不同来源单核细胞增多性李氏杆菌inlB和actA基因的克隆测序分析及基因缺失株的毒力试验

根据GeneBank上发表的单核细胞增多性李氏杆菌(Listeria monocytogenes,LM)的内化素B(internalin B,inlB)和肌动蛋白A(actin A,actA)基因设计特异性引物,对5株不同来源的健康绵羊单核细胞增多性李氏杆菌和一株临床分离的单核细胞增多性李氏杆菌的inlB及actA基因进行PCR扩增,克隆测序分析其序列,并对2株部分基因缺失的单增李氏杆菌进行小鼠攻毒试验。结果表明:5株健康绵羊分离株单增李氏杆菌与临床分离株有较高的同源性,并且发现2株部分基因缺失的单增李氏杆菌;小鼠攻毒试验表明缺失株毒力有降低,但是不明显。     

新疆绵羊及其环境中李氏杆菌的生态分布多样性调查

对新疆健康绵羊及其相关环境如青贮饲料、饮水、土壤、鸟粪中李氏杆菌(Listeria)种群采用改良国标法(4789.30-2010)进行生态分布多样性调查,并对分离的单核细胞增多性李氏杆菌(L.monocytogenes)采用PCR方法进行溶血素基因(hly)和血清型检测。结果:514份样本中,共检出阳性样本26份,平均阳性率为5.1%,其中羊体分离率为6.2%(22/353),饮水分离率为33%(2/6),鸟粪分离率为3.0%(2/67),其余样本均为阴性;26份阳性样品中,检出单核细胞增多性李氏杆菌5株,塞氏李氏杆菌(L.seeligeries)21株,且5株单核细胞增多性李氏杆菌均检出溶血素基因,血清型为1/2a。     

应用PCR方法鉴别绵羊致病性单核细胞增多症李氏杆菌

动物李氏杆菌病病原主要有两种,分别是单核增多症李氏杆菌和伊氏李氏杆菌(仅引起动物发病),前者是主要的,它是一种危害严重的人畜共患病病原体。人畜感染后主要表现脑膜炎、败血症、流产及单核细胞增多。近几年来,新疆先后有5个地区的3个牧区、4个农区养羊场爆发以神经症状为主要特征的李氏杆菌病,造成1 300余只羔羊死亡,经从绵羊实质器官和饲草中分离培养和形态学观察,初步确定为7株李氏杆菌,分别命名为90SB1、90SB2、90SB5、90SS1、125SL1、G1和饲草李。结合溶血试验、动物试验,再进行PCR特异性扩增,确定前5株为单核细胞增多症李氏…     

李氏杆菌研究进展

李氏杆菌病是一种重要的人畜共患传染病 ,主要由单核细胞增多性李氏杆菌引起 ,呈世界性分布。文章回顾了李氏杆菌的分离鉴定、培养、分型等生物学特性以及与其毒力有关的基因功能方面的研究进展 ,着重就该病诊断和检测的重要性以及 EL ISA和 PCR检测方法进行了概述 ,同时对该病的免疫预防和今后的研究重点进了探讨     

伊犁部分地区绵羊的单增李氏杆菌病病原的分离鉴定及带菌率调查

根据国家标准(GB 4789 30-2010)对伊犁部分地区(昭苏县、尼勒克县、霍城县、察布查尔县)羊场的绵羊、青贮饲料进行随机采样,通过培养特性、生化特性对分离株进行鉴定。结果从绵羊体内及青贮饲料中分离出14株单增李氏杆菌,并初步调查了这些地区绵羊及饲喂的青贮饲料中单核细胞增多性李氏杆菌的带菌率。     

单核细胞增多性李氏杆菌人工感染绵羊试验

将人从病羊脑分离纯化的单核细胞增多性李氏杆菌经列脉接种于健康得奴绵羊３只,结果被感染绵羊均表现出与自然感染绵羊相同的临床症状和病理变化,并从脑、心血、淋巴结中回收到了单核细胞增钨生李氏杆菌,从而证明了该分离株单核细胞增多性李氏杆菌具有较强的致病性。     

