滩羊胎儿成纤维细胞系的建立及其生物学特性研究

【目的】以滩羊胎儿皮肤组织为材料,获得符合体细胞克隆转基因基本要求的供体细胞系。【方法】取滩羊胎儿皮肤组织,采用组织块法分离培养获得滩羊胎儿成纤维细胞,观测其形态和生长情况,鉴定其性别,并对其染色体核型和红色荧光报告基因质粒(pmCherry-N1)转染等生物学特性进行研究。【结果】采用组织块法成功获得了滩羊胎儿成纤维细胞,其细胞群体倍增时间(PDT)约为48h;5代、15代、25代滩羊胎儿成纤维细胞核型分析表明,各代细胞染色体均为2n=54,未见异常;滩羊胎儿成纤维细胞的转染效率较高,约为50%,对最终获得的稳定表达红色荧光蛋白的胎儿成纤维细胞进行核型分析,结果证明遗传物质没有发生变化。【结论】建立了滩羊胎儿成纤维细胞系,为滩羊分子育种奠定了基础。     

梅山猪耳成纤维细胞系的建立及生物学特性分析

以梅山猪耳缘组织为研究材料,采用组织块培养法建立了梅山猪耳成纤维细胞系,并对所建细胞系进行生物学特性研究。结果表明:所建立的梅山猪耳成纤维细胞系生长态势良好,冷冻前后的平均细胞存活率分别为95.21%、90.08%,解冻后细胞的生长曲线呈S型;细菌、真菌和支原体3类微生物检测结果均为阴性,表明细胞没有受到微生物的污染;细胞中期染色体二倍体(2n=38)占主体比例约为92.31%,达到了建立成纤维细胞系的要求;苹果酸脱氢同工酶和乳酸脱氢同工酶电泳结果表明,该细胞系没有被其他细胞污染,细胞纯度较高;绿色荧光蛋白(EGFP)基因转染耳成纤维细胞表明,5个细胞系的阳性率为45.23%-67.32%。经G418筛选后,各个细胞系均能有效形成单克隆集落。本研究中梅山猪成纤维细胞系的建立使梅山猪种质资源在细胞水平得到有效保存,并可为其他动物成纤维细胞系的建立以及种质资源保存提供参考。     

河曲马睾丸组织成纤维细胞系的建立及生物学特性研究

采集河曲马睾丸组织,用热消化法制备原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法纯化细胞,扩大培养至第3代用液氮保存,细胞复苏后进行活力、形态、生长曲线、微生物污染、核型、乳酸脱氢同工酶谱及荧光蛋白质粒转染表达等特性研究。结果显示,河曲马睾丸组织原代和传代细胞呈成纤维型,生长良好,最大增殖数量为4.32×105 mL-1,倍增时间为34.58h;细菌、真菌、病毒、支原体检测呈阴性;染色体2 N=64,二倍体为85%,占主体;乳酸脱氢酶同工酶电泳图谱有明显特征,共有4条谱带,其中LDH3浓度较高,活性较强;外源质粒在该细胞中能进行复制和表达。表明已成功建立河曲马睾丸组织成纤维细胞系,使河曲马这一重要种质资源在细胞水平上得以保存。     

山西太行黑山羊保种与利用技术

太行黑山羊是山西省优良地方品种,亟需开展保护、选育及科学利用工作。介绍了山西太行黑山羊品种资源特征、保种概况、保种方案、选育及开发利用措施,以期为该品种的保种、开发利用和产业化发展提供参考。     

黄芪对太行黑山羊生产性能的影响

为研究日粮中添加不同比例黄芪对太行黑山羊生产性能的影响,选取80只日龄体质量相近的羊只,随机分成4组进行了为期60 d的饲养试验。结果表明,试验组与对照组相比,日增质量和屠宰率有提高趋势,料肉比有降低趋势;当日粮中黄芪添加量为1.5%,2.5%时,羊的空肠、回肠和十二指肠的肠壁厚、肠绒毛高和隐窝深显著高于对照组(P﹤0.05);当添加量为3.5%时,各水平变化不显著。综合考虑羊只对黄芪的耐受性和生产成本等因素,确定试验条件下黄芪的最适添加量为2.5%。     

