不同产地加工方法对何首乌中二苯乙烯苷含量的影响

分别采用晒干、烘干法加工处理不同片型、规格的何首乌药材,采用HPLC法测定其中二苯乙烯苷的含量。以考察不同产地加工方法对何首乌中二苯乙烯苷的影响,为优选何首乌的产地加工方法及优化工艺提供依据。结果表明不同片型、规格何首乌二苯乙烯苷的平均含量依次为100℃烘干≈晒干﹥80℃烘干﹥60℃烘干,随着切片厚度的增加,其含量逐渐减少。可见不同产地加工对何首乌中二苯乙烯苷的含量有影响,其中片型、规格对其影响不显著,干燥方法对何首乌中二苯乙烯苷的影响显著。     

十堰地区何首乌不同生长期主要活性成分的分布及含量变化

为探索十堰地区何首乌(Polygonum multiflorum Thunb.)中活性成分随生长年限的动态变化过程,以确定何首乌人工栽培的适宜采收时期,采用HPLC法连续测定何首乌移栽后不同生长时期、不同器官中二苯乙烯苷(THSG)和不同形态蒽醌类物质的含量。何首乌地下部干物质含量在移栽后3年内持续增加,移栽后的2年内增加最快,第3年增长速度明显减慢。何首乌不同器官中二苯乙烯苷和蒽醌类物质含量高低顺序均为:未膨大根块根茎,叶中上述2类物质的含量微少、难以检出;根中二苯乙烯苷和蒽醌类成分含量均在移栽后2年内呈"直线式"增加趋势,并于第2年12月份达到最大值,第3年与第2年同时期相比上述2类物质的含量没有显著差异;茎中上述2类物质的含量在3年间总体差异不显著,但在不同季节存在明显波动,均以每年12月份含量最高。十堰地区何首乌在移栽后第2年12月份的质量、产量相对较好,可作为人工种植何首乌适宜采收期的参考依据。     

指纹图谱条件下何首乌中二苯乙烯苷的含量测定

采用高效液相色谱仪,在指纹图谱条件下测定了20批何首乌药材中二苯乙烯苷的含量。所选色谱柱Ag-ilent SB-C18(5μm,4.6 mm×250 mm),检测波长280 nm,流动相乙腈-0.4%磷酸水溶液梯度洗脱,流速1.0mL/min,柱温25℃,分析时间60 min。经精密度、稳定性、重复性试验考察,RSD均小于3%,平均回收率为100.33%,表明所建立的方法稳定可靠,可满足企业在进行指纹图谱研究的同时进行二苯乙烯苷的含量测定。     

不同栽培密度对何首乌块根及其品质的影响

为何首乌的规范化栽培提供理论依据,采用田间试验与室内测定相结合的方法,研究了不同栽培密度对何首乌块根的生长、产量和品质的影响。结果表明:在贵州都匀何首乌种植基地,密度对何首乌块根的生长、产量和品质均有影响,在起厢60cm、沟30cm搭架栽培条件下,适宜的种植密度为6万株/hm2,即行距45cm、株距37cm,在此密度下生长18个月的何首乌块根鲜重达12 057.60kg/hm2,二苯乙烯苷和结合蒽醌含量分别达2.768%和0.161%。     

不同加工方式对连翘药材品质的影响

为明确不同加工方式对连翘药材品质的影响,以生晒法为对照,研究了煮-晒、蒸-晒、煮-烘和一体化机器加工方式对连翘水分、总灰分、醇溶性浸出物、连翘苷和连翘酯苷A含量的影响。结果表明:不同加工方式下,连翘药材水分和总灰分含量与对照差异不显著;一体化机器加工的连翘药材中醇溶性浸出物、连翘苷和连翘酯苷A含量显著高于其他加工方式;煮-晒、蒸-晒和煮-烘加工方式下,连翘药材中醇溶性浸出物和连翘酯苷A含量均显著高于对照。不同加工方式对连翘药材品质影响差异较大,各指标都达到《中国药典》规定范围内,一体化机器加工的连翘药材品质最优,煮-晒、蒸-晒和煮-烘方式次之,生晒方式效果最差。     

