动物用冻干疫苗耐热保护剂研制成功

在我国动物用冻干疫苗，多年来必须在～１５℃以下条件保存，这对于疫苗的生产、运输保存及使用等带来诸多困难。黑龙江省生物制品一厂研究所张云浦高级兽医师主持的黑龙江省科委下达的《动物用冻干疫苗耐热保护剂的研究》课题历经三年多的研究，采取多个配方，多种组合，不同配比，分别对不同种类的动物疫苗，进行了大量的试验研究。完成了鸡传染性法氏囊，鸡传染性支气管炎，鸡传染性喉气管炎，鸡痘等多种冻干活疫苗的耐热保护剂，所配制的动物疫苗，在２℃－８℃条件保存两年以上，其疫苗效价稳定和对动物免疫效果均达国外同类疫苗的水平…     

兽用冻干疫苗耐热保护剂的研究：Ⅱ，鸡传染性法氏囊病弱毒（B87）冻干活疫苗耐热保护剂的试验

用耐热冻干保护剂配制的鸡传染性法氏囊病（B87）试验疫苗，在2－8℃条件下，保存12、24个月效价基本不变，保存37个月后，对鸡免疫攻毒,保护率仍为91％－100％。     

耐热保护剂鸡传染性支气管炎活疫苗试验

用3批耐热保护剂冻干的鸡传染性支气管炎活疫苗在2-8℃条件下放置2年，疫苗的病毒含量EID50由10^53、10^55、10^55分别下降为10^37、10^41、10^37。在20-25℃条件下储存6个月病毒含量EID50由10^53、10^55、10^55分别下降为10^39、10^35、10^41。由试验结果可知，试验中的3批耐热保护剂冻干的鸡传染性支气管炎活疫苗在2—8℃条件下保存有效期不少于2年，20-25℃条件下仍具有6个月的有效期。     

鸡传染性支气管炎活疫苗稀释后室温放置不同时间对疫苗效价的影响

为了指导临床上正确使用鸡传染性支气管炎活疫苗,本试验我们选择牛奶蔗糖保护剂和耐热保护剂冻干的两种疫苗,分别用稀释液溶解后,在室温放置不同时间,检测疫苗效价。结果显示室温存放时间对牛奶蔗糖保护剂冻干的疫苗影响较大,对耐热保护剂冻干的疫苗影响较小。     

猪繁殖与呼吸综合征活疫苗耐热冻干保护剂的试验

目前,弱毒活疫苗是预防畜禽传染病的主要疫苗之一,在我国动物用疫苗中,活疫苗占相当大的比例.国内疫苗企业常用的保护剂主要是蔗糖、牛奶、明胶等,组方简单,保护性能差.如果在2℃～8℃条件下,保存期只有3～6个月,多需要在-15℃以下保存[1-2].而国内传统的动物用疫苗保护剂的研制相对滞后,使疫苗的长期保存和长途运输受到很大限制,加上基层防疫部门缺乏必要的冷冻和冷藏设施,容易因免疫失效而造成疫病流行[3].所以,耐热保护剂的研究非常急需,发达国家在20世纪80年代就已开始进行耐热保护剂的研究,目前已经基本采用耐热冻干保护剂生产冻干疫苗,但由于保护剂的研究和应用属于专利资料,处于保密状况中.     

鸡痘耐热保护剂活疫苗的研究

选择不同基质组成保护剂与鸡痘抗原进行冻干试验，试制一种适宜鸡痘弱毒株的耐热冻干保护剂。应用耐热冻干保护剂和专用的冻干曲线，制成鸡痘耐热保护剂活疫苗，经37℃保存10d的耐老化试验，每羽份病毒含量下降0．2—0．4个滴度；疫苗在2—8℃保存24个月后，每羽份病毒含量下降0．2-0．4个滴度，且均≥10^3.0EID50／羽，具有良好的热稳定性。19万羽的田间试验证明，鸡痘耐热保护剂活疫苗安全、有效。     

专利展示

食草家蝇及蝇蛆的繁育方法;鸡传染性喉气管炎冻干疫苗耐热冻干保护剂及制备工艺;鸡痘冻干苗耐热冻干保护剂及制备工艺;依维菌素缓释注射液及其制备工艺和使用方法;鸡传染性法氏囊病弱毒（B87）冻干疫苗耐热冻干保护剂及制备工艺。     

