稻瘟病菌拮抗假交替单胞菌的分离与鉴定

为从海洋中分离并鉴定水稻稻瘟病菌拮抗菌,采用系列稀释法和对峙法筛选对稻瘟病菌具有较好抑菌活性的拮抗菌,根据其形态、生理特性及16S rDNA序列比对鉴定拮抗菌分类地位.结果:从辽宁省大连采集的样品中共分离到77株菌,以稻瘟病菌为指示菌,共筛选到9株具有拮抗作用的菌株,再通过发酵复筛,结果表明LM-003菌株的拮抗作用最好,且初步鉴定菌株LM-003为假交替单胞菌(Pseudoalteromonas).试验表明,假交替单胞菌LM-003是1株有应用前景的生防菌株.     

海洋假交替单胞菌CI4菌株抗菌蛋白分离纯化的初步研究

将海洋假交替单胞菌Pseudoaltermonas sp.CI4菌株于VNSS液体培养基中培养,获得浓缩无细胞上清液,采用纸片扩散法检测其抗菌活性。结果表明,该菌株的胞外产物能够抑制从岩石表面分离的污损细菌S1菌株和其自身的生长。除去菌体培养液,用饱和度为70%的硫酸铵沉淀,所得的拮抗物粗提液对热部分敏感,对蛋白酶K和链霉蛋白酶敏感,其作用的活性pH稳定范围为5.0-9.0。粗提液经Sephadex G-200柱层析、DE-52纤维素离子交换柱层析,Microcon离心超滤管分级和聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）跟踪检测,得到电泳纯抗菌蛋白,其相对分子质量为37 200。     

海洋假交替单胞菌CI4菌株抗菌蛋白分离纯化的初步研究

将海洋假交替单胞菌Pseudoaltermonas sp.CI4菌株于VNSS液体培养基中培养,获得浓缩无细胞上清液,采用纸片扩散法检测其抗菌活性。结果表明,该菌株的胞外产物能够抑制从岩石表面分离的污损细菌S1菌株和其自身的生长。除去菌体培养液,用饱和度为70%的硫酸铵沉淀,所得的拮抗物粗提液对热部分敏感,对蛋白酶K和链霉蛋白酶敏感,其作用的活性pH稳定范围为5.0⁹.0。粗提液经Sephadex G-200柱层析、DE-52纤维素离子交换柱层析,Microcon离心超滤管分级和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)跟踪检测,得到电泳纯抗菌蛋白,其相对分子质量为37 200。     

一株具有抗真菌活性的食酸丛毛单胞菌的分离和鉴定

在土壤中分离到一株细菌STRA，菌块测定法显示该菌可显抑制玉米小斑病菌和稻恶苗病菌，具有抗真菌活性，该菌可以在SFM和LB等多种培养上生长，且菌落生长无明显终止现象；革兰氏染色为阴性，电镜观察可见2-4根鞭毛。（G C）%在59%-67%范围内。生化指标的检测显示该菌株对所测试的多数糖类不能发酵，经BioMerieux Vitek的革兰氏阴性菌检测试验卡（GNI）鉴定为食酸丛毛单胞菌（Delftia acidovorans）。设计两对简并引物对其16SRNA进行PCR扩增，16SRNA的序列及其相关生物信息学分析结果进一步确证生化鉴定结果。该分离株的抗真菌物质的特性鉴定、结构分析及作用机制有待进一步研究。     

一株假交替单胞菌DL3的抑菌与群体感应淬灭活性研究

本实验室从水产养殖池防污附钢片的微生物黏膜中分离到一株菌DL3,为了明确该菌株的活性及作为有益菌进行应用的可能,通过细菌分离培养、16S rRNA测序和系统发育分析对其做了初步鉴定,并采用牛津杯法、平板法分别测定了菌株的抑菌活性和群体感应淬灭活性。基于菌株DL3 16S rRNA基因序列的系统发育分析表明,该菌株与解肽假交替单胞菌(Pseudoalteromonas peptidolytica)NBRC 101021^T的相似性最高,亲缘关系最近,为99.64%;抑菌试验显示,该菌株对鳗弧菌(Vibrio anguillarum)和铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)的抑制作用最强,对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠埃希菌(Escherichi coli)、沙门氏菌(Salmonella)、链球菌(Streptococcus)、志贺氏杆菌(Shigella)、河弧菌(V.fluvialis)、东方弧菌(V.orientalis)、哈维氏弧菌(V.harveyi)和短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus...     