气候变化对太行黑山羊养殖业发展的影响分析

太行黑山羊是我国黑山羊资源基因"宝库"中的一颗耀眼明珠,对饲养环境有较强的适应性。分析晋城市近40年来气候变化特征,研究其对太行黑山羊养殖业发展的影响,结果表明:晋城市年平均气温呈明显上升趋势,年降水量随时间推移变化不大,无霜期延长,对太行黑山羊繁殖性能和羔羊生产性能有显著提高,冬季气温升高更有利于羊只受胎、繁殖;随着气温逐年升高,积温增加,无霜期延长,饲草返青期提前,黄枯期推迟,丰草期延长,为太行黑山羊饲养提供丰富的饲草资源。对今后太行黑山羊养殖业发展具有一定的参考价值。     

山西太行黑山羊mtDNA D-Loop区遗传多样性分析

山西太行黑山羊是一个重要的地方品种。为深入研究保种群遗传多样性,选择35只个体的线粒体DNA D-Loop区进行了测序和多态性分析。结果显示,山西太行黑山羊的D-Loop区序列长度为1 211～1 215 bp,A、T、C、G的含量分别为31.82%、28.44%、26.22%和13.52%,富含A/T碱基;共发现多态性位点113个,34种单倍型,单倍型多样性为0.998;山西太行黑山羊与辽宁绒山羊、黄淮山羊和戴云山羊的遗传距离最小(0.014),与安哥拉山羊的遗传距离最大(0.029)。构建的系统发育树显示,20个山羊群体分为4个不同的支系。山西太行黑山羊群体的多态程度高,遗传多样性丰富,选育程度较低。研究结果可为山西太行黑山羊遗传资源保护、选育和开发利用提供参考。     

太湖猪成纤维细胞系的建立及其生物学特性研究

以太湖猪皮肤为材料,采用组织块法培养成纤维细胞,并对其进行生物学特性检测,包括细胞形态观察、细胞冻存前和复苏后接种的存活率测定、生长曲线绘制、染色体核型分析。结果表明:所培养的成纤维细胞呈典型的成纤维细胞形态;细胞冻存前和复苏后接种的存活率分别为96·5%和93·2%;生长曲线呈"S"形,倍增时间为72h;对所制备的染色体片核型分析显示2n=38,XY。本次实验成功地建立了太湖猪成纤维细胞系,为在细胞水平上保存太湖猪种质资源提供了可能,并为其他研究提供了实验材料。     

奶山羊胎儿成纤维细胞系的建立及其生物学特性分析

试验分别采用组织块贴壁法和消化分离法对奶山羊胎儿成纤维细胞进行体外培养,通过原代培养、细胞传代、冷冻保存等成功建立了奶山羊胎儿成纤维细胞系,并对该细胞系进行了形态学观察、生长动力学分析、细胞活力测定、核型分析和微生物检测等多种生物学特性分析.结果表明:成纤维细胞原代培养采用贴块培养时所需时间较长,消化培养有较多死细胞;传代细胞生长情况良好,群体倍增时间(PDT)约为40.4h;生长总体趋势呈"S"型;冻存后活力为92.3%,生长状况与冻存前一致;细胞染色体中二倍体(2 n=60)占主体;细菌、真菌和支原体检测结果均为阴性,细胞系的各项指标均达到ATCC细胞系鉴定标准.     

山西太行黑山羊品种选育效果

山西太行黑山羊是太行山羊一个重要的地方类群,目前群体数量急剧减少,濒临灭绝。为了加强品种保护,在左权新世纪种羊场建立品种保护基地,组建太行黑山羊核心群。结果表明,经过3 a科学选育,黑山羊体型外貌、体质量、体尺和繁殖性能都取得显著的遗传进展,为科学保种及肉用品系培育奠定了基础。     

利用SRY基因鉴定山羊胎儿成纤维细胞的性别

根据GenBank中已发表的山羊SRY基因和β-乳球蛋白基因序列设计2对PCR引物,对来自3个1月龄山羊胎儿成纤维细胞的基因组DNA进行PCR扩增,分别以公羊、母羊的基因组DNA为阳性和阴性对照,同时对PCR产物进行序列测定和同源性分析。结果表明,阳性对照和GFF1细胞系有2条扩增带,阴性对照、GFF2和GFF3细胞系只有1条扩增带;序列测定结果表明,PCR扩增产物为SRY基因,利用该方法准确鉴定出1个雄性细胞系和2个雌性细胞系。     

