茶叶中多酚氧化酶同工酶分析方法的研究

作者对茶多酚氧化酶同工酶的提取、纯化及分离方法进行了比较研究,结果表明:用丙酮粉匀浆提取酶液,经葡聚糖凝胶G—25柱纯化,结合聚丙烯酰胺凝胶盘电泳或醋酸纤维膜电泳,能够把茶多酚氧化酶分离出六至七种同工酶,效果稳定可靠。     

梨多酚氧化酶同工酶组成及其对茶黄素合成的影响

用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶的方法,研究了不同品种梨(丰水梨、贡梨、雪梨、水晶梨、香梨)果实多酚氧化酶同工酶的酶带特征.结果表明,不同品种梨多酚氧化酶同工酶具有相似的酶带,但酶带数目、Rf值及相对分子质量均存在种间差异.丰水梨有11条同工酶带,贡梨7条,雪梨5条,水晶梨和香梨分别为6条和4条.PPO同工酶带Rf值集中于0.40～0.70,其相对分子质量集中于4.5×104～9.4×104.同时研究了多酚氧化酶活性和同工酶组成对茶黄素合成的影响.丰水梨果实多酚氧化酶同工酶谱带最多,酶活性最大,合成茶黄素的能力最强.多酚氧化酶合成茶黄素能力大小顺序为:丰水梨,贡梨,雪梨,香梨,水晶梨.     

萝卜雄性不育系及其保持系个体发育中5种同工酶比较

以3种萝卜雄性不育系及保持系为试材,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,研究了其在苗期叶片及花期花蕾中过氧化物酶(POD)同工酶、酯酶(EST)同工酶、超氧化物歧化酶(SOD)同工酶、多酚氧化酶(PPO)同工酶及儿茶酚氧化酶同工酶等5种同工酶酶谱的变化。结果表明,除SOD同工酶外,无论在苗期叶片中,还是在花蕾中,不育系及保持系的同工酶酶谱都表现出明显的差异。尤其是在花蕾中,这种差异更加明显。说明这4种同工酶与萝卜小孢子败育有关。     

H2O2预处理对低温下黄瓜幼苗抗氧化酶同工酶的影响

以黄瓜品种“津优1号”为试验材料,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,研究了外源H2O2预处理对低温下黄瓜幼苗叶片抗氧化酶同工酶的影响.结果表明:低温处理明显减弱了黄瓜幼苗叶片SOD2、CAT1和POD2～4酶带,外施适宜浓度H2O2明显增强了低温下黄瓜幼苗叶片超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(CAT)和过氧化氢酶(POD)同工酶的表达,表明H2O2通过影响黄瓜幼苗叶片抗氧化酶同工酶表达参与黄瓜植株低温耐性的调节.     

多酚氧化酶同工酶组成对茶黄素合成的影响

用垂直板聚丙烯酰胺凝的方法,研究了不同来源(茶叶、苹果、梨、蘑菇和漆酶)的多酚氧化酶同工酶的酶带特征。结果表明,不同来源多酚氧化酶同工酶具有相似的酶带,但对酶带数目、Rf值及分子量均存在种间差异。梨有11条同工酶带,苹果4条,茶叶有2条,蘑菇5条,而漆酶只有1条。PPO同工酶带Rf值集中于0.40～0.70的区间内。茶叶多酚氧化酶同工酶的相对分子量大于9.4×104,而梨、苹果、蘑菇和漆酶多酚氧化酶同工酶的相对分子量介于4.5×104～9.4×104。同时研究了多酚氧化酶活性和同工酶组成对茶黄素合成的影响。梨果实多酚氧化酶同工酶谱带最多,酶活性最大,合成茶黄素的能力最强。合成茶黄素能力大小顺序为:梨PPO,茶叶PPO,苹果PPO,漆酶PPO,蘑菇PPO。     

