猪伪狂犬病毒免疫机制简述

<正>猪伪狂犬病是由猪伪狂犬病毒引起的包括猪、羊、牛等动物的共患传染性疾病。伪狂犬病病毒(PRV)又称奥耶斯基病病毒或猪I型疱疹病毒,与人单纯疱疹病毒(HSV-1)以及带状疱疹病毒(VZV)同属α疱疹病毒。早在1813年,国外就出现了关于伪狂犬病的报道,初期称之为"奇痒病"。猪伪狂犬病毒只有一个血清型,但是不同毒株之间的生物学特性和毒力存在差异。本文简要介绍了猪伪狂犬病毒免疫机制。     

一例猪伪狂犬病的诊断与防治

猪的伪狂犬病是由狂犬病病毒（PRV）引起的一种危害严重的急性败血性传染病。本文对某养殖户的病死猪进行临床症状观察,病理剖检及实验室诊断,通过病毒分离及鉴定,确诊病死猪为伪狂犬病毒感染。鉴于养殖户中该病的存在及对养猪业的危害,建议加强对猪伪狂犬病的诊断、防控及净化。     

南京地区1株猪伪狂犬病毒的分离与鉴定

于2013年从南京某猪场送检发病仔猪脏器中分离获得1株病毒。病样组织液上清经BHK细胞分离培养后,利用PCR和间接免疫荧光反应进行鉴定,PCR可以扩增出PRV gE基因的全长片段,且在间接免疫荧光检测中呈现阳性荧光反应。将命名为NJ株的分离病毒接种家兔,被接种的家兔很快出现瘙痒、死亡等伪狂犬病症状。与以往发表的伪狂犬病毒gE基因序列比对及进化树分析结果显示,分离株属于一个相对独立的分支。由中国兽药监察所提供的伪狂犬病阳性血清对分离株有一定的中和能力。根据实验结果推测,南京某猪场流行的伪狂犬病毒存在一定的抗原变异。     

南京地区1株猪伪狂犬病毒的分离与鉴定

于2013年从南京某猪场送检发病仔猪脏器中分离获得1株病毒。病样组织液上清经BHK细胞分离培养后,利用PCR和间接免疫荧光反应进行鉴定,PCR可以扩增出PRV gE基因的全长片段,且在间接免疫荧光检测中呈现阳性荧光反应。将命名为NJ株的分离病毒接种家兔,被接种的家兔很快出现瘙痒、死亡等伪狂犬病症状。与以往发表的伪狂犬病毒gE基因序列比对及进化树分析结果显示,分离株属于一个相对独立的分支。由中国兽药监察所提供的伪狂犬病阳性血清对分离株有一定的中和能力。根据实验结果推测,南京某猪场流行的伪狂犬病毒存在一定的抗原变异。     

猪圆环病毒和猪伪狂犬病毒混合感染的诊治

猪圆环病毒和猪伪狂犬病毒都是猪易感的病毒性传染病,猪圆环病毒是一种免疫抑制病毒,可以干扰疫苗的免疫效果,猪伪狂犬病毒主要引起猪发热和脑脊髓炎,各种年龄的猪都易感,感染猪有神经症状,出现转圈运动。猪圆环病毒和猪伪狂犬病毒混合感染的情况经常发生,2019年3月,灌云县同兴镇某猪场发生疾病,生猪表现为消瘦,共济失调等神经症状,经过临床和实验室诊断,确定为猪圆环病毒和猪伪狂犬病毒混合感染,经过积极治疗,疫情得到有效控制。     

猪伪狂犬病毒Real-time PCR检测方法的建立和弱毒疫苗病毒含量的检测

根据伪狂犬病毒的gB基因设计引物,将含gB基因的质粒作为标准品,绘制标准曲线,建立了伪狂犬病毒PRV的荧光定量PCR检测方法。该检测方法具有良好的重复性、敏感性和特异性,不与PCV2、PPV、CSFV、JEV和PRRSV发生反应。用该方法对不同滴度病毒液的基因拷贝数进行检测,发现病毒滴度和病毒拷贝数之间存在较好的相关性。采用该方法对7种商品化PRV弱毒疫苗进行病毒含量检测,结果显示不同商品化弱毒疫苗的病毒含量存在显著差异,与说明书标注的病毒含量基本一致。     

猪伪狂犬病毒Real-time PCR检测方法的建立和弱毒疫苗病毒含量的检测

根据伪狂犬病毒的gB基因设计引物,将含gB基因的质粒作为标准品,绘制标准曲线,建立了伪狂犬病毒PRV的荧光定量PCR检测方法。该检测方法具有良好的重复性、敏感性和特异性,不与PCV2、PPV、CSFV、JEV和PRRSV发生反应。用该方法对不同滴度病毒液的基因拷贝数进行检测,发现病毒滴度和病毒拷贝数之间存在较好的相关性。采用该方法对7种商品化PRV弱毒疫苗进行病毒含量检测,结果显示不同商品化弱毒疫苗的病毒含量存在显著差异,与说明书标注的病毒含量基本一致。     

