胭脂李多酚纯化工艺及其黄嘌呤氧化酶抑制活性

比较4种不同极性大孔树脂对胭脂李果实多酚的静态吸附和解吸性能,筛选最佳纯化树脂;优化动态吸附与解吸条件参数,分析纯化前后多酚的黄嘌呤氧化酶抑制活性。结果表明:最佳纯化大孔树脂为HP-20,其静态吸附6h达到饱和,静态解吸2h后基本达到平衡;动态纯化最佳工艺条件为上样浓度1.0mg·mL~(-1),上样速度2.0mL·min~(-1),80%乙醇溶液作为洗脱剂,洗脱流速2.0 mL·min~(-1);纯化后胭脂李多酚纯度由25.47%提高至74.89%,黄嘌呤氧化酶抑制活性IC50从179.21μg·mL~(-1)降到72.35μg·mL~(-1),黄嘌呤氧化酶抑制活性提高了2.47倍。     

夏枯草和紫苏叶提取物体外黄嘌呤氧化酶抑制活性及体内降尿酸研究

目的：为了研究中药材夏枯草和紫苏叶提取物的降尿酸作用。方法：将中药材夏枯草和紫苏叶总提物及有效部位通过体外黄嘌呤氧化酶抑制实验和体内高尿酸血症模型小鼠的血清尿酸水平考察实验进行筛选和评价。结果：体外黄嘌呤氧化酶抑制实验结果显示,夏枯草水提物和紫苏叶醇提物及其乙酸乙酯部位体外抑制率均大于50%,其总提物IC₅₀分别为36.96μg/mL和45.57μg/mL。体内高尿酸血症小鼠尿酸水平实验结果显示,夏枯草和紫苏叶总提物及其乙酸乙酯部位有显著的体内降尿酸活性。结论：夏枯草和紫苏叶总提物及其有效部位可以通过抑制黄嘌呤氧化酶的活性进而发挥降尿酸作用。     

刺五加叶多糖的分离纯化及免疫活性研究

研究刺五加叶水溶性多糖结构信息和免疫活性。采用热水提取、乙醇沉淀、Sevag法脱蛋白后得到刺五加粗多糖,粗多糖经EDAE-SepharoseFastFlow离子交换柱和SephadexG-75凝胶过滤柱2次纯化,得到均-多糖组分ASP-2—1;ASP-2—1经三氟乙酸水解、1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）衍生化、毛细管区带电泳法（CZE）测定其单糖组成;高效凝胶渗透色谱法测定其纯度和分子量;体外脾淋巴细胞增值试验测定其免疫活性。从刺五加叶中分离纯化得到的均-多糖组分SPA-2—1主要由葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、果糖、鼠李糖、木糖等6种单糖组成,摩尔比为27．33：8．92：3．03：1：7．59：20．51,其分子量为13．6KD;小鼠脾淋巴细胞增殖试验表明,SPA-2—1可显著促进脾淋巴细胞的增殖,刺五加叶多糖SPA-2—1具有较强的体外免疫活性。     

苜蓿二胺氧化酶(DAO)的分离纯化

[目的]寻求操作简单、高效的苜蓿二胺氧化酶(DAO)纯化方法。[方法]苜蓿种子黑暗培养3 d,幼苗依次经硫酸铵沉淀,葡聚糖凝胶G-100(sephadex G-100),DEAE-纤维素以及羟基磷灰石(hydroxyapatite,HAP)层析分离纯化,最后经聚丙烯酰胺凝胶电泳。[结果]最佳分段盐析的硫酸铵饱和度为20%~50%。经一系列层析分离后酶液比活力达84.67 U/mg,回收率为26%。经非变性聚丙烯酰氨凝胶电泳后,出现1个蛋白质条带,相对分子质量约为110 k Da。而在变性聚丙烯酰氨凝胶电泳后,出现2个蛋白质条带,相对分子质量约为55和40 k Da。[结论]苜蓿DAO是由2个大小不同的亚基组成的异源二聚体。     

甘蔗叶多糖的分离纯化及其体外活性分析

以甘蔗叶为原料,采用机械力辅助超声法提取甘蔗叶粗多糖。经除蛋白、除色素、除小分子杂质等预处理后,用DEAE-52纤维素离子柱及DEAE-琼脂糖凝胶FF离子柱对甘蔗叶粗多糖进行分离纯化,得到SCLP-1和SCLP-5两种甘蔗叶纯多糖,并对其红外吸收特征、抑菌性能和抗氧化性能进行进一步研究。结果表明：甘蔗叶粗多糖提取率为1.8%,除蛋白率为39.8%,除蛋白过程多糖保留率为58.6%,除色素率为67.9%;除色素过程的多糖保留率为60.2%,除小分子杂质过程的多糖保留率为96.8%。红外光谱扫描结果显示, SCLP-1和SCLP-5这两种甘蔗叶纯多糖均具有多糖特征吸收峰;抗氧化试验结果显示,SCLP-5的抗氧化能力略高于SCLP-1的抗氧化性但均低于V_C;抑菌试验结果显示,两种纯化组分对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均有良好的抑制作用,且对大肠杆菌的抑制效果优于金黄色葡萄球菌。     