伊犁地区绵羊李氏杆菌病PCR诊断方法的建立

对伊犁部分地区绵羊血液、鼻拭、肛拭、青贮、水源进行检测,共抽检样本280个,经对样本中的细菌分离、纯化,并针对李氏杆菌高度保守的Hly基因设计特异性引物进行PCR扩增,对扩增产物进行分析。结果表明:有5株分离株含有约743 bp大小的李氏杆菌所特有的扩增片段,诊断为李氏杆菌。     

1株跨种裂解李氏杆菌噬菌体的分离鉴定

本研究旨在获得天然李氏杆菌噬菌体,提供防治李氏杆菌病新型生物制剂,减少抗微生物药物的使用,抑制病原菌耐药性的产生。利用产单核细胞李氏杆菌作为宿主菌对屠宰场污水进行双层琼脂平板法筛选,获得噬菌体,并对其进行透射电镜观察、生长特性检测(温度、pH、一步生长曲线、最佳感染复数、有机溶剂影响)、基因组酶切鉴定和全基因组测序分析。分离出的产单核细胞李氏杆菌噬菌体中,选取1株裂解性强,遗传稳定的噬菌体进行后续试验,并命名为LP8;经电镜观察为肌尾科噬菌体,可以跨种裂解18株产单核细胞李氏杆菌和5株威尔斯李氏杆菌,确定LP8的最佳感染复数为1、最适生长温度为45 ℃、最适pH为7;在6种有机溶剂中,仅异戊醇可导致LP8活性丧失;对提取的基因组进行酶切鉴定,确定为双链DNA;LP8全基因组测序结果表明,基因组大小为87 038 bp、含有120个编码基因、编码基因的累计长度为76 326 bp、编码基因的平均长度为636 bp、编码区域长度占基因组的比例为87.69%。本试验分离出产单核细胞李氏杆菌噬菌体,并对其噬菌能力和应用价值进行鉴定。分离出的LP8噬菌体相较于李氏杆菌的噬菌体,细菌裂解能力更强,适应环境范围更广。本研究为实验室后续建立产单核细胞李氏杆菌噬菌体库和产单核细胞李氏杆菌噬菌体的其他应用提供了良好的基础。     

新疆部分地区绵羊及其环境中单核细胞增多性李氏杆菌分布状况的调查

对新疆生产建设兵团农五师84团、90团,农八师新业羊场及142团羊场健康绵羊的鼻拭、肛拭、粪便、青贮、以及圈舍周围环境土壤、水源进行检测,从检测的220个样本中分离得到9株革兰氏阳性、两端钝圆,有时呈弧形,多单个或排列成"V"字形或"Y"字形的球杆菌,经培养特性、生化鉴定和PCR方法鉴定,9株均为单核细胞增多性李氏杆菌,分布率达4.0%.     

兔李斯特氏菌病的检疫

李斯特氏菌病或称李氏杆菌病,是一种散发性传染病,以全身血液中毒-败血症和子宫炎及流产为特征.本病的病原为单核细胞增多性李氏杆菌(或单核细菌增多性李斯特氏菌、产单核细胞李氏杆菌).     

新疆部分地区绵羊及其环境中单核细胞增多性李氏杆菌分布状况的调查

对新疆生产建设兵团农五师84团、90团,农八师新业羊场及142团羊场健康绵羊的鼻拭、肛拭、粪便、青贮、以及圈舍周围环境土壤、水源进行检测,从检测的220个样本中分离得到9株革兰氏阳性、两端钝圆,有时呈弧形,多单个或排列成“V”字形或“Y”字形的球杆菌,经培养特性、生化鉴定和PCR方法鉴定,9株均为单核细胞增多性李氏杆菌,分布率达4．0％。     

猪源大肠杆菌O157:H7广西分离株的鉴定

为了解大肠杆菌O157:H7是否在猪场存在,采集有拉稀症状猪的粪便,接种到新生霉素mEC增菌肉汤,增菌培养后转接到O157:H7显色培养基上,对可疑菌株用因子血清和PCR方法做进一步鉴定,实验结果证实得到5株大肠杆菌为O157:H7血清型。动物试验发现,5个分离菌株对小白鼠的致死率为33.3%—100%之间。调查结果证实广西猪群中存在强致病性的O157:H7血清型大肠杆菌。     