致病性假交替单胞菌的分离鉴定及药敏特性研究

[目的]分离鉴定患病的七带石斑鱼（Epinephelus septemfasciatus Thunberg）的致病菌,并研究其药敏特性。[方法]从患病的七带石斑鱼体内分离出1株致病菌BY0081。通过ATB微生物鉴定系统和菌体常规形态特征、生理生化反应指标测定以及16S rDNA测序分析等进行综合鉴定;通过人工感染水生模式动物剑尾鱼测定该菌株对其的半数致死量（LD50）;最后进行药敏试验确定其药敏特性。[结果]致病菌BY0081为革兰氏阴性菌,菌落呈米色,边缘光滑,中间略有隆起,为假交替单胞菌（Pseudoa lteromonas sp.）。其在较低的温度下仍有较强的毒力,其对水生模式动物剑尾鱼（Xiphophorus helleri）的LD50为2.82×105cfu/g鱼体重。该菌对菌必治、复方新诺明、氯霉素和氟哌酸等抗生素高度敏感,对复达欣、红霉素、丁胺卡那霉素和庆大霉素等药物中度敏感。[结论]该研究对防治由假交替单胞菌引起的鱼类疾病有积极意义。     

1株黑鲷致病性假交替单胞菌的鉴定及毒力基因分析

从患有尾鳍基部溃烂病的人工养殖黑鲷（Acanthopagrus schlegel）病灶处分离到1株优势菌LSHD－1,经人工感染试验证实为引起黑鲷尾鳍基部溃烂病病原菌。细菌形态学观察、生理生化等表观、生物学试验、细菌16S rRNA基因同源性检索和系统发育学分析结果表明,LSHD－1与假交替单胞菌属（Pseudoalteromonas）的吻合程度最高,系统发育分析结果与杀鱼假交替单胞菌（Pseudoalteromonas piscicida）聚为1支。扩增细菌毒力基因,分析其潜在致病性,发现LSHD－1携带黏附侵袭位点基因（ail）、毒力活化因子（virF）、P4噬菌体整合酶基因（intB）、溶血素基因（hlyA）、丝氨酸蛋白酶基因（ahpA）、肠毒素基因（altA）、抗金属蛋白酶基因（ast）。药敏试验结果显示,LSHD－1对氧氟沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、头孢曲松、氟苯尼考高度敏感,对磺胺异唑、强力霉素、青霉素G、四环素表现出较强耐药性。     

一株半滑舌鳎致病性假交替单胞菌的分离鉴定与药敏特性分析

从患皮肤溃疡病的半滑舌鳎肝脏中分离到一株优势菌株CSLG2,根据细菌形态学观察、生理生化鉴定、16S rDNA序列鉴定及系统发育进化树分析结果,发现该菌株与假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas)同源性最高。对该菌株进行药敏试验,结果发现该菌对米诺环素、红霉素、头孢他啶、头孢曲松、氯霉素、诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星等药物高度敏感,而对红霉素、四环素、头孢唑啉、头孢拉定、青霉素和呋喃妥因具有一定的耐药性。     

拮抗凡隆气单胞菌的海洋放线菌A C08 F5的鉴定及活性物质初步研究

从21株分离自海洋环境的放线菌中筛选出1株放线菌菌株AC08F5,该菌株对凡隆气单胞菌温和生物型(Aeromonas veronii biovar sobria)NQ菌株有明显抑制作用;通过显微形态和培养特征观察、生理生化反应和16S rDNA分子鉴定,将其鉴定为链霉菌属。试验对该菌株的活性物质对热、pH和紫外照射的稳定性进行了初步研究,结果显示,在70℃以下、pH值4～10条件下抑菌活性相对稳定,并具有很强的抗紫外线照射能力。     