羊传染性脓疱病毒耐热冻干保护剂筛选及冻干曲线优化

采用冻干试验筛选出保护剂基础配方,再通过Plackett-Burman设计法筛选主要保护剂基质,然后通过Box-Behnken响应面分析法对羊传染性脓疱病毒(ORFV)耐热保护剂配方进一步优化,用冻干试验进一步验证筛选出1种针对ORFV保护效果最好的耐热冻干保护剂作为疫苗用候选配方。同时,依据前期试验获得的活疫苗冻干曲线,通过进一步优化,获得疫苗最佳冻干曲线。利用该冻干工艺冻干的疫苗,保护剂的保护率可达95.3%,且疫苗各项指标均达到《中华人民共和国兽用生物制品规程》要求。经37℃保存7,15,30d病毒滴度分别下降0.46,0.70,1.00;2~8℃保存3,6,12,24个月病毒滴度分别下降0.10,0.10,0.40,0.60,证明此配方制备的疫苗具有良好的热稳定性。本试验解决了ORFV细胞弱毒疫苗仅能在低温条件下保存和运输的瓶颈技术问题,使疫苗的储存、运输更为方便。     

鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒(耐热保护剂)活疫苗的研究

通过对不同保护剂基质与鸡马立克氏病火鸡疱疹病毒(HVT)相溶性的研究及冻干曲线的优化,成功研制出一种适宜HVT的耐热冻干保护剂。用其与相匹配的48h自然回温冻干曲线冻干的HVT耐热活疫苗,其病毒冻干损失比SPGA常规疫苗减少约50%,在2~8℃条件下可保存24个月,37℃保存10d病毒存活率达50.5%,而SPGA规程苗仅为31.6%。经约50万羽份的田间试验,证明安全有效并显示出良好的耐热性能,达到国外同类产品水平。     

猪繁殖与呼吸综合征活疫苗耐热冻干保护剂的研究

为了解耐热冻干保护剂在猪繁殖与呼吸综合征活疫苗中的应用效果,将高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PPRSV)分别与耐热冻干保护剂和常规冻干保护剂进行配比、冻干,制备疫苗,分别将疫苗置2~8℃保存,定期测定其效价,同时进行37℃、25℃耐老化试验。结果显示,疫苗在2~8℃条件下保存24个月,耐热苗效价下降不超过0.5个滴度,常规苗效价下降超过3.0个滴度;37℃保存10d,耐热苗效价下降不超过0.5个滴度,常规疫苗下降超过2个滴度;25℃常温保存2个月,耐热保护剂疫苗效价下降不超过0.35个滴度,而常规苗效价下降超过2个滴度。试验结果表明,耐热冻干保护剂对病毒的保护效果明显优于常规冻干保护剂,具有良好的热稳定性。     

兽用冻干疫苗耐热保护剂的研究：鸡传染性支气管炎冻干活疫苗耐热保护剂试

本试验以水解乳蛋白、乳糖、硫脲、多聚蛋白胨、聚乙烯吡咯烷酮（ＰＶＰＫ９０）等为主要材料，配Ａ组保护剂，并加Ｂ组保护剂（国内常规的蔗糖脱脂乳）和Ｃ组保护剂（国外疫苗保护剂）分别与鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ Ｈ１２０、Ｈ５２、ＨＫ肾型）弱毒原液，按一定比例配苗，采取特定的冻干曲线制备的试验疫苗，在不同温度下保存后测定效价变化情况。试验证实，Ａ组保护剂耐热保护性能最好，在２～８℃条件下有效保存期达２年以上，达到国外同类产品水平。     

鸡传染性支气管炎耐热活疫苗的研究

应用鸡传染性支气管炎病毒(H52株)与不同耐热保护剂配方和冻干曲线进行筛选.结果表明:采用冻干曲线2和耐热保护剂WXS冻干鸡传染性支气管炎病毒H52弱毒疫苗效果最佳.试制耐热活疫苗3批,其各项检验均符合要求.耐老化试验表明:经过37℃放置10d的每羽份病毒含量下降0.6～0.8个滴度,每羽份病毒含量达104.7～105.1EID50.保存期试验表明:2～8℃保存24个月疫苗每羽份病毒含量下降0.4～0.6个滴度,每羽份病毒达104.1～104.3EID50.疫苗2～8 ℃保存24个月后效检抗体水平达到1:16～1:32.免疫持续期试验表明:免疫21日龄SPF鸡,6个月后血清中和抗体效价达到1:32～1:64.田间试验表明临床观察无不良反应,安全有效.特异性试验表明耐热活疫苗抗原性不变.耐热保护剂生物学和理化特性表明保护剂安全、稳定,室温保存期达3个月.     