肠膜明串珠菌乳糖及半乳糖代谢差异性研究

在不同碳源的化学限定培养基（chemically defined medium,CDM）和脱脂乳中对8 株肠膜明串珠菌（Leuconstoc mesenteroides）进行培养,测定其生长、产酸及活菌数变化情况。结果表明：各菌株在以乳糖、半乳糖为单一碳源的CDM培养基中的生长情况存在明显差异,菌株LM1、LM2、LM4和LM8在以乳糖为单一碳源的CDM培养基中生长情况良好,菌株LM2、LM3、LM5和LM8在以半乳糖为单一碳源的CDM培养基中活力较强,但生长情况弱于乳糖环境;在脱脂乳环境下,实验菌株的活菌数于发酵初期明显增长,培养8 h后进入稳定期,发酵终点pH值在6.0以上;初步对比各菌株与乳糖、半乳糖代谢相关基因的差异性,基因与表现型的相关性还需结合乳糖水解酶活性及乳糖、半乳糖残留量进一步分析。     

新疆绵羊致病株李氏杆菌鉴别试验

李氏杆菌病是由单核细胞增多症李氏杆菌(LM)引起人与动物的一种共患传染病,其中以绵羊的敏感性最强。近几年,本病对新疆养羊业造成严重危害。本研究采用生化反应,溶血试验,致病力试验,对分离的新疆5株绵羊致病株李氏杆菌90SB_1,90SB_2,90SB_5,90SS_1,125SL 进行了种的鉴别测定,试验结果,五株绵羊致病株(野毒株),在生化反应,培养特性,溶血性,致病性等方面表现高度的一致性,属于同一种 LM。     

东北地区猪群链球菌分离鉴定及流行病学调查分析

为了解猪链球菌在东北地区正常猪群中的流行情况,对黑龙江、吉林、辽宁省等地无菌采集的2 204份鼻拭子接入含有1‰抗生素的链球菌液体选择培养基中,37℃静止培养24 h,挑取细菌培养物涂片,革兰氏染色后镜检,将镜检为革兰氏阳性的链球菌利用PCR方法进行猪链球菌种的鉴定,在此基础上再利用PCR方法进行猪链球菌1、2、7、9血清型的分型鉴定.结果显示,黑龙江、吉林、辽宁3省猪群链球菌的携带率分别为29%、27%、34%,东北地区分离得到猪链球菌共155株,其中1型猪链球菌7株,2型猪链球菌39株,7型猪链球菌4株,9型猪链球菌11株,其他型猪链球菌94株.     

鸡大肠杆菌的分离鉴定及耐药性研究

2008～2010年在辽宁地区共采集990份鸡泄殖腔拭子样品,分离鉴定出380株大肠杆菌,用10种抗菌药物进行药敏试验。结果表明,2008年分离的大肠杆菌耐药性较轻,对氨苄西林和恩诺沙星的耐药率为74.60%和57.14%;2009年和2010年分离的大肠杆菌耐药性非常严重,对氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸、四环素、磺胺异噁唑、复方新诺明和恩诺沙星的耐药率均大于80%,多重耐药性严重。     

甲型H1N1流感病毒株的分离鉴定以及PR8株的相关基因对重组病毒增殖能力的影响

为分离流感病毒,本研究将疑似甲型流感患者的咽喉拭子接种SPF鸡胚尿囊腔,经检测收获的鸡胚尿囊液具有血凝活性.采用流感病毒通用引物进行PCR扩增出8个基因节段,经测序与GenBank中登录的序列比对后确定该病毒株为2009年爆发的甲型H1N1流感病毒,并命名为A/Harbin/LM/2009 (H1N1),简称LM株.由于LM分离株在鸡胚中增殖能力比较弱,为提高其在鸡胚中的增殖能力,我们利用反向遗传技术将LM株的HA和NA基因与高增殖特性的人流感病毒细胞高产株PR8的另外6个节段进行“6+2”重配,获得拯救病毒,但该重配病毒血凝价并未显著提高.为进一步鉴定影响病毒增殖能力的基因,本研究将LM株所有节段以“7+1”的方式逐一与PR8的7个片段搭配构成完整的流感病毒基因组,分别得到8个重配病毒.结果显示分离株的PB1、PA、HA基因显著降低了重配病毒在鸡胚细胞中的增殖能力.     