多重PCR快速诊断猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒2型与猪细小病毒方法的建立

利用PrimerPremier5．0及DNAstar软件对猪伪狂犬病毒gB基因、猪圆环病毒2型ORF2基因和猪细小病毒VP2基因的保守区进行引物设计,选出扩增序列为猪伪狂犬病毒（373bp）、猪圆环病毒2型（430bp）和猪细小病毒（495bp）的3对引物．敏感性和特异性试验结果表明,mPCR对3种病毒的核酸检测限量从猪伪狂犬病毒至猪细小病毒分别为1．62×10-6、1．47×10-6和1．28×10-4 ng,对灭菌双蒸水、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒eDNA和猪瘟病毒eDNA的mPCR扩增结果均为阴性．mPCR可作为临床上猪伪狂犬病、猪圆环病毒2型感染和猪细小病毒病的病原学快速诊断方法．     

猪伪狂犬病毒感染病例的荧光定量PCR检测

毕节某猪场出现妊娠母猪流产、产死胎及部分仔猪发病的情况,为确诊病原,对流产胎儿的组织进行了实验室检测。流产胎儿的组织经猪伪狂犬病毒野毒株实时荧光PCR检测,结果显示,胎儿组织为猪伪狂犬病毒(PRV)阳性;根据临床症状及伪狂犬病毒野毒株实时荧光PCR检测确诊该猪场存在猪伪狂犬病毒野毒感染。     

猪伪狂犬病毒感染病例的荧光定量PCR检测

毕节某猪场出现妊娠母猪流产、产死胎及部分仔猪发病的情况,为确诊病原,对流产胎儿的组织进行了实验室检测。流产胎儿的组织经猪伪狂犬病毒野毒株实时荧光PCR检测,结果显示,胎儿组织为猪伪狂犬病毒(PRV)阳性;根据临床症状及伪狂犬病毒野毒株实时荧光PCR检测确诊该猪场存在猪伪狂犬病毒野毒感染。     

伪狂犬病毒在BHK-21悬浮细胞中的增殖特性

为考察BHK-21悬浮细胞增殖伪狂犬病毒（Pseudorabies virus, PRV）工艺参数及病毒增殖过程中代谢动力学，将PRV接种于BHK-21悬浮细胞，考察接毒时细胞密度、病毒感染复数（MOI）及收毒时间对病毒效价的影响，测定培养过程中葡萄糖（Gluc）、乳酸（Lac）和谷氨酰胺（Gln）浓度，计算病毒增殖过程中各参数代谢速率。结果显示，将MOI为0.01的PRV病毒接种BHK-21悬浮细胞，其病毒滴度在42 h达最高8.5 lgTCID₅₀/mL。代谢参数检测结果表明，BHK-21细胞在接毒36 h后细胞开始出现死亡。PRV在BHK-21悬浮细胞中的增殖特性为伪狂犬病毒的规模化培养及疫苗开发提供了技术基础。     

应用伪狂犬病毒表达载体研制重组疫苗的研究进展

随着分子生物学技术的发展,尤其是DNA重组技术的发展和应用使得疫苗方面的研究正逐渐从传统的灭活和弱毒疫苗向基因工程疫苗过渡,特别是以病毒和细菌为活载体疫苗的研制,以期克服常规疫苗在免疫时出现的毒力返强和散毒、免疫效率较低、过敏反应、用量较大等弊端。随着人们对伪狂犬病病毒分子生物学的深入研究,伪狂犬病毒特殊的基因组结构、宿主的广泛性和生物安全性作为重组病毒载体疫苗株越来越引起人们的关注,以伪狂犬病毒为载体研制基因工程疫苗的研究在国内外已取得了可喜的进展,现就国内外研究概况作一综述。1伪狂犬病毒的分子生物学…     

民和县猪伪狂犬病毒感染、免疫情况调查及防治措施

为了有效掌握民和县猪伪狂犬病病毒感染和免疫情况,在该县7个乡镇规模化养殖场和散养养殖户的291份血清样本,进行猪伪狂犬病病毒血清检测,猪伪狂犬病毒抗体阳性率为3.44%,其中规模化养殖场的抗体阳性率要显著高于散养养殖户,由此可以看出该地区存在着猪伪狂犬病毒感染的情况,需要我们进一步加强监测,并落实综合性的防控措施,降低发病率,保证生猪养殖安全。     

猪伪狂犬病的诊治体会

猪伪狂犬病是由病毒引起的一种急性传染病。多种家畜和野生动物都可以感染。以猪感染最为普遍,损失也最严重。在猪场伪狂犬病毒主要通过已感染猪排毒而传给健康猪,另外,被伪狂犬病毒污染的工作人员和器具在传播中起着重要的作用。     

猪伪狂犬、繁殖与呼吸障碍综合征和链球菌混合感染诊断

广东某猪场,哺乳仔猪和保育猪舍仔猪出现以神经症状、呼吸困难和关节炎为主要特征的疾病。发病猪样品经过实验室检测,结果表明猪伪狂犬病毒g E抗体和猪繁殖与呼吸综合征病毒核酸呈阳性,细菌分离鉴定猪链球菌2型为阳性。综合临床症状、剖检变化及实验室检测结果,该例传染病诊断为猪伪狂犬病毒、繁殖与呼吸障碍综合征病毒和链球菌混合感染。     