甘薯叶多酚氧化酶的分离纯化和部分性质研究

经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析,从甘薯叶中得到多酚氧化酶(PPO)电泳纯制品.酶比活力为50 075.43 U/mg,纯化倍数为597.99,回收率为0.48%,相对分子质量约为6.44×104,最适pH值为6.5,最适温度为35℃,且在25～55℃内较稳定.有机溶剂甲醇、乙醇、异丙醇对多酚氧化酶均有一定抑制作用,其抑制作用由强到弱顺序为异丙醇、乙醇、甲醇.低浓度的抗坏血酸和亚硫酸钠对多酚氧化酶有强烈的抑制作用,柠檬酸次之,EDTA-2Na的抑制效果较弱.     

茶树多酚氧化酶同工酶的分离纯化

以龙井43号茶树鲜叶为材料,通过硫酸铵分级沉淀、离子交换层析、凝胶过滤层析等方法对茶树多酚氧化酶同工酶进行分离纯化,最终分离出1个单一同工酶(PPO V),该同工酶亚基大小约为80ku。     

甘薯叶多酚氧化酶的分离纯化和部分性质研究

经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析,从甘薯叶中得到多酚氧化酶(PPO)电泳纯制品.酶比活力为50 075.43 U/mg,纯化倍数为597.99,回收率为0.48%,相对分子质量约为6.44×104,最适pH值为6.5,最适温度为35℃,且在25~55℃内较稳定.有机溶剂甲醇、乙醇、异丙醇对多酚氧化酶均有一定抑制作用,其抑制作用由强到弱顺序为异丙醇、乙醇、甲醇.低浓度的抗坏血酸和亚硫酸钠对多酚氧化酶有强烈的抑制作用,柠檬酸次之,EDTA-2Na的抑制效果较弱.     

大孔树脂分离纯化柞树叶总黄酮及其抗氧化活性研究

[目的]研究柞树叶总黄酮的纯化工艺及抗氧化活性.[方法]采用静态吸附与解析的方法,通过比较6种大孔树脂的吸附和解析性能,优选适宜的大孔树脂,并优化适合分离柞树叶总黄酮的解析条件.以VC为对照,对其还原力、DPPH自由基(DPPH·)和超氧阴离子自由基(O2-·)的清除能力进行研究.[结果]D101型大孔树脂纯化柞树叶总黄酮吸附与洗脱效果最好,其纯化最佳工艺条件为粗提液浓度0.55 mg/mL、上样流速1.5 mL/min、洗脱剂40％乙醇(V/V)、洗脱流速1.5 mL/min,柞树叶总黄酮纯度可达65.5％;分离纯化后柞树叶总黄酮具有良好的总还原能力以及清除DPPH自由基和抗超氧阴离子自由基活性,其总还原力大于VC的还原力,当质量浓度为0.03 mg/mL时,对DPPH自由基和抗超氧阴离子自由基的清除率分别为85.9％和65.9％.[结论]D101大孔树脂可用于柞树叶总黄酮的分离纯化,柞树叶总黄酮具有较强的抗氧化活性.     

钼对小鼠后代醛氧化酶和黄嘌呤氧化酶转录水平的影响

试验选用60只二月龄的清洁级ICR小鼠,随机分成4组,每组10只雌性和5只雄性小白鼠,雌雄分开饲养,饮水中加入不同剂量的钼,分别是空白对照组、低钼组(100 mg.L-1)、中钼组(200 mg.L-1)、高钼组(400mg.L-1),4周后雌雄合笼饲养。产仔后从每组仔鼠中随机雌性小白鼠30只和15只雄性小白鼠按原分组给予不同剂量的钼,8周后,再从每组中随机选取雌性小白鼠10只和5只雄性小白鼠合笼饲养,待其产仔。如此往复,使小鼠繁殖四代。以第三代(F2代)作为研究对象,应用实时荧光定量PCR的方法测定肝脏AOX和XO的转录水平。结果表明,与对照组相比F2代小鼠AOX和XO的转录水平随钼添加剂量的增加呈递增趋势,实验组与对照组差异显著(P<0.05)。可见长期钼暴露可提高小鼠后代AOX和XO的转录水平。     