双链RNA干扰技术在毛状根体系中对何首乌芪合酶基因Fm STS功能研究中的应用

[目的]将双链RNA介导的基因沉默与发根农杆菌瞬间表达渗入相结合,为植物功能基因的研究提供一套有效的方法。[方法]构建含gfp基因、CaMV 35S启动子及基于何首乌中芪合酶Fm STS基因序列设计的双链RNA的干扰重组质粒pBIN-35S-正向-反向-GFP(干扰),并将其与空白表达质粒pBIN-35S-GFP(空白)分别导入野生型发根农杆菌MSU440中,转化何首乌无菌苗的叶片,诱导生成毛状根。[结果]双链RNA介导的芪合酶Fm STS基因表达沉默,空白对照组二苯乙烯苷含量为2.18 mg/g,是双链RNA干扰组(0.65 mg/g)的3倍多。[结论]应用dsRNA介导的RNAi能有效沉默何首乌Fm STS基因,芪合酶Fm STS基因是何首乌中二苯乙烯苷合成代谢的关键酶基因。     

不同浓度GGR对何首乌扦插的影响

[目的]为探讨适合何首乌扦插的GGR浓度。[方法]选用1年生何首乌枝条,用GGR溶液浸泡。研究了不同GGR浓度（25、50、100、200mg/L）对扦插生根的影响。[结果]4个GGR处理中,100mg/L浓度处理下何首乌扦插的成活率最高,达71．67％。10．0mg／L处理与200、25mg/L处理的成活率差异极显著。100mg/L与50mg/L处理的成活枝条生根数目最多,分别为2．74和2．72条。100mg/L处理成活枝条所生的根最长,为31．17mm。100mg／L处理与其他处理,50mg／L处理与25mg/L处理之间的根长有显著差异。100mg/L处理成活枝条新茎长度最长,成活枝条的新叶片数最多。[结论]何首乌进行扦插时,GGR的最适浓度为100mg/L.     

枯草杆菌发酵对何首乌抗氧化成分及肝癌细胞抗增殖作用的影响

[目的]探讨何首乌经枯草杆菌发酵后主要抗氧化成分及其对肝癌细胞抗增殖作用效果的变化,为进一步研究何首乌发酵炮制方法及开发何首乌产品提供科学参考.[方法]将生何首乌用枯草杆菌发酵处理后,测定生品和发酵品的游离型蒽醌、结合型蒽醌和总多酚含量等成分的变化,并对比何首乌生品和发酵品对肝癌细胞HepG2抗增殖作用的变化.[结果]何首乌生品和发酵品总游离型蒽醌含量分别为1.56和1.60 mg/g,总结合型蒽醌含量分别为1.24和0.79 mg/g,何首乌经枯草杆菌发酵后结合型蒽醌含量极显著下降(P<0.01,下同).何首乌生品和发酵品水提取液的总多酚含量分别为44.88和74.01 mg/g,乙醇提取液的总多酚含量分别为61.84和93.86 mg/g,何首乌经枯草杆菌发酵后总多酚含量极显著增加.0.025 g/L何首乌生品对肝癌细胞HepG2作用24 h后的细胞抑制率为4.2%,0.25 g/L何首乌生品对肝癌细胞HepG2作用72 h后的细胞抑制率为-11.1%(负值表示促进细胞生长),即随着何首乌生品浓度增加和作用时间延长,其对肝癌细胞生长的作用由抑制转变为促进.经枯草杆菌发酵后,0.025 g/L何首乌发酵品对肝癌细胞HepG2作用24 h后的细胞抑制率为9.9%,0.25 g/L何首乌发酵品对肝癌细胞HepG2作用72 h后的细胞抑制率为20.9%,即随着何首乌发酵品浓度增加和作用时间延长,其对肝癌细胞HepG2有明显的抗增殖效果.[结论]枯草杆菌发酵可降低何首乌的毒性,增强其对肝癌细胞HepG2的抗增殖作用,表明使用枯草杆菌发酵何首乌的炮制方法是一种安全有效的炮制减毒方法,对开发相应何首乌炮制品有重要意义.     