一株虾源假交替单胞菌(Pseudoalteromonas sp.)的分离鉴定及口服后对对虾体内弧菌的影响

为探讨对虾细菌性病原的微生物防控技术,采用牛津杯打孔法对分离自对虾育苗池的一株编号为2021041402-14的细菌(简称“02HN”)进行了抗菌测试,分析其对欧文氏弧菌(Vibrio owensii)、哈维氏弧菌(V.harveyi)、坎贝氏弧菌(V.campbellii)、溶藻弧菌(V.alginolyticus)、副溶血弧菌(V.parahaemolyticus)和美人鱼发光杆菌(Photobacterium damselae)等6株虾病原菌的抑菌效果及最低抑菌浓度,通过浸泡感染测试了菌株02HN对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的生物毒性,采用16S rRNA、gyrB-rpoD串联基因序列比对法及生理生化方法对该菌进行了鉴定,并将该菌添加到饲料中投喂对虾,评价该菌对对虾体内弧菌数量的影响。结果表明：菌株02HN对欧文氏弧菌、哈维氏弧菌、坎贝氏弧菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌和美人鱼发光杆菌均具有抑菌效果,其最低抑菌浓度分别为2.32×10⁴、2.32×10³、2.32×10⁶、2.32×10     

花青素合成转录因子表达载体的构建 及遗传转化油菜研究

通过 PCR 扩增得到红掌（Ant hur i um andr aeanum）的 M YB 基因全长、将 M YB 基因片段克隆到 pM D18-T 载体上、然后将此基因插入 CaM V35S启动子后构建成表达载体 Cam35S-GFP-M YB。 通过冻融法将带有目的基因的 表达载体导入根癌农杆菌、 并转化热研 2 号柱花草获得转基因植株若干。 抽取 10 株转化的柱花草植株的基因组 DNA 进行 PCR 分子验证、结果表明有 6株阳性、M YB 基因已成功整合到柱花草的基因组中。转基因柱花草植株的获 得为柱花草等豆科牧草的适口性和抗逆性的提高提供了可能、 并且为以后柱花草的遗传转化工作提供了可靠的依 据。     

罗汉果组培苗移栽条件优化及施肥试验

以罗汉果生根组培苗为试验材料,研究基质种类、瓶苗质量、温湿度及施肥浓度对组培苗移栽成活率和 生长的影响。 结果表明院基质种类、瓶苗质量、温湿度是影响组培苗成活的关键因子,塘泥颐育苗土颐蛭石=1颐1颐1 的基质 组合效果最好,炼苗成活率最高达 93. 56% ,且长势好;合适的环境条件为温度 25耀30益、湿度 80% 耀90% ;施肥浓度以 0. 5% 为好,移栽苗生长较快且无肥害发生,最适于移栽大田。     

两株抗香蕉枯萎病生防菌的筛选与生防效应研究

筛选获得高效生防枯草芽胞杆菌（Baci l l ussubt i l i s）BLG01 和 BDF11,并通过小区试验测定施用 BLG01 和 BDF11 与有机液肥对香蕉生长、枯萎病病情指数、枯萎病病原菌（Fusar i um oxyspor um f .sp.cubense,FOC）与可培 养细菌数量的影响。 室内试验结果表明,BLG01和 BDF11对香蕉枯萎病病原菌的抑制率分别达 70. 4% 和 77. 2% 。 小 区试验结果表明,在香蕉移栽 100 d 时,各试验处理均能能促进香蕉生长和提高控病作用,其中以 BLG01 和 BDF11 与有机液肥同时施用也LOF( BL1+BDF11) 页的防病作用最显著,香蕉株高、茎围、地上部、地下部鲜和防效显著提高,联 合处理病情指数下降了 45. 39% ~65. 87% , 根际 FOC 的 l ogCFU 降低 40. 5% ~50. 1% , 可培养细菌数量的 l ogCFU 增加 25. 8% ~32. 8% ;FOC 与根际可培养细菌数量呈极显著负相关关系,与病情指数呈极显著正相关关系。 结果表明,枯草 芽胞杆菌配施有机液肥可促进香蕉生长,降低枯萎病病原菌数量,提高根际可培养细菌数量,增加对香蕉枯萎病的 防治效果,具有较大的应用前景。     

