主动免疫抑制素提高奶牛超数排卵胚胎产量的研究

 【目的】研究免疫抑制素提高奶牛超数排卵的效率以提高胚胎产量。【方法】免疫组首次免疫抑制素α亚基融合蛋白（1 mg?头-1）与白油佐剂混合乳液,首免后第28、56 d分别进行2次加强免疫,剂量为0.5 mg?头-1。对照组同时注射生理盐水与白油佐剂的混合乳液。在第二次加强免疫后10 d,采用FSH四日递减法进行超排处理,并根据母牛发情表现进行人工授精,试验一使用常规冷冻精液输精,试验二使用分离的雌性精子输精,输精后第7天进行冲胚。【结果】主动免疫抑制素能够有效提高血液抗抑制素抗体效价。试验一,免疫抑制素组头均获胚/卵总数为（15.8±2.8）枚,显著高于对照组（8.3±1.5）枚（P＜0.05）;头均可移植胚胎数为（9.6±3.1）枚,稍高于对照组的（5.8±1.6）枚（P＞0.05）。试验二,免疫抑制素组发情时间早于对照组(P＜0.05);输精后第7天血液孕酮浓度显著高于对照组（P＜0.05）;头均获胚胎总数和头均可移植胚胎数分别为（15.4±1.9）枚和（5.7±0.7）枚,显著高于对照组的（9.1±1.2）枚和（3.1±0.5）枚(P＜0.05);免疫组获得的一级胚胎为（3.8±1.0）枚,占总可移植胚数的58%,显著高于对照组的（0.6±0.2）枚或19.8%(P＜0.05)。【结论】主动免疫抑制素能够促进牛卵泡发育、提高超排效率和胚胎产量,在使用性控精液输精时不仅大幅提高雌性胚胎数量,同时大幅提高胚胎质量。     

不同光色对马岗鹅生长发育的影响

为研究不同波长的光处理对肉鹅生长性能及相关激素的影响,以０日龄马岗鹅为研究对象,分别采用白色（对照）、４８０ｎｍ蓝色和６６０ｎｍ红色ＬＥＤ灯照明,在第７、３５和６３天记录鹅的体质量和体尺,并翅下采血检测血清中的相关激素水平．结果发现,在第６３天,蓝光处理鹅体质量显著低于红光组（Ｐ＜０.０５）;处理间体尺指标在整个试验期只有胸深差异极显著（Ｐ＜０.０１）,试验第７天的体斜长、第３５天的背宽和第６３天的胫围差异极显著（Ｐ＜０.０１）．红光组肾上腺素（Ａｄｒｅｎａｌｉｎｅ,ＡＤＲ）水平显著性低于其他两组,血清生长激素（Ｇｒｏｗｔｈ ｈｏｒｍｏｎｅ,ＧＨ）、胰岛素样生长因子１（Ｉｎｓｕｌｉｎ ｌｉｋｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ １,ＩＧＦ-１）和三碘甲状腺原氨酸（Ｔｒｉｉｏｄｏｔｈｙｒｏｎｉｎｅ,Ｔ３）各处理间差异不显著性（Ｐ＞０.０５）．研究结果表明,鹅在不同时期对蓝光和红光的敏感性不同,与白光对比,在试验后期蓝光抑制鹅生长,红光促进鹅生长．     

日粮中代谢能和粗蛋白水平对马冈鹅繁殖性能的影响

[目的]探讨不同代谢能水平和粗蛋白水平对马冈鹅产蛋性能以及种蛋孵化率的影响。[方法]选择健康2年龄马冈母鹅随机分为试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组和对照组,分别饲喂含有不同代谢能和粗蛋白水平的日粮,收集鹅蛋并进行孵化。试验期间,观察鹅群的健康状况,记录蛋重、产蛋数以及种蛋孵化率。[结果]试验Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组的马冈鹅平均产蛋率以及平均蛋重均显著高于对照组;种蛋合格率以及种蛋受精率也明显提高,试验Ⅲ组均显著高于其他各组（P〈0.05）;3个试验组的饲料成本均低于对照组,其中试验Ⅲ组的饲料成本高于试验Ⅰ和Ⅱ组。[结论]日粮中代谢能和粗蛋白水平对马冈鹅的产蛋性能以及种蛋孵化率均有显著影响。     

Endocrine and ovarian responses in water buffalo cows immunized against inhibin and subjected to the Ovsynch protocol