何首乌叶愈伤组织的诱导和二苯乙烯苷含量的检测

[目的]对何首乌叶进行愈伤组织诱导并检测叶愈伤组织中二苯乙烯苷的含量。[方法]在25℃暗箱培养条件下,将何首乌叶在含有浓度为1 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸（2,4-D）和浓度为0.4 mg/L萘乙酸（NAA）的MS诱导培养基中进行诱导,15 d后把诱导出的愈伤组织转接到相同培养基中培养15 d,共转接3次,并通过HPLC法检测叶愈伤组织中二苯乙烯苷的含量。[结果]诱导出的愈伤组织生长状况良好,并且测得叶愈伤组织中二苯乙烯苷的含量为0.37 mg/g。[结论]由叶诱导出的愈伤组织中含有二苯乙烯苷,该愈伤组织可以用于进一步的生理生化研究。     

何首乌营养器官的解剖学与蒽醌类物质组织化学研究

为给何首乌的药用成分积累规律研究提供结构学和组织化学资料,对何首乌的营养器官根、茎、叶及块根进行了解剖学研究,同时对其主要药用成分蒽醌类物质进行了组织化学研究。结果表明:根、茎的初生结构和次生结构及叶的结构与一般双子叶植物相似;块根由周皮、次生韧皮部、异常维管束、次生木质部及初生木质部组成,异常维管束属周韧维管束类型;何首乌的蒽醌类物质主要存在于块根内,茎、叶和根内含量较少。     

何首乌种子发芽试验研究

明确温度、培养方式、盐分胁迫对何首乌种子发芽的影响,可以为何首乌种子发芽率检验及田间播种提供参考。采用培养皿法培养种子,统计发芽率。结果表明,何首乌种子在25℃时,发芽率最高;在盐胁迫条件下,随着盐浓度的升高,种子发芽率呈下降趋势,低盐条件下,发芽率与对照差异不显著;在同一温度条件下,暗培养比光培养发芽率高,纸间比纸上发芽率高。何首乌种子发芽率检验时,应选择在25℃,无光照条件下,双层滤纸间培养,在发芽试验第9天,作为计算种子发芽势的天数。播种育苗田盐分浓度不能高于3 g/L,过高则影响何首乌种子发芽。     

何首乌嫩枝扦插繁殖研究

以何首乌新生嫩枝作插条,研究扦插基质、插条剪裁和植物激素NAA浓度对插条生根的影响。结果表明,以质地疏松、富含有机质的菜园土作扦插基质优于河沙或黄心土;用枝条的中下段,剪成含2~3个茎节、带顶叶的插条为佳;50mg/kg的NAA溶液浸泡插条基部30min对生根有显著的促进作用,浓度过高不利于生根。     

何首乌组培快繁技术研究

为建立道地种源德庆何首乌(Polygonum multiflorum Thunb.)组培快速繁殖体系,为生产提供优质种苗,本文以何首乌的带腋芽茎段为外植体,通过单因素变量法探究何首乌丛生芽、生根和炼苗的适宜条件。结果表明,诱导何首乌外植体丛生芽的适宜配方为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA;诱导何首乌生根的适宜配方为1/2 MS+0.1 mg/L NAA,生根率达100%;建立了道地种源德庆何首乌组培快速繁殖体系。     

何首乌丰产栽培技术研究进展

近年来,随着何首乌的综合开发利用,其野生资源日益匮乏,何首乌人工繁殖和栽培显得尤为重要。结合近年来对何首乌的研究情况,总结了何首乌生物学特性、成分与药理以及人工繁殖和栽培技术方面的研究现状,并对今后的研究工作进行了探讨。     