工夫红茶发酵适度点识别系统及装置的设计

针对目前工夫红茶发酵适度点的判别主要依靠操作者的感官识别、在实际操作中存在着不确定性和不 稳定性等缺陷、利用野一种确定工夫红茶发酵适度的新方法冶（专利号 ZL200810073664. 5）的检测数据并结合专家感 官审评结果进行质量传递、开发设计红茶发酵适度点的识别系统及装置、用监测发酵叶颜色变化的方法来确定红茶 发酵适度点。该系统主要由单片机、颜色传感器、白色 LED 发光管、时钟电路和显示器等组成。白色 LED 发光管照射 发酵叶、颜色传感器采集发酵叶反光、将红、蓝、绿三色光的量传送到单片机、单片机计算参数值和各参数值维持的 时间、当某个参数值维持时间达到发酵适度点的持续时间、发出停止发酵的报警信号。 实例验证结果表明、此系统取 得较好的判断效果、该系统的判断与野一种确定工夫红茶发酵适度的新方法判断冶及专家感官审评吻合、可实现准 确、及时、方便的在线监测。     

粤选系列匍匐翦股颖新品系 DNA 指纹 图谱构建与遗传多样性分析

采用 SRAP 分子标记方法、对 9 份粤选系列匍匐翦股颖新品系和 4 份国外优良品种进行指纹图谱构建 和遗传多样性分析。 结果表明院（1）32对引物中、有 17对引物扩增带型清晰、共扩增出 184 条带、其中有 131 条具有 多态性、多态率为 71% 。 （2）有 4对引物扩增的带型可以清晰区分 13个品系、利用图示模型构建了 13个品系指纹图 谱、图谱包含 12个位点、能有效区分 13个品系。 （3）13个品系间存在较大的遗传差异、遗传距离在 0. 0285耀0. 7587之 间。 （4）经 UPGM A 聚类分析、在遗传距离 0. 644处、可将 13个供试材料分为 4个同源类群。 研究结果为匍匐翦股颖 新品种的鉴定和推广提供了依据。 关键词院匍匐翦股颖; SRAP; 遗传多样性; 指纹图谱 广东省自然科学基金（S2012040007287）;广东省 科技攻关项目（2005B20901018）;广州市科技攻关项目（2005Z2- E0201、2006C13G0161）;广东省农业标准项目（粤财农[ 2005] 311 号）;珠海市科技攻关项目（PC20061051） 149聂 鑫 1 、 陈国平 2 、 张 利 1 、 李再新 1 、 谢万如 1 、 赵志平 1 ( 1. 四川理工学院化学与制药工程学院、四川 自贡 643000;2. 重庆大学生物工程学院、重庆 400044) 摘 要院花青素是类黄酮化合物的衍生物、具有抗氧化功能。 油菜是全世界广泛种植的油料作物、但其花青素含 量低、抗氧化能力弱。 为了利用金鱼草花青素生物合成转录因子遗传转化油菜提高其花青素含量、通过 PCR 从金鱼 草 cDNA 中扩增了 Roseal 1和 Del i l a基因、并分别克隆到含有 35S 启动子和 35S 终止子的 pDH51 载体。 然后将含有 35S启动子、基因片段和 35S终止子的片段分别连接到 pBI N19载体、获得了含有双 35S 启动子和终止子的表达载体 pBI N-Del i l a-Roseal 1。通过农杆菌介导遗传转化甘蓝型油菜后、获得了紫色的愈伤组织。研究结果为利用基因工程技 术提高油菜花青素的含量奠定了基础。     