The aim of this study was to investigate the feasibility of stimulating ovarian follicle development in order to improve fertility in water buffalo cows by immunization against inhibin. The experiment was carried out in early summer(May) and included 24 multi-parity crossbred Murrah-Swamp buffaloes that were divided into immunized(n=11) and control(n=13) groups. Each immunized cow was administered with a 2-m L immunogen of mineral oil adjuvant containing 2 mg of recombinant inhibin α-subunit fusion protein. The controls were treated with the adjuvant only. All animals received Ovsynch protocol treatment, starting on the day of the antigen administration, and they were artificially inseminated upon behavioral estrus. As a result, all of the immunized buffaloes generated antibodies against inhibin during the experimental period and had higher plasma concentrations of follicle-stimulating hormone(FSH), activin, and estradiol(E2) related to estrous expression. A higher proportion of immunized animals expressed estrus behavior than did the controls(72% vs. 30%, P0.05). On average, inhibin-immunized buffaloes had significantly more large follicles(≥9 mm in diameter) than the controls(mean±SEM; 1.2±0.1 vs. 0.84±0.1, respectively; P0.05) and a slightly higher mean total number of follicles(≥2 mm; 11.4±0.7 vs. 9.0±1.1, respectively; P=0.09) and small(2–4 mm) follicles(8.81±0.6 vs. 6.84±1.0, respectively; P=0.12). A higher percentage of cows ovulated in the immunized group than in the control group(91%(10/11) vs. 54%(7/13), respectively; P0.05). Moreover, inhibin-immunized cows had slightly larger corpus luteum(CL) than the controls 9 days after ovulation and significantly higher(P0.01) post-ovulation peak plasma progesterone(P4) concentrations. Immunization against inhibin also marginally increased the conception rate 42 days after insemination(45.8% vs. 15.4%; P0.05). These results demonstrate that immunization against inhibin, coupled with the treatment with the Ovsynch protocol, can constitute a new technique to increase fertility in water buffalo cows.     

杂种鹅肥肝生产性能研究

选用同批自行孵化、育雏、肥育的１１０日龄朗德鹅、莱茵鹅、丰城灰鹅及朗莱、朗丰、莱朗、菜丰杂交一代肉用仔鹅，在５月阴雨季节，经２５天强制填肥，平均肥肝重分别为５１８．３３、２８８．３３、２９５．００、３９２．５０、３６２．５０、４７３．３３、２８７．５０ｇ，料肝比相应为２７．５９：１、４８．２３：１、４５．７８：１，３６．７５：１、３９．２７：１、２９．２９：１和４９．６１：１。结果表明，朗德鹅、莱朗杂交一代肉鹅是肥肝生产的理想品种（组合）。朗莱、朗丰杂交一代肉鹅均可作为大规模肥肝生产品种（组合）。     

柔嫩艾美球虫SO7重组蛋白对巨型艾美球虫的免疫保护作用

将大肠杆菌中融合表达的柔嫩艾美球虫(Eimeria tenella)SO7重组蛋白,单独或以鸡重组γ-干扰素为佐剂,于5、12、19日龄对雏鸡进行3次免疫,同时设立E.tenella、巨型艾美球虫(E.maxima)口服卵囊免疫组、未免疫、未攻毒组和未免疫攻毒组作对照,于26日龄用E maxima进行攻毒,9 d后统计各组的相对增重率和卵囊减少率,探讨其对E.maxima的交叉保护作用.结果表明:重组蛋白免疫对增重的改善效果与E.maxima口服卵囊免疫组相差不大,γ-干扰素佐剂效应不明显.从卵囊减少率指标角度判断,口服卵囊免疫组效果最佳,为96.35%,重组蛋白免疫组为12.51%,γ-干扰素佐剂组为35.75%.重组SO7蛋白对E.maxima具有一定的交义免疫保护作用,γ-干扰素对SO7抗原的免疫保护效果具有一定的增强作用.     

抑制素基因免疫京白鸡后在卵巢组织中的表达

为了了解用融合表达质粒DNA免疫后,外源DNA在卵巢组织中的表达情况,探讨基因免疫的安全性,在pC IS免疫京白鸡后,取卵巢组织,用免疫组织化学的方法检测切片中是否有抑制素基因表达（即是否有阳性点的存在）。结果发现,在卵巢组织切片中,实验组和对照组均无阳性点。抑制素基因免疫后,经过长时间的代谢,京白鸡的卵巢组织中无外源抑制素表达。     