铜对华北落叶松体内多酚氧化酶的影响

对20多年生华北落叶松林及三年生换床苗铜元素及多酚氧化酶在体内的变化规律以及同工酶进行了研究,结果表明:(1)同器官中PPO酶的含量和活力差异极为显著,同一器官不同时间的多酚氧化酶的含量和活力差异也极为明显,多酚氧化酶是华北落叶松的抗寒性基础条件之一。(2)PPO酶活性的变化与Cu含量变化有关,铜处理处理后PPO酶活性增加。(3)铜处理华北落叶松能合成新的PPO同工酶蛋白,可以增加原有同工酶的活性。     

花生种子脂肪氧化酶同工酶鉴定研究

根据花生种子脂肪氧化酶同工酶等电点差异,利用等电聚焦电泳技术,对不同品种花生种子脂肪氧化酶同工酶进行鉴定分析。结果表明:(1)花生种子脂肪氧化酶同工酶有4条带,其等电点分别为pH6.35、pH7.00、pH7.46、pH7.74;(2)不同品种花生种子脂肪氧化酶的IEF-PAGE图谱有差异,其中三份材料呈现4条酶带,其它材料呈现3条酶带;(3)相同类型不同品种种子脂肪氧化酶的电泳图谱不同。     

烤烟感染赤星病后4种酶动态的研究

 本文研究11个烤烟品种接种赤星病病菌后,过氧化物酶(POD)同工酶、多酚氧化酶(PPO)、硝酸还原酶(NR)和抗坏血酸氧化酶(AAO)活性的变化规律,结果表明,相对抗赤星病强的品种,PPO在接种36h内活性升高,以后下降;POD同工酶活性变幅大,变化快,接种初期活性稍下降,然后增强,其中以阴极端2,4同工酶带增加较快,接种180h后就由弱酶带变为强带;NR活性变化不大;AAO活性提高.相反,抗赤星病弱的品种,ppo活性低于对照;POD同工酶变化不大,呈下降趋势;NR活性变幅大;AAO在接种初期活性下降,84h后回升.通过对不同品种的烤烟烟株接种赤星病菌后的4种酶活性的测定,探察到了一些抗病机理,为进一步筛选烟草抗赤星病的生化指标作了研究.     

甜瓜(Cucumis melo L.)种质资源的同工酶电泳分析

本试验用凝脉电泳法分析了44份甜瓜(Cucumis melo L.)材料功能叶的过氧化物酶(POD)、细胞色素氧化酶(Cyt)、儿茶酚酶(Cat)及酯酶(Est)同工酶和10个材料感病前后POD及Cat同工酶的变化。结果表明除Est外,不同材料的其他三种氧化酶均存在着明显的同工酶差异,其中POD同工酶的差异最大,Cyt次之,Cat相对较小。所分析的同工酶系均不能将薄皮甜瓜和厚皮甜瓜截然分开,这两类甜瓜在同工酶水平上亲缘关系很近。甜瓜植株感染病毒后其功能叶POD和Cat同工酶分子数量和种类明显增加。     

红茶萎凋发酵中多酚氧化酶、过氧化物酶同工酶的活性变化与儿茶素、茶黄素组分的消长

本文研究了红茶萎凋、发酵过程中多酚氧化酶和过氧化物酶同工酶的活性变化和儿茶素,茶黄素组分的消长。多酚氧化酶分出六个同工酶,其中以RT—17的同工酶为主,在发酵过程中各同工酶活性均下降,有两个同工酶在发酵后期消失。过氧化物酶分出十个同工酶,半定量六个,最主要的过氧化物酶同工酶是RT—105,占总活性的50%左右。发酵过程中各同工酶活性都减弱。儿茶素组分在发酵开始氧化最快的是(-)—EGCG和(-)—EGC。(+)—C在发酵初期有所增加;氧化聚合最彻底的是(-)—EGCG和(-)—ECG;(-)—EGC及(+)—C保留较多。茶黄素三个组分的变化是:TF和TFG呈明显的三阶段即发酵初期大量形成中期比较稳定和发酵后期下降。TFDG发酵初期缓慢增加,发酵后期缓慢下降。     

茶多酚氧化酶酶学性质研究

采用柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液(pH 5.6)匀浆浸提法和硫酸铵沉淀法,从茶鲜叶中提取多酚氧化酶,并通过分光光度法研究pH,温度,抑制剂对酶活性的影响.结果表明:以邻苯二酚为底物,茶多酚氧化酶PPO的最适pH为5.6,最适温度为50 ℃,亚硫酸钠、半胱氨酸和V-C为PPO的抑制剂.     

