静置培养BHK-21细胞生长及代谢动力学研究

为研究BHK-21细胞的生长及代谢动力学特征,试验采用低密度静置培养方法,每天测定细胞生长密度和活力,并利用多参数生化分析仪测定培养液中Gluc、Lac、Gln和NH4+的含量,计算细胞指数生长期的比代谢速率。结果表明:BHK-21细胞生长曲线呈S型,最大增殖密度为50.3×104 upf·mL-1,倍增时间为21.1h;对数生长期Gluc和Gln的比消耗速率为-3.79mg·(106 cells)-1·d-1和-9.95μmol·(106 cells)-1·d-1,Lac和NH4+的比生成速率为2.81mg·(106 cells)-1·d-1和6.30μmol·(106 cells)-1·d-1。     

分域模型在细胞代谢动力学中的研究应用

本文综述了分域模型的基本特征及其数学表达。重点阐述了如何用动力学分域成份推测生理学分域结构的方法思路。     

MDCK细胞库的建立及其生物学特性研究

分别从美国典型培养物保藏中心(ATCC)、中国典型培养物保藏中心(CCTCC)、北京协和细胞资源中心及某企业引进4株MDCK细胞系,扩大培养后液氮冻存,分别建立种子细胞库和工作细胞库。细胞复苏后分别对每株细胞进行了活力、形态、生长曲线、微生物污染、核型及荧光蛋白质粒转染表达等特性研究。结果表明,4个来源的MDCK细胞均呈上皮型,生长状态良好;生长曲线呈S型;细菌、真菌、支原体检测都为阴性;染色体2n=78;外源质粒在该细胞中能进行复制和表达。建立的细胞库为开展MDCK细胞及流感细胞基质疫苗的研究提供了基础理论依据和细胞资源。     

MDCK单克隆细胞的制备方法研究

为优化有限稀释法制备MDCK单克隆细胞的参数条件,从而提高有限稀释法制备MDCK单克隆细胞株的效率。使用有限稀释法制备MDCK单克隆细胞,通过比较不同类型血清、血清浓度和单孔接种密度对制备MDCK单克隆细胞数的影响,确定有限稀释法制备MDCK单克隆细胞的最佳实验条件。结果显示,添加15%胎牛血清、最佳单孔接种密度为1个·孔^-1是制备MDCK单克隆细胞的最佳条件。     

微生物生长代谢热动力学研究概况

阐述了微生物生长动力学模型、热动力学模型在细菌生长中的应用及微生物热动力学研究现状,并展望了生物热动力学研究的发展趋势.     