辣椒叶片中3种类胡萝卜素组分分离方法的研究

为研究辣椒叶片中类胡萝卜素组分与品种耐低温弱光性的关系,采用YMC-C30色谱柱(250mm×4.6mm i.d.,5μm),以‘陇椒3号’为试验材料,建立了分离测定辣椒叶片中类胡萝卜素组分及其含量的反相高效液相色谱法.流动相组成为A,乙腈∶甲醇(体积比60∶40);B,甲基叔丁基醚,梯度洗脱;检测波长450nm;柱流速1.0mL/min;柱温25℃.以外标法定量,叶黄素、玉米黄素和β-胡萝卜素各组分的线性关系良好,相关性系数介于0.996 1~0.999 9;平均回收率为80%~98.9%.试验方法可用作叶黄素、玉米黄素和β-胡萝卜素的分离与定量测定,为辣椒叶片中类胡萝卜素组分含量的测定提供了保证.     

高蛋白饲粮对肉鸡肾氧化损伤及黄嘌呤氧化酶基因mRNA表达量的影响

【目的】研究高蛋白饲粮对肉鸡肾氧化损伤及黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase,XOD）的影响。【方法】选取120羽20日龄健康白羽肉杂鸡,随机分为4组,每组5个重复,每个重复6羽。对照组饲喂基础饲粮（蛋白质含190 g/kg）,试验组饲喂在基础饲粮中添加豆粕使粗蛋白含量分别达到220,250,280 g/kg的饲粮。试验期为14 d。于试验第0,7和14天,分别从每组随机选取5羽鸡经翅下静脉采血,分离血清,用于肾功能（血清钙（Ca）、肌酐（CREA）、尿素氮（BUN）、尿酸（UA）、血清磷（P）、镁（Mg）含量）、脂质过氧化（血清丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）、羟自由基（·OH）含量和总抗氧力（T-AOC）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）活性）及XOD活性检测。试验结束时,每组选5羽鸡进行解剖,取肾脏组织,用于检测XOD基因mRNA的表达量。【结果】1）与对照组相比,各高蛋白饲粮组肉鸡血清Ca、CREA、BUN、UA含量显著或极显著上升（P＜0.05或P＜0.01）,血清P、Mg含量变化不显著（P＞0.05）。2）与对照组相比,各高蛋白饲粮组肉鸡血清MDA、NO、·OH含量显著或极显著升高（P＜0.05或P＜0.01）,T-AOC、GSH-Px、SOD活性显著或极显著降低（P＜0.05或P＜0.01）。3）与对照组相比,各高蛋白饲粮组XOD活性显著升高（P＜0.05）,肾组织XOD mRNA表达量显著增加（P＜0.05）。【结论】高蛋白饲粮可改变肉鸡肾功能与脂质过氧化,导致血清XOD活性以及肾组织XOD mRNA表达量升高,导致鸡肾脏损伤。     

木薯叶多酚氧化酶的提取及其酶学性质研究

以木薯叶为原料,研究木薯叶多酚氧化酶PPO的最佳提取条件与酶学性质。结果表明,木薯叶PPO 的 最佳提取条件为磷酸缓冲液PBS的pH 值6.8料液比4 mL/g提取时间6 h;木薯叶PPO 酶促反应产物在399 nm 处有最大吸收峰,以邻苯二酚为底物的酶促反应的米氏常数Km=0.8 mol/L动力学方程为V=2000[S]/0.8+[S]该酶最 适温度为37益,最适pH 值为7.0。     

烤烟叶片多酚氧化酶和抗坏血酸氧化酶活性影响因素研究

研究了一些理化因素对烤烟叶片多酚氧化酶和抗坏血酸氧化酶活性的影响．结果表明，2种酶均较耐高温，但抗坏血酸氧化酶热稳定性好于多酚氧化酶．多酚氧化酶作用最适pH值为6，抗坏血酸氧化酶为5．Cu^2 能增强多酚氧化酶活性，减弱抗坏血酸氧化酶活性．EDTA，NaHSO3，H3BO3，柠檬酸既是多酚氧化酶的良好抑制剂，又是抗坏血酸氧化酶的激活剂．     