麦洼牦牛乳腺上皮细胞系的建立及其生物学特性

为建立麦洼牦牛乳腺上皮细胞的体外培养方法,采用组织块贴壁法及Ⅰ型胶原酶消化法,从麦洼牦牛乳腺组织中成功分离并获得纯化的乳腺上皮细胞,并利用细胞角蛋白18的免疫荧光染色对乳腺上皮细胞进行鉴定。通过细胞生长曲线、群体倍增时间、细胞接种存活率、细胞活力等生物学特性的检测,建立并鉴定麦洼牦牛乳腺上皮细胞系。结果显示,乳腺细胞形态良好,细胞接种存活率达91%,群体倍增时间26.97h,细胞生长曲线呈典型"S"型,细胞传至25代以上仍保持旺盛的增殖活力。可见,通过对细胞传代及反复冻存和复苏已成功建立麦洼牦牛乳腺上皮细胞系,获得大量的乳腺上皮细胞,使麦洼牦牛物种在细胞水平上得以保存,为建立牦牛乳腺生物反应器及泌乳调控机制研究提供基础。     

体外培养枫径猪胚胎成纤维细胞系方法的建立

选取枫径猪胚胎,采用胶原酶消化培养法制备猪胚胎成纤维细胞,经数次传代培养及冷冻复苏试验表明胚胎成纤维细胞仍具有正常的传代能力。在体外培养至15代后成纤维细胞核型正常,符合体细胞克隆转基因的要求。用PCR方法建立了枫径猪胚胎成纤维细胞性别鉴定的反应体系,对其中6株细胞进行了性别鉴定。     

芫菁科昆虫的生物学特性及人工养殖研究概况

芫菁科昆虫是自然界中最主要的斑蝥素资源,综述了芫菁科昆虫的生物学特性的研究进展,并对芫菁科昆虫的饲养技术作了简要介绍。     

岩原鲤生物学特性及驯养技术

通过对岩原鲤生物学特性观察及驯养技术试验,结果:岩原鲤生长适宜温度范围4~36℃,最适生长温度18~30℃,在池塘养殖条件下,投喂人工配合饲料能正常摄食生长,但与其他养殖鱼类相比其生长速度较慢。亲鱼在池塘养殖条件下,能够正常生长发育并达性成熟。表明,岩原鲤在人工养殖条件下,能够正常生长发育成熟,可人工繁殖苗种,进行商品化养殖是可行的。     

贵州黑山羊肌肉生长抑制素基因cDNA克隆及其蛋白抗原表位预测

为通过原核、真核外源表达贵州黑山羊肌肉生长抑制素(MSTN)蛋白,制备MSTN受体拮抗剂或免疫诱导山羊产生MSTN抗体,从而消除MSTN对肌肉生长的抑制作用奠定基础,采用RT-PCR技术扩增贵州黑山羊生长抑制素基因cDNA序列;应用生物信息学相关软件和方法对生长抑制素蛋白二级结构和抗原表位进行预测。结果表明:贵州黑山羊生长抑制素基因编码区全长1 128bp,编码375个氨基酸。生长抑制素蛋白二级结构以无规卷曲为主,有少量的α螺旋和β片层,少见β转角;推测生长抑制素蛋白在二级结构上可能有3个优势抗原表位区域,分别为72～78、235～240和251～254位肽段。     

转甜味蛋白Brazzein基因乳腺特异表达载体的山羊体细胞株筛选

[目的]建立通过山羊乳汁获取甜味蛋白Brazzein的方法.[方法]将前期工作中构建的Brazzein基因山羊乳腺特异表达载体STP-pBC1进行线性化,采用脂质体法转染山羊成纤维细胞,以期获得转基因阳性细胞.[结果]采用脂质体法转染山羊成纤维细胞后,通过最适G418浓度（400 μg/ml）筛选获得转基因阳性细胞;转基因阳性细胞形态呈现梭形且核仁清晰,其生长曲线呈现正常的“S”;转基因阳性细胞经冷冻复苏后,仍呈现与冷冻前新鲜转基因细胞相似的形态和生长曲线;PCR鉴定结果表明,STP-pBC1已整合入转基因细胞的基因组中.[结论]成功获得乳腺特异的转甜味蛋白基因Brazzein的山羊成纤维细胞株.     

新川中岛桃在黔北地区的生物学特性及栽培技术

对2002-2007年引进的新川中岛桃进行生物学特性观察和丰产栽培技术研究.结果表明,新川中岛桃结果能力强,产量稳定,适宜在黔北地区推广种植,栽培上宜采用高标准建园、配方施肥、合理修剪、合理疏花疏果、及时套袋、有效防治病虫害和合理采收等配套栽培技术.