朗德鹅与皖西白鹅肌肉品质比较研究

对70日龄朗德鹅和皖西白鹅的肌肉品质进行研究。分别对朗德鹅和皖西白鹅的屠宰性能、肉常规品质和胸、腿肌纤维密度与肌纤维直径进行了测定。结果表明:10周龄朗德鹅肌肉的失水率、系水力和pH值差异不显著,各组朗德鹅胸肌与腿肌的肌直径大于各组皖西白鹅,且差异显著(P<0.05),而各组朗德鹅胸肌与腿肌的肌纤维密度低于各组皖西白鹅值,且差异显著(P<0.05)。结论:朗德鹅的肌肉品质明显优于皖西白鹅。     

Hepatic Lipogenesis Associated with Biochemical Changes in Overfed Landaise Geese and China Xupu Geese

This experiment studied hepatic lipogenesis associated with biochemical changes in overfed Landaise Geese and China Xupu geese. Twenty healthy male Landaise geese and 20 healthy male Xupu geese, hatched on the same day under the same feeding conditions, were selected as experimental animals. The animals were divided into two groups and each breed served as an experimental group. Per goose of per experimental group served for a repeat. Brown rice was selected as test diet. After overfeeding for 21 d and then slaughtering, the biochemical changes of hepatic lipogenesis in the genetic susceptibility to fatty liver were evaluated. These results showed that （1） the weight of fatty liver of the two breeds of geese were 801 and 375 g （P〈0.05）, respectively. There were no differences on the abdominal fat pat, filet total and filet pectoralis major in the two breeds experimental of the geese group （P〈0.05） and no difference on body and filet skin plus subcutaneous adipose tissue （P〉0.05） was found; （2） in these two breeds of geese, there were no differences on very-lowdensity lipoprotein （VLDL）, cholesteryl esters （CE） （P〈0.05）, free cholesterol （FC）, triglycerides （TG）, phospholipids （PL） and protein （P 〈 0.05）; （3） there were no differences on activities of malic enzyme （ME）, glucose-6-phosphatedehydrogenase （G6PDH）, acetyl-CoA-carboxylas （ACX）, fatty acid synthase （FAS）, and mRNA level of ME in the two experimental breeds of geese groups （P 〈0.05）; （4） test in Landaise geese group showed that there was no significant correlation with the specific enzymatic activities, while in Xupu geese group, the liver weight was negatively correlated to the specific activity of ACX and positively to that of ME; （5） in these overfed geese, ME activity appeared to be a major factor involved in the genetic susceptibility to hepatic steatosis and it determined the hepatic lipogenesis capacity.     

非抗性筛选抑制素基因疫苗免疫对奶牛产后子宫复旧的影响

将24头产后7 d的荷斯坦奶牛随机分为4组,高、中、低剂量免疫组(记为T1、T2、T3)分别注射1010、109、108 CFU/mL无抗性基因的抑制素真核表达质粒基因疫苗(重组菌C500(pXAIS))各3 mL,对照组(CK)注射10%生理盐水3 mL。初次免疫28 d后进行加强免疫。用B超诊断仪检测产后奶牛子宫恢复情况。结果表明:加强免疫能提高抗抑制素抗体P/N值,各免疫组P/N值均高于对照组,其中T1和T2组均与对照组差异显著(P0.05),加强免疫7 d,后T1组抗体阳性率最高,达83.33%;抑制素基因疫苗免疫30 d内,前21 d子宫颈和子宫孕角恢复较快,后7 d恢复较慢,各免疫组奶牛产后子宫颈恢复时间短于对照组,但差异不显著(P0.05);各免疫组产后子宫孕角恢复时间比对照组短,且T1组的恢复时间(28.75±1.92)d)与对照组((33.75±1.09)d)差异显著(P0.05)。以上结果表明,在本试验条件下,非抗性筛选的抑制素真核表达质粒基因疫苗免疫产后奶牛,加强免疫后能引起较好的免疫应答,且能促进奶牛产后子宫复旧。     

Effect of Inhibin α(1-32)Gene Immunization on the Follicular Development and Reproductive Hormones in Rats

A total of 40 rats, aged in 30 days, were divided into 4 groups and immunized (intramuscularlyinjection) with 0 μg(control), 15 μg (group 1), 25 μg (group 2) or 40 μg(group 3) of inhibin α(1-32) re-combinant expression plasmid pcINH in combination with liposome. Booster was given without liposome onday 20 after primary immunization. The results showed that 50%(13/26) rats were detected in positive anti-body against inhibin. However, the increase of immunization dosage and booster did not promote the ratio ofantibody positive rats. The number of matured follicles above 0.8 mm in diameter in the antibody positive ratswas 2.3 more than that in the negative rats (P＞0.05). The concentration of blood plasma FSH increased dis-tinctively on day 10 after primary immunization (P＜0.05), but no increase was observed after booster immu-nization. The 17-β-estradiol levels in blood plasma of rats between the positive and the negative groups had noremarkable differences (P＞0.05). These results suggested that recombinant inhibin expression plasmid couldstimulate animal body to produce antibody against inhibin.     