表达犬瘟热H基因重组伪狂犬病毒的构建及生物学特性研究

[目的]构建表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,并研究其生物学特性。[方法]通过RT-PCR方法获得On-derstepoort株H基因,插入pcDNA3.1（＋）建立好完整的真核细胞表达盒并将此表达盒亚克隆到转移载体p8AA上。在此基础上再将报告基因LacZ的表达盒插入转移载体,命名为p8AAZH。将p8AAZH与伪狂犬病毒（PRV）Bartha-K61株基因组共转染至BHK-21细胞中进行基因重组包装出毒,待细胞病变后收集病毒液。通过蓝色蚀斑筛选、PCR、电镜观察以及Western blot,筛选纯化重组病毒并鉴定目的基因的表达。同时在BHK-21细胞上测定重组病毒的生长曲线。[结果]获得了表达H蛋白的重组伪狂犬病毒,重组病毒与亲本Bartha-K61株的生长曲线、病变特征相一致。[结论]成功构建了表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,H基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,为犬瘟热活病毒载体疫苗的研制与开发打下了基础。     

表达犬瘟热H基因重组伪狂犬病毒的构建及生物学特性研究

[目的]构建表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,并研究其生物学特性。[方法]通过RT-PCR方法获得Onderstepoort株H基因,插入pcDNA3.1（＋）建立好完整的真核细胞表达盒并将此表达盒亚克隆到转移载体p8AA上。在此基础上再将报告基因LacZ的表达盒插入转移载体,命名为p8AAZH。将p8AAZH与伪狂犬病毒（PRV）Bartha-K61株基因组共转染至BHK-21细胞中进行基因重组包装出毒,待细胞病变后收集病毒液。通过蓝色蚀斑筛选、PCR、电镜观察以及Westernblot,筛选纯化重组病毒并鉴定目的基因的表达。同时在BHK-21细胞上测定重组病毒的生长曲线。[结果]获得了表达H蛋白的重组伪狂犬病毒,重组病毒与亲本Bartha-K61株的生长曲线、病变特征相一致。[结论]成功构建了表达犬瘟热Onderstepoort株H蛋白的重组伪狂犬病毒,H基因的插入不影响重组病毒的增殖特性,为犬瘟热活病毒载体疫苗的研制与开发打下基础。     

猪Ⅱ型圆环病毒-伪狂犬重组病毒活疫苗SA215(C)株的构建(初报)

根据GenBank发表的PCV2序列设计一对特异性引物,采用PCR方法,扩增PCV2 ORF2基因,将ORF2基因插入到含有EGFP报告基因的转移载体质粒pPI-2.EGFP,获得重组中间转移质粒pPI-2.EGFP-ORF2。采用脂质体介导法,将重组中间转移载体pPI-2.EGFP-ORF2与伪狂犬病毒SA215株基因组共转染真核ST细胞,通过空斑纯化得到了表达猪Ⅱ型圆环病毒ORF2基因和绿色荧光蛋白基因的重组伪狂犬病毒SA215(C)。经检测,重组病毒能表达具有生物活性的ORF2基因蛋白和绿色荧光蛋白。并且重组病毒及亲本株在同一细胞上的增殖滴度基本相同,表明EGFP和PCV2 ORF2基因的插入不影响PRV SA215的增殖。该重组病毒可作为猪Ⅱ型圆环病毒和伪狂犬病毒候选疫苗毒株。     

种猪场猪伪狂犬病净化技术

<正>1技术概述1.1技术基本情况猪伪狂犬病是由猪伪狂犬病病毒引起的猪急性传染病。主要表现为妊娠母猪流产死胎、公猪不育、新生仔猪神经症状和大量病死、育肥猪呼吸困难、生长停滞等，是危害养猪业的重要传染病之一。伪狂犬病毒属于高度潜伏感染病毒，随时有可能被机体内外和环境变化应激因素刺激而引起疾病暴发。属于疱疹病毒科猪疱疹病毒属，多种与毒力和免疫原性相关的基因均已被定位和测序，现在使用的伪狂犬疫苗大部分都是缺失了毒力基因的疫苗，抗体检测试剂盒能够很好的区分免疫抗体和野毒感染抗体，因此为此病净化提供了技术手段。     

猪伪狂犬病毒野毒株与疫苗株的多重PCR鉴别

为建立一种快速鉴别猪伪狂犬病毒野毒株与疫苗株的方法,根据猪伪狂犬病毒(PRV)全基因序列,并参照SA215、Bartha-K61疫苗株基因缺失位点特征,在单一检测野毒株与疫苗株的基础上,针对g E、g B和TK基因设计引物,首次建立了同时检测猪伪狂犬病毒野毒株与疫苗株的多重PCR检测方法。通过一次PCR检测能区分感染野毒株、疫苗株SA215和Bartha-K61,且与猪圆环Ⅱ型病毒(PCV-2)、细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)无交叉反应。多次试验证明该方法简单、可靠且敏感度高,可用于科学研究和临床诊断等方面。