猪戊型肝炎病毒单克隆抗体的抗原识别位点分析

采用ELISA叠加试验,对6株具有ELISA反应特性的猪戊型肝炎病毒(SHEV)单克隆抗体(McAb-αC11、αC12、γH1、γF8、BC4和CH8)的抗原识别位点进行检测。抗体反应增值结果表明,6株单抗分别针对4个不同抗原位点,McAb-γH1,BC4,CH8识别的位点各不相同,其中McAb-γH1、BC4识别的位点有部分重叠,McAb-αC11、αC12,γF8识别同一位点,位于γH1,BC4识别位点的重叠区内。     

抗猪口蹄疫病毒单克隆抗体的抗原识别位点分析

用ELISA叠加试验，对5株具有ELISA反应特性的抗猪口蹄疫病毒(FMDV)单克隆抗体(McAb—A6、F9、G17、G52、S25)的抗原识别位点进行检测。抗体反应增值结果表明，5株单抗分别针对4个不同抗原住点，McAb—G17、G52、S25识剐的住点各不相同，其中McAb—G7、G52识别的位点有部分重叠，McAb—A6、F9识别同一位点，位于G17、G52位点的重叠区内。     

淀粉酶和糖化酶体外降解玉米淀粉的机理探讨

本文采用淀粉酶、糖化酶的单酶及其复合酶进行玉米淀粉水解的试验.研究发现,淀粉酶、糖化酶分别在模拟畜禽小肠和胃内pH条件下表现出较好的酶活力;在酶单位添加量相同的条件下,淀粉酶的水解效率优于糖化酶;在pH 4.6时淀粉酶与糖化酶的水解互作效应优于添加酶量相同的单一淀粉酶,低于单一糖化酶;在pH 6.0时淀粉酶与糖化酶的水解互作效应优于添加酶量相同的单一糖化酶,低于单一淀粉酶.     

奶牛日粮淀粉的消化吸收位点对其利用的影响

本文综述了奶牛日粮淀粉的消化吸收位点对其利用影响的研究进展，重点介绍了日粮淀粉在奶牛瘤胃、小肠中的消化吸收，日粮淀粉的转化利用及淀粉消化位点对淀粉利用的影响。     

家蚕丝素固定化糖化酶的研究

茧丝经高浓度的氯化钙溶液处理或用稀碱溶液处理后,制成了粉末状丝素和碱化丝素,并以此为载体,用戊二醛为交联剂固定了糖化酶。经对固定化酶性质和动力学参数等的研究表明：丝素能较好地固定糖化酶;每克干粉末状丝素固定化酶的活力约为１８２２ Ｕ, 固定化酶的最适ｐ Ｈ 值比游离酶增加了１０ 到１２５ 个单位,最适温度比游离酶降低了５ ～１０ ℃;固定化酶具有较长的操作半衰期（１４ ～１８ｄ） ;通过米氏常数的测定,粉末状丝素固定化酶的 Ｋｍ １ ＝ ２ ．５３ ×１０ －５ , 碱化丝素固定化酶的 Ｋｍ ２ ＝３１５ ×１０ － ５ 。实验还发现： 在制备 固定化糖化 酶时, 酶的最适 浓度为 ８ ｍ Ｌ／ Ｌ,戊 二醛的 最适浓 度为０３ ％ 。     

饲料中糖化酶分析方法的研究

通过pH值、温度、提取剂的组成、提取液的纯化方法等因素的试验比较 ,以及不同饲料的验证 ,确立了饲料中外加的糖化酶的简易分析方法     

盐酸克仑特罗单抗检测试剂盒的研制

在筛选盐酸克仑特罗单克隆抗体的基础上,首次研制出利用单克隆抗体对动物组织中残留的盐酸克仑特罗进行检测的试剂盒,本研究通过对几种包被抗原种类和包被浓度进行筛选,并对单抗和二抗最佳工作效价进行严格的筛选和研究。本试剂盒的最低检测限为0.1ng/ml,检测范围在0.1～10ng/ml,通过对24份阳性样品检测并与德国r-biopharm公司和英国的RANDOX公司同类试剂盒作对比试验,阳性符合率95.8%。     

盐酸克仑特罗单抗检测试剂盒的研制

在筛选盐酸克仑特罗单克隆抗体的基础上，首次研制出利用单克隆抗体对动物组织中残留的盐酸克仑特罗进行检测的试剂盒，本研究通过对几种包被抗原种类和包被浓度进行筛选，并对单抗和二抗最佳工作效价进行严格的筛选和研究。本试剂盒的最低检测限为0．1ng／m1，检测范围在0．1～10ng／ml，通过对24份阳性样品检测并与德国r—b1opharm公司和英国的RANDOX公司同类试剂盒作对比试验，阳性符合率95．8%。     

