哌酮舒巴坦的耐药性显著上升(P<0.01)。结论IRPA发生率呈上升趋势,其对多种抗生素的耐药性也有上升趋势,提示在临床上合理应用抗生素极为重要。     

铜绿假单胞菌主动外排系统与耐药性关系的研究

铜绿假单胞菌是一种重要的院内感染条件致病菌,常感染癌症患者、烧伤患者等机体免疫力低下的患者,它对多种不同理化性质的药物高度耐药,其主动外排系统在耐药性中起主要作用.主要研究了铜绿假单胞菌主动外排泵的类型、组成及对抗生素耐药性的影响.     

铜绿假单胞菌脂肪酶基因(LipA)在枯草芽孢杆菌pab02中的整合表达

对铜绿假单胞菌脂肪酶基因(Lip A)进行克隆,构建整合表达质粒pHSG398–16S–lip A,并在枯草芽孢杆菌pab02中整合表达。根据铜绿假单胞菌Lip A基因设计引物,扩增Lip A基因,并进行测序,构建整合表达质粒pHSG398–16S–lip A,转化枯草芽孢杆菌pab02,并对转化后的阳性菌株进行诱导表达。结果显示,成功从铜绿假单胞菌A05菌株中扩增到长1 092 bp的Lip A基因,该基因与铜绿假单胞菌Lip A基因(登录号为AB290342)的同源性高达98%;该基因共编码311个氨基酸(aa),包含26个aa组成的信号肽和285个aa组成的成熟肽;成功构建了整合表达质粒pHSG398–16S–lip A,并将Lip A整合到枯草芽孢杆菌pab02染色体上,获得了重组枯草芽孢杆菌pab02–lip A;SDS–PAGE分析结果表明,脂肪酶蛋白得到了有效表达,该蛋白的相对分子质量约为37 000。     

铜绿假单胞菌呼吸机相关肺炎的临床特点与防治对策

目的：探讨铜绿假单胞菌(PA)呼吸机相关肺炎(VAP)的临床特点与防治对策。方法：对36例由PA所致VAP的患者进行回顾性分析。结果：PA—VAP的临床特点与其它肺炎相似，但病情较重，并发症多，易发生多器官功能衰竭(MSOF)．病死率高。PA对多种抗生素产生耐药，而对泰能、舒普深、头孢他啶仍有较高的敏感性。治疗好转率52．8％，病死率41．7％。结论：PA耐药菌株多，合理使用抗生素及加强各环节的严格消毒，对PA—VAP的防治十分有益。     

铜绿假单胞菌结合生物熏蒸防控辣椒疫病的效果

为找到防治由疫霉菌(Phytophthora capsici)引起的辣椒疫病的有效方法,首先研究了生物熏蒸过程中土壤微生物数量变化。结果发现在生物熏蒸第7 d时,土壤疫霉和真菌数量显著低于不加菜粕病土(对照),分别降低了20%和68%;而细菌和放线菌数量显著高于对照,分别增加了40%和49%;7 d后生物熏蒸处理和对照土壤中疫霉数量逐渐增加,说明生物熏蒸的最佳时间为7 d。为了增强生物熏蒸的防病效果,通过平板试验筛选了1株既可以拮抗辣椒疫霉又可以抵抗由菜粕降解释放的挥发性杀生气体的铜绿假单胞菌,然后将菜粕与铜绿假单胞菌菌株同时施入土壤中进行7 d的生物熏蒸盆栽试验。发现与生物熏蒸处理相比,生物熏蒸结合铜绿假单胞菌处理的土壤中假单胞菌数量显著增加了401%,疫霉菌的数量显著降低了72%,辣椒疫病的发病率降低了8%。表明生物熏蒸结合施用拮抗菌是一种环保的防控辣椒疫病方法。     

玉米细菌性茎腐病组织中一株新的铜绿假单胞杆菌的分离鉴定

为了明确导致河南省郑州市玉米细菌性茎腐病的病原菌,对从玉米细菌性茎腐病样品中分离得到的病原菌进行了纯化培养、形态学观察、致病性测定、生理生化特征分析和16S rDNA的遗传关系分析等研究。结果表明,所分离的菌株（YM02）为革兰氏阴性致病菌,能利用多种糖（醇）化合物产酸,但可使阿拉伯半乳聚糖产碱。YM02与国内外分离的铜绿假单胞杆菌（Pseudomonas aeruginosa）菌株16S rDNA的序列相似性均在99%以上,故将其命名为Pseudomonas aeruginosa菌株YM02,该菌与Pseudomonas aeruginosa菌株ANSC、S164S、S167S（2）和CS\|2菌株遗传关系最近,该病原菌的分离和鉴定为玉米细菌性茎腐病的防治提供了基础资料。     

铜绿假单胞菌FJAT-346对番茄枯萎病的生防作用

为明确铜绿假单胞菌FJAT-346菌株在植物病害生物防治中的实用价值,对该菌株的抑菌谱及其对番茄枯萎病的生防效果和机理进行了研究。结果表明:FJAT-346菌株对香蕉、番茄、西瓜、甜瓜枯萎病菌、番茄灰霉病菌、油菜菌核病菌等均有良好的离体拮抗效果。该菌株对番茄枯萎病的盆栽防效可达81.57%。FJAT-346菌株能使番茄枯萎菌菌丝扭曲变形、细胞壁破裂、纠集成团停止生长,但对孢子萌发的抑制作用不大。FJAT-346产生的抑菌物质可以被饱和度为70%的硫酸铵完全沉淀下来,初步判断该物质为大分子蛋白。在盆栽试验中,FJAT-346菌悬液对番茄出苗具有显著的促进作用,对番茄苗株高、根长和鲜重也有不同程度的促进作用。