不同质量浓度IBA对中药何首乌扦插的影响

以1年生硬枝为材料,研究不同IBA质量浓度(25,50,75,100,200mg/L)对何首乌扦插生根的影响。结果表明,不同质量浓度IBA对何首乌扦插枝条成活率、成活枝条的新生根数、根长、新发茎长度和新生叶片数均有显著影响;以IBA质量浓度为100mg/L的生根率最高,达48.5%;成活枝条新生根数最多,为2.5条;平均根长最长,为5.95cm;新发茎平均长度最长,为12.90cm;平均新生叶片数最多,达6.15片。说明用IBA处理何首乌扦插的适合质量浓度是100mg/L。     

施肥对何首乌产量及主要成分含量的影响

为探询适宜何首乌(Polygonum multiflorum Thunb.)生长的最佳配方施肥技术,采用"3414"不完全试验设计施肥方案,比较了不同施肥水平对何首乌干物质积累、主要成分含量的影响。结果表明,适当的氮、磷、钾施肥量及其配比能显著提高何首乌产量与主要成分含量,其中N_2P_2K_2处理为何首乌最优的水平组合,其肥料比例为氮肥10 kg/667 m~2、磷肥7.5 kg/667 m~2、钾肥6 kg/667 m~2,该结果可为十堰山区何首乌的高产优质生产提供科学依据与参考。     

何首乌不同种源的叶性状变异及聚类分析

[目的]研究何首乌不同种源的叶性状变异情况,并对不同种源何首乌进行聚类,为何首乌良种分类、鉴定、选育和快速繁殖育苗提供依据。[方法]对何首乌在全国主要分布区的31个种质资源的叶形态性状进行测定,分析不同产地何首乌叶片的遗传变异。[结果]供试何首乌种源内各单株叶性状较为稳定,变异主要来源于单叶面积、叶片中宽、叶宽等指标;种源间叶各性状变异明显,变异主要来源于单叶干重、叶片面积、叶片中宽、叶长等指标。对何首乌叶各性状间的相关关系研究表明,单叶面积和单叶干重均与叶长、叶片中宽、叶宽、叶厚、叶柄长呈极显著正相关,而与WWR（叶宽与叶长1/2处宽度之比）、LWR（叶长与叶长1/2处宽度之比）呈显著负相关,此外叶长、叶片中宽、叶宽、叶柄长这几个直观的叶性状指标相互之间呈极显著正相关。主成分分析结果表明,前3个主成分的累积方差贡献率高达97.4%,能够较准确反映何首乌种源叶性状的综合表现。聚类分析结果表明,供试31个何首乌种源。划分为3大类群。第一类群地理区域为贵州中部、西部和相邻的广西西北部及西部高海拔地区;第二类群地理区域为湖南、湖北、四川、广东及广西的大部分地区;第三类群地理区域为安徽、江苏、河南及山东。[结论]叶性状的聚类分析表明地理位置靠近的种源能聚在一起。该研究为何首乌的品种分类提供了一定依据。     

何首乌资源生产和质量控制研究进展

综述何首乌资源适宜的生态环境、产地分布与市场、规范化种植(GAP)、炮制加工工艺、质量标准与控制、资源保护与可持续发展等方面的研究进展。     

何首乌查尔酮合成酶基因的克隆及序列分析

[目的]克隆何首乌查尔酮合成酶基因并作序列分析。[方法]以cDNA序列的保守区域设计引物,以何首乌 （ Polygonum multiflorum Thunb.）为材料,根据其他植物查尔酮合成酶（Chaleone synthase,CHS）基因eDNA序列的保守区域设计引物,利用RT-PCR和3＇-RACE进行克隆。[结果]从何首乌叶cDNA中克隆出了长度为1258bp的基因片段。序列分析表明,该片段具有典型的CHS基因家族的结构域,为何首乌的CHS基因片段,命名为PmCHS。将得到的序列提交GenBank,序列号为FJ601685。对获得的PmCHS的氨基酸序列进行比较分析,发现PmCHS含有Phe215,推测其能够催化聚酮的合成反应。何首乌CHS与其他植物CHS的氨基酸序列的进化分析表明,其与同为蓼科的虎杖和掌叶大黄的同源性较近。[结论]何首乌查尔酮合成酶基因的成功克隆为蓼科植物中蒽醌的基因工程等研究打下了良好的基础。