猪口蹄疫病毒抗原位点及其抗原性差异分析

为了分析 3株猪口蹄疫病毒 ( FMDV- B、D、S)的抗原位点 ,采用 5株具有 EL ISA反应特性的抗猪口蹄疫病毒的单克隆抗体 ( Mc Ab- A6、F9、G17、G5 2、S2 5 ) ,通过 EL ISA试验分别测定 3个抗原的最适包被浓度以及 5株单抗对各抗原的饱和工作浓度。 EL ISA叠加试验的增值结果表明 ,5株 Mc Ab分别针对 4个不同的抗原位点 ,其中 Mc Ab- A6和 F9识别同一个抗原位点。FMDV- B株含有这 4个不同抗原位点 ,而 FMDV- D、S株只有 3个抗原位点 ,没有 Mc Ab-A6、F9识别的抗原位点。根据抗原位点差异 ,可以将 3个毒株分成 2个不同组     

抗鸡传染性法氏囊病病毒VP3单克隆抗体制备及抗原表位的初步分析

用纯化的原核表达的IBDV VP3蛋白免疫6~8周龄的雌性BALB/c小鼠,经过3次免疫后,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经过3次有限稀释,获得分泌抗IBDV VP3抗体的4株(HRB-7B、HAR-7C、HRB-3F、HRB-10E)杂交瘤细胞系。结果表明,4株杂交瘤细胞分泌的抗体均能够特异地与IBDV VP3蛋白反应,细胞上清ELISA效价均在5.0×102以上,腹水ELISA效价为6.4×106以上;相加ELISA及肽扫描结果表明,4株中仅HRB-7C和HRB-10E 2株单抗针对的抗原表位相近,并利用肽扫描的方法初步定位4株单克隆抗体的抗原表位。本研究对进一步分析IBDV的结构与功能以及建立以表位为基础的抗原抗体诊断方法具有重要的意义。     

制备双特异性单克隆抗体的方法

双特异性抗体由于其独特的结构－2个不同抗原，引起研究机构的广泛重视。研究者将治疗药物和针对疾病部位的特异目标分别放在双特异性单克隆抗体的2个臂上。治疗药物可以是药品、毒素、酶、DNA和放射性核素等。双特异性单克隆抗体能使免疫效应细胞的细胞毒性作用于致病细胞或者诱导产生全身免疫应答。作者重点介绍了制备双特异性单克隆抗体的3种方法，分别是化学方法、生物方法和基因工程，为制备临床需要的抗体奠定坚实的理论基础。     

犬瘟热病毒截短P蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

为制备针对犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)P1蛋白的单克隆抗体(McAb),本研究利用重组犬瘟热病毒P1蛋白免疫BALB/c小鼠,并将其脾淋巴细胞与SP2/0进行融合,用CDV包被ELISA板,通过间接ELISA法筛选出两株稳定分泌抗CDV-P1的杂交瘤细胞株(E9E4C10、E9F8D9)。间接ELISA检测腹水效价均为1∶10⁶,亚类鉴定结果均为IgG2b。Western blotting和间接免疫荧光(IFA)分析结果表明,两株单克隆抗体均能与重组P1蛋白和CDV发生反应;ELISA叠加试验增殖结果表明,两株单克隆抗体识别的抗原表位不同。本研究制备的特异性抗CDV-P1的单克隆抗体为建立CDV免疫学检测方法和P蛋白的功能研究奠定了基础。     

山羊支原体山羊肺炎亚种单克隆抗体的制备及抗体结合抗原表位的筛选

本研究旨在制备山羊支原体山羊肺炎亚种(M.capricolum subsp.capripneumoniae, Mccp)的单克隆抗体并筛选与抗体结合的抗原表位。试验用甲醛灭活的Mccp免疫BALB/c小鼠,运用传统的细胞融合技术进行融合获得杂交瘤细胞,亚克隆,制备单克隆抗体腹水,采用酶联免疫技术（ELISA）和免疫印迹（Western blotting）技术鉴定单克隆抗体的特异性及胶内酶切鉴定与抗体结合的抗原表位。最终成功筛选获得5株单克隆抗体,鉴定到3个与抗体结合的抗原表位,为下一步科学研究提供了初步且可靠的试验基础。     

抗猪SIgA单克隆抗体的研制

采用饱和硫酸铵盐析、SephadexG-200柱层析和离子交换柱层析技术，从猪初乳中提纯分泌型IgA(SIgA)。经SDS-PAGE电泳鉴定，纯化的SIgA达到电泳纯。以此纯化的SIgA，采用长程免疫法免疫BALB／c小鼠，取4次免疫后的脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞用PEG-1500进行细胞融合，第1次融合率为79．7％，第2次融合率为60．3％。建立间接ELISA，用于检测杂交瘤细胞上清中的单克隆抗体．初检阳性率分别为4．1％、16．8％。经2次亚克隆反复筛选获得了2株能稳定分泌抗猪SIgA单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为CA6、5D4。ELISA和Western-blotting证实，所获得的单抗能特异性针对SIgA。CA6、5D4经反复冻存、复苏及多次传代，仍能分泌高效价抗体．CA6分泌抗体属IgM、κ型，而5D4分泌抗体属IgG1、κ型。     