Molecular characterization of Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC) isolated from cattle in northeast and northwest China

We studied throat swabs and corresponding serum samples collected from 1067 protein purified derivative (PPD)-tuberculin skin test (TST) positive cattle from different regions of China. The 1067 throat swabs were inoculated onto modified Löwenstein–Jensen medium for the isolation and culture of Mycobacteria. Acid-fast bacilli were identified using traditional biochemical methods, polymerase chain reaction (PCR) amplification and multiplex PCR. They were distinguished as Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC) and non-tuberculous mycobacteria (NTM) strains. An indirect Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) was applied to detect specific antibodies against bovine TB (bTB). Correlations among the ELISA, bacteriology and TST were analyzed and compared. Spoligotyping and variable number tandem repeats–mycobacterial interspersed repetitive unit (VNTR–MIRU) analysis were used to genotype the MTBC. In total, 111 strains of Mycobacteria were cultured from the 1067 throat swab samples, including 43 stains of MTBC (14 strains of Mycobacterium bovis and 29 of Mycobacterium tuberculosis) and 68 strains of NTM. Thirty-eight MTBC strains and four NTM strains were isolated from 72 throat swab samples that the ELISA determined were antibody positive; five MTBC strains and 64 NTM strains were isolated from 995 throat swab samples that were antibody negative on the ELISA. The positive isolation rates of MTBC and NTM were 38.7% (43/111) and 61.3% (68/111), respectively. The concordance rate of cultured MTBC with a positive result on the indirect ELISA for antibody was 52.8% (38/72), which was much higher than the positive rate for TST (4.0%; 43/1067). Genotyping of the 43 strains of MTBC isolated, using spoligotyping and VNTR–MIRU, showed that the 43 isolates had 26 genotypes; 16 strains had a unique genotype. Two groups of six strains and two strains, respectively, showed the same spoligotyping pattern, and belonged to the Beijing family and Beijing-like family, respectively. Combined application of spoligotyping and VNTR–MIRU typing would improve the molecular epidemiological investigation and monitoring of the etiology of bTB in China.     

猪源支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

本试验从河南省多个养猪场采集有明显呼吸道症状的猪肺脏和鼻拭子,进行支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)的分离鉴定,通过病原的分离、培养对分离菌株进行形态观察、培养特性和生化试验鉴定,以及用支气管败血波氏杆菌flaB基因的特异性引物进行PCR鉴定,结果表明,有8株分离菌株扩增出了237 bp的特异性目的条带,结合形态观察及生化试验鉴定,确认成功分离到了8株猪源性支气管败血波氏杆菌;药敏试验结果显示,分离菌株对强力霉素、氯霉素、氟苯哒唑、氧氟沙星、四环素、卡那霉素、庆大霉素、奈丁酸和阿米卡星高度敏感。     

豫西地区市售鸭翅中单增李斯特菌毒力基因的检测

为分析来自豫西地区市售鸭翅中单增李斯特菌毒力基因的分布变化,本研究以分离自豫西地区市售鸭翅的11株单增李斯特菌分离株为研究对象,利用PCR方法进行8种毒力基因的检测(inlA、inlB、virR、mprF、dltA、dltB、dltC、dltD基因)。结果显示有3株出现了基因缺失,dltA基因检出率为90.9%(10/11),dltC、mprF基因检出率均为81.8%(9/11),其他基因全部呈阳性。这些毒力基因在单增李斯特菌分离株中分布广泛,对豫西地区市售鸭翅具有潜在的威胁,应引起食品监管部门的高度关注。