免疫方式对Iss抗体产生的影响

为获得抗大肠杆菌Iss蛋白的抗体,将纯化的GST-Iss蛋白分别免疫雏鸡及小鼠。结果显示,无免疫佐剂、弗氏佐剂免疫雏鸡所产生的Iss抗血清效价仅为1∶100,氢氧化铝佐剂免疫小鼠所产生的Iss抗血清效价为1∶60 000。Iss融合蛋白采用氢氧化铝佐剂免疫小鼠,可获得更强的体液免疫应答,抗体效价更高。     

兴国灰鹅季节性繁殖控制技术研究初报

针对兴国灰鹅存在明显的季节性繁殖特性,采用短光照控制技术,解决了其在自然条件下5～8月份不产蛋的问题,兴国灰鹅的产蛋数显著提高。     

抑制素基因免疫诱导单胎绵羊孪生的研究

应用抑制素基因免疫重组质粒 (PCIS)免疫绵羊 ,首次免疫后 ,绵羊能够产生抗抑制素抗体 ,加强免疫后抗体增加显著 (P <0 0 5 ) ,免疫羊的抗体阳性率可达 4 6 7%。免疫组与对照组促卵泡素 (folliclestimutatinghormone ,FSH)的含量在加强免疫第 4 5天时差异显著 (P <0 0 5 )。在首次免疫第 2 0天与加强免疫第 4 5天 ,抗体阳性羊的促卵泡素含量显著高于抗体阴性羊 (P <0 0 5 )。免疫羊的双羔率达 39 2 % ,显著高于对照组 (P <0 0 5 ) ,比对照组提高 2 9 2 %。     

光周期对马岗鹅产蛋、PRL和LH分泌季节性变化的影响

通过人工控制光照研究了光周期对马岗鹅产蛋、PRL和LH分泌季节性变化的影响.整个试验期间对照组接受自然光照,处理组先后接受2次人工控制长短光照处理.研究结果表明,在非繁殖季节(4-7月),对照组的血浆PRL质量浓度升高(20～30 ng/mL),LH质量浓度下降(《1 ng/mL),鹅完成换羽;在繁殖季节(8-翌年3月),血浆PRL质量浓度处在低水平(10 ng/mL),LH质量浓度则上升(1～2 ng/mL);在处理组,2次的延长光照均使PRL质量浓度上升(20～30 ng/mL),LH下降(《1 ng/mL),母鹅进入休产期并完成换羽;缩短光照则降低PRL质量浓度(10 ng/mL),促使LH分泌(2～3 ng/mL),使母鹅进入产蛋期.试验结果证明,光周期主要是通过影响PRL和LH的分泌来调控马岗鹅季节性繁殖活动.     

五星黄鸡BMP15基因多态性分析

[目的]分析五星黄鸡的BMPl5基因多态性。[方法]以217只五星黄鸡L系母鸡为材料,采用全测序方法检测BMPl5基因的多态性及其与300日龄产蛋数的相关性。[结果]在BMPl5基因2个外显子中共检测到13个SNPs,在外显子1中检测到4个。其中C34T突变使亮氨酸变为苯丙氨酸;在外显子2中检测到9个,其中G540A突变使甘氨酸变为丝氨酸,其他位点为无义突变。G540A位点AA基因型比GA基因型产蛋数平均多16．7枚,差异显著（P〈O．05）;其余位点不同基因型产蛋数差异不显著。[结论]该研究为五星黄鸡高产蛋数的分子标记辅助选择提供了参考。     

洗浴池水体污染对马岗鹅雏鹅胫骨发育的影响

洗浴池水体是水禽饲养环境中重要的组成部分.目前关于洗浴池水体污染对于水禽生长发育的具体影响仍知之甚少. 由于骨骼发育是影响鹅生长性能的重要指标，本试验以20日龄马岗鹅为试验对象，以不同的洗浴池换水频率构建不同的洗浴池污染程度，来检测洗浴池水体污染对雏鹅胫骨生长发育的影响. 结果发现不同的换水频率显著影响了水体总菌落数.通过胫骨测量、HE染色等方法发现，洗浴池水体污染在雏鹅27日龄时显著降低了胫骨直径和髓质厚度，而在34日龄时则显著降低了胫骨的骨质厚度.本研究为今后通过改善鹅养殖环境，提高鹅生长效率提供了有益借鉴.     