狂犬病病毒糖蛋白单克隆抗体的制备

用狂犬病病毒BD06株脑毒免疫BALB/c小鼠,制备G蛋白单克隆抗体。将灭活的BD06脑毒免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,通过间接ELISA法和荧光抗体病毒中和试验法进行4轮筛选,获得6F12、1B12共2株具有中和活性的糖蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。通过Western blotting分析和直接免疫荧光检测结果显示,获得一株针对狂犬病病毒糖蛋白构象表位的单抗6F12和一株针对糖蛋白线性表位的单抗1B12。小鼠中和试验结果显示,两株杂交瘤细胞分泌的抗体均具有狂犬病病毒中和活性。结果表明,获得了两株针对狂犬病病毒G蛋白不同抗原表位的中和活性单克隆抗体,为狂犬病病毒特性研究和检测奠定了基础。     

抗三肽囊素单克隆抗体的制备

为研制抗三肽囊素(bursin,KHG-NH₂)的单克隆抗体,本试验采用EDC法将三肽囊素分子赖氨酰(K)上的氨基与载体蛋白(BSA或OVA)定向偶联,分别制备三肽囊素免疫抗原(BSA-KHG-NH₂)和检测抗原(OVA-KHG-NH₂)。以BSA-KHG-NH₂免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术,筛选到18株能稳定分泌抗三肽囊素单克隆抗体的杂交瘤细胞株。这18株单克隆抗体与三肽囊素人工抗原的结合均能被三肽囊素、GKHG-NH₂四肽阻断,但不能被KHGK四肽阻断,表明18株单抗与三肽囊素分子的结合具有高度特异性。以本研究制备的单抗2D2建立间接竞争ELISA方法,检测三肽囊素含量,检测下限为4 ng/mL,线性范围为4~500 ng/mL,加标检测回收率为85.0%~92.4%。     

Antigenic Relationships within the Genus Salmonella as Revealed by Anti-Salmonella enteritidis Monoclonal Antibodies

A panel of 38 monoclonal antibodies (MAbs) that react with outer membrane proteins (OMPs) of Salmonella enteritidis was produced. On the basis of their binding pattern in ELISA, the MAbs were divided into three groups. The first group, consisting of 15 MAbs, was found to be Salmonella-specific as they did not cross-react with Escherichia coli or Pasteurella multocida. The second group of 15 MAbs cross-reacted with E. coli but not with P. multocida, reflecting the closer antigenic relationship of E. coli with Salmonella. The third group of 8 MAbs cross-reacted with both E. coli and P. multocida, indicating that the antigenic determinants identified by these MAbs are conserved in all the three genera.The antigenic relationship of the Salmonella serovars (S. enteritidis, S. gallinarum, S. typhimurium, S. dublin, S. agona, S. indiana and S. choleraesuis) was studied using OMPs prepared from them and the anti-S. enteritidis MAbs. Three MAbs appeared to be specific for S. enteritidis as they did not cross-react with any of the other Salmonella serovars. Twelve of the 38 MAbs cross-reacted with all the serovars tested. Six of these were specific to the Salmonella genus as they did not cross-react with any of the other Gram-negative bacteria tested. The reactivity pattern of the other MAbs indicated that S. gallinarum was antigenically close to S. enteritidis, followed in order by S. dublin, S. agona, S. typhimurium and S. indiana, whereas S. choleraesuis seemed to be antigenically quite distant from S. enteritidis.     

Development of an Immunobinding Assay with Monoclonal Antibodies to Diagnose Mycoplasma bovis in Semen

Veterinary Research Communications -     

抗猪支原体共同抗原单克隆抗体的制备与鉴定

以猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)168菌株F332作为抗原，免疫8周龄BALB/c小鼠，利用淋巴细胞杂交瘤技术，获得两株能稳定分泌特异单克隆抗体的杂交瘤细胞株。两株单抗与Mhp和猪鼻支原体（M.hyorhinis,Mh)等反应，而不与鸡支原体，对照血清等反应。结果表明两株单抗可能是针对猪支原体共同抗原的单抗，用SDS-PAGE电泳和Western-blot分析猪支原体的膜蛋白成分。结果显示，猪支原体的共同抗原是80kd和30kd蛋白，两株单抗均与Mhp和Mh的30kd蛋白条带反应，表明这两株单抗特异地针对猪支原体的共同抗原成分30kd蛋白，可以看出，这两株单抗在Mhp的抗原分析，血清学诊断和疫苗质量监测以及猪源支原体污染细胞检测等方面有重要应用价值。