生物发酵床垫料的筛选研究

发酵床养殖技术的核心在于发酵垫料的配比和管理。 为筛选获得生物发酵床最优垫料,替代传统原料 稻壳和锯末,进行了以土著微生物为菌种,稻壳、锯末、玉米秸秆、玉米芯不同添加比例为垫料的发酵床模拟试验。 按 照总重量相同原则,试验设 8个处理。 试验期 60 d,每 5 d对垫料发酵过程中温度、全氮、有机质进行测定并分析。 结 果表明院所有处理发酵最高温度均超过 35益,全氮、有机质含量均为降低趋势。 其中添加 30% 玉米秸秆+30% 玉米芯+ 40% 对照的 AB 处理发酵效果较好, 高温期和降温期的温度值均超过其他处理, 其全氮、 有机质含量分别下降了 44. 27% 尧19. 87% 遥 结合成本投入综合计算筛选出最优垫料为 AB 处理袁建议在西北地区发酵床养殖中推广利用遥     

响应面法优化超声波辅助提取山药 低聚糖的工艺研究

为了得到超声波辅助提取山药低聚糖的最佳工艺条件、采用 Box 窑 Benhnken 中心组合设计及响应面法 （RSM ）探讨了超声功率、超声时间、乙醇浓度、料液比 4个因素的优化组合。 经回归模型分析并结合验证试验、确定 低聚糖的最佳提取工艺条件为：超声功率 500 W 、提取时间 60 mi n、乙醇浓度 60% 、料液比 1: 15。 在该条件下、山药低 聚糖得率为 7. 21( 依0. 26) % , 与预测值 7. 25% 基本一致、且比相同条件下未使用超声波的提取工艺提高了 3. 91% 。     

农业高新技术企业风险投资项目评估

从农业高新技术企业的特性出发、构建了农业高新技术企业风险投资项目评价指标体系、包括财务、管 理、市场和环境、产品与技术因素 5项目标层指标、20 项准则层指标、并选择层次分析法（AHP）确定各指标权重、基 于模糊数学原理对农业高新技术企业风险投资项目进行了较为全面、科学的评价、为农业高新技术企业的风险投资 与企业的风险管理提供决策参考。     

海南农民稻田生物多样性保护认知评价 及农药使用情况分析

长期以来农药的不合理利用已经引发了环境污染、食品安全等一系列问题、探索减少农药投入的生产 模式、构建稻田生物多样性生态控制病虫害的水稻生产模式已经成为稻田可持续发展的重要手段之一。 为了更好 地开展海南稻田生物多样性保护、发挥稻田生态系统服务功能、有必要系统全面地了解农民对稻田生物多样性保护 认知及农药使用情况、我们在海南北部和南部分别开展了调查。 结果显示、调查区大部分稻农对稻田生物多样性概 念不了解、相关知识掌握较少、且仅有极少数农民接受过相关的多样性种植培训或者指导。 在农药使用上、存在过 量使用、盲目使用和跟风使用等一系列不科学问题、直接导致海南稻田生态系统遭到破坏、种植成本骤增、稻农净收 益降低。 通过分析、就海南水稻生产中的农药使用问题提出了意见和建议。     

M YB 基因表达载体的构建及转化 热研 2 号柱花草的研究

M YB 转录因子在次生细胞壁合成转录调控过程中发挥重要的作用。 为了深入研究杨树 Subgr oup 4 M YB 转录因子的作用机制、 应用酵母双杂交的方法、 以杨树 Subgr oup 4 M YB 基因 Popt r _0004s18020. 1（M YB221）、 Popt r _0009s13640. 1（M YB156）和 Popt r _0019s00750. 1（M YB057）为诱饵蛋白、从毛白杨次生维管组织均一 cDNA 文库 中筛选互作蛋白、获得了 9个与 Subgr oup 4 M YB 互作的蛋白质、并通过生物信息学方法分析候选蛋白可能的生物学 功能。 为进一步研究杨树 Subgr oup 4 M YB 转录因子的作用机制奠定了基础。