羊传染性脓疱皮炎弱毒苗耐热保护剂初步优化筛选试验研究

试验以羊传染性脓疱皮炎弱毒活疫苗为对象,依据冻干保护剂的保护功能,对耐热保护剂的组成、混合比例进行了初步筛选。通过反复试验,对其物理性状观察、水分含量测定、冻干前后病毒损失量、经37℃处理、25℃保存后病毒损失量等指标的比较进行筛选,优选出了符合要求的A3、A6、C4三个耐热保护剂配方。试验结果表明,使用保护剂的羊口疮疫苗在37℃保存20 d,病毒含量下降0.5~0.7个滴度,常规疫苗下降2.3个滴度;25℃保存60d,病毒含量下降0.3~0.6个滴度,常规疫苗下降2.5个滴度。从而证明了羊orf耐热活疫苗耐热效果优于常规疫苗。     

猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞苗保护剂的研究

自１９８８年我厂对干疫苗保护剂和冻干产品生产工艺进行了研究，以猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞苗为主进行了保护剂的筛选试验，找出一种保护剂配制方法，冻干曲线和时间及营养血清的配制新工艺。用这种方法生产的猪瘟细胞的毒冻干苗在３７℃环境中可保存１０天，在２２－２５℃条伯下可保存３５天，０－４℃条件下可保护２２个月，达到了国外同类苗的水平。     

鸡传染性支气管炎活疫苗耐热保护剂的研究

应用冻干制品加速热稳定性试验,测试三组冻干保护剂配方对鸡传染性支气管炎(H120株)活疫苗的耐热保护效果。结果表明A配方的耐热保护剂效果最好,使用该保护剂的疫苗表现为37℃放置10d后,病毒含量下降在0.6~0.8个滴度。     

鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗耐热保护剂筛选和优化

应用冻干制品加速热稳定试验,测试7组冻干保护剂配方对鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗（LaSota株＋H120株）的耐热保护效果。试验筛选出用于鸡新城疫、传染性支气管炎二联活疫苗的耐热保护剂,使用该保护剂的疫苗表现为37℃保存10d,病毒含量下降0．4个滴度,常规疫苗下降2～2．4个滴度;25℃保存30d,病毒含量下降0．4～0．6个滴度,常规疫苗下降1．8～2．6个滴度。证明此保护剂具有良好的耐热效果。     

耐热保护剂鸡新城疫活疫苗保存期试验

选用4种不同配方组成的耐热保护剂与鸡新城疫病毒原液制成的冻干疫苗在2-8℃条件下放置两年，其中分别于第6、12、18和24个月检测疫苗的病毒含量，选择病毒含量最高组在18个月和24个月分别免疫SPF鸡，发现疫苗在保存两年后病毒含量仍达到质量标准要求，并且免疫鸡可产生较好的抗体水平。     

猪瘟无明胶无蛋白耐热活疫苗的研制及冻干工艺

为提高猪瘟(CSF)活疫苗的耐热性能,同时避免明胶和蛋白对猪只产生的免疫副反应,用葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、乳糖、氨基酸等成分设计无明胶无蛋白耐热保护剂,根据配方的共晶点、塌陷温度科学设计冻干程序,并比较了不同预冻方式对猪瘟活疫苗效价的影响。结果表明,猪瘟病毒采用无明胶无蛋白耐热保护剂配方A冻干后具有较好的耐热性能,37℃保存10,15d,病毒的耐热损失分别为0.6lg和0.9lg;对快冻、慢冻以及退火3种不同的冻干方式进行比较,发现对猪瘟病毒冻干损失由大到小依次为:退火慢冻快冻,而耐热损失则相反;与传统的含明胶含蛋白耐热疫苗相比,猪瘟无明胶无蛋白耐热疫苗耐热效果更好,可在2~8℃长期保存30个月,动物试验表明该疫苗对猪只安全、无副反应。     

兽用冻干疫苗耐热保护剂的研究——鸡传染性支气管炎冻干活疫苗耐热保护剂试验

本试验以水解乳蛋白、乳糖、硫脲、多聚蛋白胨、聚乙烯吡咯烷酮 (PVP K90 )等为主要材料 ,配 A组保护剂 ,并加 B组保护剂 (国内常规的蔗糖脱脂乳 )和 C组保护剂 (国外疫苗保护剂 )分别与鸡传染性支气管炎病毒 (IBV H1 2 0、H52、HK肾型 )弱毒原液 ,按一定比例配苗 ,采取特定的冻干曲线制备的试验疫苗 ,在不同温度下保存后测定效价变化情况。试验证实 ,A组保护剂耐热保护性能最好 ,在 2～ 8℃条件下有效保存期达 2年以上 ,达到国外同类产品水平。     

鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂活疫苗中试示范项目启动

前不久,国家农业科技成果转化资金"鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂活疫苗中试示范"项目启动会在山东省滨州市召开。"鸡新城疫、传染性支气管炎二联耐热保护剂活疫苗中试示范"项目计划实施期为2年。该疫苗产品保存条件为2℃～8℃,有效期为24个月,降低了常规疫苗的保存条件,延长了保存期。