豆状带绦虫TPO18基因的原核表达及保护性分析

【目的】明确重组蛋白 pGEX-TPO18 的免疫保护效果。【方法】提取豆状带绦虫六钩蚴 RNA,根据带科其他种属绦虫 18 kD 基因的保守区设计引物,5′端分别引入EcoR I、Xho I限制性酶切位点,RT-PCR 扩增,产物克隆于 pMD18-T中进行序列测定,并对序列进行生物信息学分析。将纯化后的 PCR 产物和质粒 pGEX-4T-1 分别用 EcoRⅠ＋XhoⅠ双酶切,回收目的片段,连接后转化至 E.coli BL21感受态细胞,挑斑摇菌,通过 PCR 方法和重组质粒测序技术进行鉴定,将鉴定正确的重组表达质粒命名为 pGEX-TPO18。用 IPTG 诱导表达重组质粒,收集菌体进行 SDS-PAGE 分析,用 GST 琼脂糖树脂纯化 TPO18 蛋白,进行 Western blottting 检测。将纯化后的重组蛋白分别乳化弗氏佐剂、206 佐剂、氢氧化铝佐剂后免疫家兔,每次 50 μg/只,共免疫 3 次,末次免疫后 34 d 每只家兔感染 1 500 个虫卵,感染 58 d 后扑杀并计算各免疫组减囊率。免疫前后每隔 7 d 采血分离血清,ELISA 法检测血清抗体水平,以 40 µg•mL-1重组蛋白包被酶标板,血清 1﹕200 稀释,检测血清样品的 OD492nm 值。【结果】TPO18 基因的 RT-PCR 扩增产物为 339 bp, 与预期大小相符;测序结果表明无碱基突变,重组质粒pGEX-TPO18构建成功。pGEX-TPO18 在大肠杆菌中获得高效表达,表达产物为 38.6 kD 的可溶性蛋白,Western blotting分析结果显示兔抗豆状囊尾蚴阳性血清与重组蛋白在38.6 kD处有一条明显的反应条带,表明该重组蛋白具有反应原性。经ELISA检测,免疫后7 d 免疫组家兔抗体水平开始升高,第43 天达到峰值。经口感染虫卵后,免疫组抗体水平开始降低,但仍保持一定水平。家兔免疫保护试验表明弗氏佐剂、206 佐剂和氢氧化铝佐剂免疫组减囊率分别为 79.13%、65.66% 和 50.43%。【结论】研究表明弗氏佐剂免疫效果较好,有望研制出抗豆状囊尾蚴病的高效疫苗。     

流水型水沟配种设施对马岗鹅繁殖性能的影响

[目的]提高种鹅繁殖性能和降低养殖成本。[方法]利用人工开挖的流水型水沟对马岗鹅进行配种,研究流水型水沟配种设施对马岗鹅繁殖性能的影响。[结果]与对照组比,试验组种鹅年产蛋量提高5.71%,受精率、孵化率和健雏率分别降低0.43%、0.64%和1.13%。[结论]利用流水型水沟配种能大幅度减少养鹅场用地面积,降低养殖成本,提高经济效益。     

O型口蹄疫病毒VP1 T细胞、B细胞表位双拷贝基因与大肠杆菌LTB基因融合表达产物的免疫应答

[目的]为预防口蹄疫与幼畜腹泻、生产安全高效的基因工程联合疫苗提供试验依据。[方法]通过基因工程技术,把O型口蹄疫病毒VP1双拷贝21-40(20aa)与141-160(20aa)表位肽基因——2020VP1与产肠毒素大肠杆菌LTB连接到表达载体上,在大肠杆菌中表达出具有抗O型口蹄疫病毒与产肠毒素大肠杆菌双重作用的融合蛋白。[结果]运用基因工程技术构建了融合表达载体r2020-B-2020。转化宿主菌BL21(DE3)RIL后的表达产物经SDS-PAGE分析,结果显示,重组融合蛋白的分子量约为41 kD,表达量较高。动物实验表明,融合蛋白能够诱发兔体产生较强的抗FMDV中和抗体,免疫豚鼠在低浓度FMDV刺激下产生特异性T淋巴细胞增殖反应,说明融合蛋白可以诱导机体产生有效的抗FMDV细胞及体液免疫反应。融合蛋白能够与霍乱毒素CTB抗体特异结合,免疫雌鼠能够抵抗一定强度的大肠杆菌毒株攻击。[结论]融合蛋白可以同时诱导机体产生较好的抗FMDV及ETEC免疫应答反应,具有开发成为FMDV与ETEC基因工程疫苗的应用价值。