刺五加的同工酶与遗传分化的研究(Ⅰ)--花丝长度不同的刺五加植株同工酶电泳分析

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳对花丝长度不同的刺五加植株进行了6种同工酶比较分析.结果显示,花丝长度不同的刺五加在酸性磷酸酶(ACP)、苹果酸脱氢酶(MDH)、乙醇脱氢酶(ADH)、异柠檬酸脱氢酶(IDH)、细胞色素氧化酶(CCO)和过氧化物酶(POD)等6种同工酶酶谱上表现出不同程度的差异,由此对花丝长度不同的刺五加的遗传分化做出推测.     

水稻几组同核异质系二核期花药同工酶的初步分析

本研究用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术分析了4个同核异质系(珍汕97、D(汕)A、G(汕)A和W(汕)A)及其杂种一代的二核期花药的酯酶、过氧化物酶和细胞色素氧化酶同二酶。结果表明,供试材料的酯酶出现了11条酶带;过氧化物酶出现了9条酶带;细胞色素氧化酶度现了13条酶带。水稻花药酯酶、过氧化物酶和细胞色素氧化酶的酶谱和酶活性受亲本核质双方的影响。水稻花粉败育可能与酯酶同二酶E_8、E_9 E_(11),过氧化物酶同工酶Per_8、Per_9,细胞色素氧化酶同工酶Cyt_5、Cyt_7、Cyt_9、Cyt_(10)的消失或活性降低有某种关系。     

小麦籽粒发育过程中多酚氧化酶同工酶的变化

选取了19个冬小麦品种,分别在籽粒满仁期、灌浆中期和蜡熟期取样分析多酚氧化酶同工酶谱的变化。试验结果表明,满仁期多酚氧化酶同工酶谱带最多,随后,低分子量区多酚氧化酶同工酶谱带浓度不断下降,至蜡熟期,低分子量区同工酶谱带已很微弱,收获干燥后的籽粒未检测到同工酶谱带。在籽粒同一发育时期,品种间同工酶谱带非常相似。这些变化对研究成熟小麦籽粒中多酚氧化酶活性变异的原因具有重要意义。     

岩薯5号不同处理及其变异株系(龙薯3号)同工酶变化探讨

利用聚丙烯酰胺垂直凝胶板电泳分析技术 ,对不同处理后的甘薯品种岩薯 5号及其变异株系 (现已命名为龙薯 3号 )的叶片中 3种同工酶进行测定。结果表明 ,同一品种 ,经脱毒处理后的样品 ,其酯酶和细胞色素氧化酶同工酶活性均有一定程度的增强 ;过氧化物酶同工酶的活性变化与样品的抗病性具有一定的联系 ;岩薯 5号变异株系 (龙薯 3号 )在过氧化物酶同工酶和细胞色素氧化酶同工酶谱上均出现一条特征谱带 ,表现出较明显的品种差异     

高寒植物垫状雪灵芝细胞色素氧化酶变异研究

以色季拉山的高寒植物垫状雪灵芝为材料,选取分布在海拔4 500～4 650 m范围内的垫状雪灵芝3个居群为研究时象,采用聚丙烯酰胺琼脂电泳技术,对垫状雪灵芝3个居群的48个个体功能叶片的细胞色素氧化酶同工酶谱带进行测定并编码,依据酶谱带测定结果进行聚类分析;同时,结合细胞色素氧化酶同工酶的3个遗传指标进行相关分析.结果表明:来自同一居群的个体,尽管同工酶谱带具有一定程度的相似性,但居群内的遗传杂合度较大(HeA=0.752,HeB=0.815,Hec=0.815),这也说明居群内个体存在一定程度的遗传分化.研究数据显示垫状雪灵芝细胞色素氧化酶同工酶在不同的居群内与居群间存在不同程度的遗传分化,缺少有效的基因交流.     