不同种植密度对白肋烟游离氨基酸含量的影响

【目的】探索种植密度对白肋烟烟叶游离氨基酸含量变化及品质的影响,确定白肋烟最佳种植密度,为优化其农艺措施提供参考。【方法】采用OPA、FMOC联合在线衍生反相高效液相色谱法对不同种植密度下白肋烟中游离氨基酸含量进行测定。【结果】种植密度对白肋烟氨基酸含量的影响表现为：天冬氨酸〉丝氨酸〉苯丙氨酸〉谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、精氨酸＋苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、酪氨酸、蛋氨酸、赖氨酸、亮氨酸〉缬氨酸〉异亮氨酸〉胱氨酸;总游离氨酸的含量随种植密度的增加呈先增加后减少的趋势;不同处理之间以行株距100cm×50cm、种植密度19995株/ha烟叶的香气质较纯净、香气量较足、杂气较少、刺激性较低、总得分最高,行株距110cm×45cm、种植密度20190株/ha和行株距120cm×40cm、种植密度20835株/ha次之,行株距120cm×50cm、种植密度16665株/ha得分最低。【结论】种植密度对白肋烟中的天冬氨酸、丝氨酸、苯丙氨酸含量的影响最大,而对胱氨酸、缬氨酸和异亮氨酸的影响较小。行株距110cm×45cm,种植密度20190株/ha时,总游离氨基酸含量最大,可获得质量好、品质优的白肋烟烟叶。     

南方红豆杉枝叶与果实中6种紫杉烷类化合物含量分析

以南方红豆杉的枝、叶、果实为材料,建立了高效液相色谱法同时测定6种紫杉烷类化合物(紫杉醇、三尖杉宁碱、7–表–10–去乙酰紫杉醇、7–表–紫杉醇、巴卡亭III、10–去乙酰巴卡亭III)含量的方法。结果表明:以甲醇–乙腈–水(体积比为25∶36∶39)为流动相,等度洗脱,检测波长227 nm,6种紫杉烷类化合物在35 min内完全分离;南方红豆杉的枝、叶、果实中6种紫杉烷类化合物含量存在差异,其中,紫杉醇和7–表–10–去乙酰紫杉醇在种胚中含量最高,分别为866.47、722.50μg/g,10–去乙酰巴卡亭III、巴卡亭III和7–表–紫杉醇在叶中的含量最高,分别为301.20、234.08、11.74μg/g,三尖杉宁碱含量最高的部位是枝,为392.69μg/g。     

类芽孢杆菌胞外胆固醇氧化酶的分离纯化

[目的]探讨类芽孢杆菌产生胞外胆固醇氧化酶(COD)的分离、纯化方法,为其生产和应用提供技术支持.[方法]将类芽孢杆菌发酵液通过旋转蒸发浓缩、蔗糖透析浓缩、DEAE离子交换柱层析和凝胶层析,纯化目的蛋白,然后测定获得酶的基本酶学性质.[结果]类芽孢杆菌发酵液经DEAE离子交换柱层析和SephadexG-75凝胶柱层析后,纯化所得的COD比活力达6.83U/mg,酶活力回收为35.6%,纯化倍数为13.4倍.纯化酶经SDS-PAGE显示为均一条带,分子量约58 kDa.将纯化的COD作用于不同浓度胆固醇,采用Lineweaver Burk作图法,测得其Km=3.3×10-5 mol/L.薄层层析结果显示,产物为胆甾-4-烯-3-酮,说明纯化所得酶是COD.[结论]纯化获得电泳纯类的芽孢杆菌胞外COD,其与底物亲和力较强,具有潜在的应用研究价值.     

反相高效液相色谱法在测定白肋烟烟叶游离氨基酸含量中的应用

应用反相高效液相色谱技术建立了白肋烟烟叶游离氨基酸的测定方法.试验前处理首先采用超声波萃取,而后用邻苯二甲醛/3-巯基丙酸作为衍生剂进行柱前衍生,衍生化后进行液相色谱分析.结果表明,该方法的回收率为95.3%~100.7%,RSD为2.32%~9.24%(n=6).利用该方法对湖北恩施中二级的白肋烟烟叶中的游离氨基酸进行了测定,有17种氨基酸被测出,其中天氡氨酸的含量最高,约占总量的65%,胱氨酸含量最低,约占总量的0.2%.     

红稗多糖的分离纯化工艺

为研究红稗粗多糖不同的脱蛋白工艺,并确定DEAE-52纤维素交换层析柱纯化分离红稗多糖的最优条件。用Sephadex G-100柱层析分离纯化得到的红稗多糖并采用柱前衍生化高效液相色谱法对纯化后的红稗精多糖的单糖组成种类进行测定。结果表明:红稗粗多糖的最佳上样浓度为5 mg/mL,洗脱速度0.5mL/min,上样体积25mL;采用Sevage法除蛋白3次,得到的蛋白清除率以及多糖保存率均较高,通过DEAE-52纤维素的柱层析分离纯化后可得到大组份多糖;再由Sephadex G-100柱层析分离纯化得到的大组份红稗中性多糖;再利用柱前衍生化高效液相色谱法(HCLP)测定分离纯化后的红稗多糖主要由L-鼠李糖(rhamnose,Rham)、D-葡萄糖醛酸(glucuronic acid,Glu)和葡萄糖(glucose,Glc)3种单糖组成。