添加多酚氧化酶和纤维素酶对大叶种红茶品质的影响

通过在发酵过程中添加不同浓度的外源酶多酚氧化酶和纤维素酶,探讨了不同浓度外源酶对大叶种红茶品质的影响。结果表明:添加外源酶多酚氧化酶和纤维素酶的茶样的氨基酸、茶多酚、茶黄素等的含量都有不同程度的提高。其中添加200 U·mL~(-1)和250 U·mL~(-1)纤维素酶的处理1和处理2的茶多酚和氨基酸含量较高,显著性明显,添加浓度为18 U·mL~(-1)的多酚氧化酶的咖啡碱含量高,添加浓度为12 U·mL~(-1)茶黄素和茶红素含量最高,结合感官审评发现,添加浓度为18 U·mL~(-1)的多酚氧化酶处理的6号茶样的滋味鲜醇,汤色红明亮,润,有金圈,品质最优,其次是5号茶样。     

毕节小檗的两种同工酶分析

为探讨毕节小檗(Berberis guizhouensis)2个居群的遗传变异性和相似性,用聚丙酰胺垂直板凝胶电泳技术对毕节小檗2个居群的细胞色素氧化酶(COD)同工酶和过氧化物酶(POD)同工酶进行研究。结果表明,毕节小檗2个居群20株植株POD同工酶酶带数为8条,其中有4条共同酶带(POD-3、POD-5、POD-7、POD-8);COD同工酶酶带数为7条,其中也有4条共同酶带(COD-3、COD-5、COD-6、COD-7)。不同居群的同工酶酶谱存在差异,同一居群的不同同工酶酶谱也存在差异;韭菜坪居群的分化程度大于艾家坪居群。     

丰水梨多酚氧化酶氧化茶多酚的研究

[目的]提高茶黄素生产的经济效益,降低生产成本.[方法]采用单因素试验探索了茶多酚与丰水梨质量比从1∶1～1∶50的反应比例条件,10～25℃的温度条件,3.5 ～6.5的pH条件,以及20 ～60 min的反应时间对多酚氧化酶氧化茶多酚的影响.采用正交试验,研究了酶与底物质量比、温度、时间、pH4个因素对丰水梨多酚氧化酶（PPO）氧化茶多酚形成茶黄素的影响.[结果]单因素试验结果显示,经组内比较,反应比例1∶40、反应温度20℃、pH 5.5、反应时间40 min下所得产物,用高精度测色仪检测,a值最大,红色最深.正交试验结果表明,4个因素对茶多酚的氧化均有显著影响.其中,对茶多酚氧化的影响程度依次为质量比＞时间＞pH＞温度,最佳组合为茶多酚与酶源质量比1∶40,温度20℃,pH 5.5,氧化时间40 min,茶多酚的转化率为45.70％.[结论]该研究可为寻求低成本的茶黄素生成途径提供依据.     

华北落叶松多酚氧化酶和过氧化物酶的研究

本文对华北落叶松多酚氧化酶和过氧化物酶活性及其同工酶进行研究。结果表明：根的多酚氧化酶活性最高,二年生枝中最低;电泳法和分光光度法测得多酚氧化酶活性的相关系数为０９９;体内多酚氧化酶和过氧化物酶活性之间的相关系数为０８８;对苯二胺和邻苯二酚混合对多酚氧化酶活性染色效果较好;茎和根中分别有６,７条多酚氧化酶同工酶条带,１０,１１条过氧化物同工酶条带。