微生物生长代谢热动力学研究概况

概述了橡胶籽粕中氰苷的结构与性质,介绍了其测定方法（包括定性检测与定量检测）以及微生物脱氰苷的方法（如坑埋法、瘤胃液微生物发酵法、微生物固体发酵法）。     

犬肾细胞MDCK研究进展

综述了MDCK细胞的来源、生物学特性及培养方式,旨在为今后MDCK细胞的培养及流感病毒细胞介质疫苗的大规模生产提供理论基础与依据。     

悬浮MDCK细胞的驯化与H5亚型禽流感病毒的培养

【目的】为评估细胞源重组禽流感病毒H5亚型灭活疫苗的有效性提供数据支持。【方法】选取一株来源清楚的贴壁MDCK细胞,通过逐步降低培养基中血清含量及不断调整无血清培养基配方,将其驯化为悬浮MDCK细胞,并以此为基质增殖重组禽流感病毒H5N1 Re-6株、H5N1 Re-7株和H5N1 Re-8株;比较不同毒株在贴壁和悬浮MDCK细胞中增殖的差异。分别将经悬浮MDCK细胞增殖的病毒与经SPF鸡胚增殖的病毒制备成重组禽流感病毒(H5亚型)三价灭活疫苗,免疫商品蛋鸡和商品鸭,通过血清学方法比较细胞源与鸡胚源禽流感灭活疫苗的免疫效果。海兰褐商品蛋鸡:6 050只,分为3组,2组为免疫组,每组3 000只,28日龄免疫0.5 mL/只,80日龄免疫0.5 mL/只;不免疫对照组1组,50只,同等条件下隔离饲养。分别于蛋鸡日龄49、110、210 d(即首免后21 d、82 d、6个月)时采血分离血清,测定禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株的HI抗体效价,监测抗体消长。长白飞鸭:220只,分为3组,2组为免疫组,每组100只,10日龄免疫0.5 mL/只,24日龄免疫1.0 mL/只,不免疫对照组20只,同等条件下隔离饲养。分别于鸭日龄24、38、52 d(即首免后14、28、42 d)时采血分离血清,测定禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株的HI抗体效价,监测抗体消长。【结果】获得一株可在无血清培养基中悬浮生长的MDCK细胞,摇瓶、5L生物反应器中的培养数据及细胞状态显示,该细胞株适合放大生产。此悬浮MDCK细胞培养48 h细胞密度可由1.5×10~6 cells/mL左右增殖到1.0×10~7 cells/mL左右,状态良好、活率高、单个悬浮于培养基中。以此悬浮MDCK细胞为基质增殖重组禽流感病毒,H5N1 Re-6株的HA效价达1﹕512,TCID_(50) 10~(7.67)/mL,EID_(50) 10~(7.83)/0.1 mL;H5N1 Re-7株的HA效价达1﹕256,TCID_(50)达10~(7.33)/mL,EID_(50)10~(7.17)/0.1 mL;H5N1 Re-8株的HA效价达1﹕1024,TCID_(50) 10~(8.5)/mL,EID_(50) 10~(8.38)/0.1 mL,与经贴壁MDCK细胞增殖的病毒毒价相当。细胞源三价灭活疫苗免疫海兰褐商品蛋鸡,首免后21 d时,禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕446、1﹕111、1﹕416,二免后30 d时三者HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕588、1﹕362、1﹕776,6个月时分别为1﹕239、1﹕128、1﹕223,维持了较高的抗体水平;免疫长白飞鸭,首免后14 d时,禽流感H5亚型Re-6株、Re-7株、Re-8株HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕30、1﹕17、1﹕64,28 d时三者HI抗体效价几何平均值(GMT)分别为1﹕194、1﹕91、1﹕137,42 d时分别为1﹕416、1﹕128、1﹕239;以上两组的试验结果与鸡胚源重组禽流感灭活疫苗免疫后诱导产生的HI抗体效价相当。【结论】经驯化获得的可在无血清培养基中悬浮生长的MDCK细胞株,其增殖重组禽流感病毒H5N1 Re-6株、H5N1 Re-7株、H5N1 Re-8株能力强,且病毒被制备成灭活疫苗免疫海兰褐商品蛋鸡和长白飞鸭可产生较高水平的抗体。为大规模工业化生产禽流感疫苗提供技术支持。     

稀土元素对银杏悬浮培养细胞生长和次级代谢产物积累的影响

稀土元素对银杏悬浮培养细胞生长和次级代谢产物积累的影响试验结果表明，低浓度的硝酸铈铵对银杏细胞的生长影响不大，高浓度则抑制细胞生长，10.0mg/L的硝酸镧对促进细胞生长的效果最好；硝酸铈铵和硝酸镧对银杏黄酮积累的促进作用不明显，但能促进银杏萜内酯的积累，硝酸铈铵的添加浓度以1.0mg/L为好，硝酸镧的适宜添加浓度则培养当天为10.0mg/L、培养第10天为1.0mg/L。     

葡萄糖对JAL1*杂交瘤细胞生长代谢的影响

研究了不同浓度的葡萄糖对JAL1杂交瘤细胞生长、乳酸及氨的生成等代谢过程的影响。在细胞培养箱中，批培养杂交瘤细胞，培养条件为pH7.0-7.5，温度37℃，5%CO2。结果表明，适宜于该株杂交瘤细胞生长的葡萄糖浓度为加入2－8g/L，所获得的单抗OD405值均在0．6以上，葡萄糖浓度对乳酸、氨积累的影响不大。     

不同培养基对H9亚型禽流感病毒在MDCK细胞上的增殖效果研究

[目的]比较3种培养基对H9亚型禽流感病毒在MDCK细胞上的增殖效果。[方法]采用DMEM+10%血清、低血清培养基(MEM-MD-611)、无血清培养基(SFE4Mega)3种培养基制备MDCK细胞单层,分别接种不同稀释度的H9亚型禽流感病毒。然后,分别加入含10μg/ml胰蛋白酶的3种培养基作为维持液,培养病毒,每隔24 h观察其细胞病变,并测定上清HA滴度。[结果]在培养72～96 h时,无血清培养基病毒液的HA滴度高于低血清培养基,而低血清培养基则高于含血清培养基。[结论]3种培养基均可用于制备禽流感病毒抗原,其中无血清培养基、低血清培养基更适用于流感病毒抗原的制备。     

牛泰勒焦虫血源细胞的生长与代谢

探讨了含致弱的牛环形泰勒焦虫裂殖体的血源白细胞 (简称牛泰勒焦虫血源细胞 )在方瓶中的生长与代谢特性。结果表明 ,牛环形泰勒焦虫血源细胞在小方瓶中接种 7.5× 10 4cells/ml,经 84h达最高值 11.6× 10 4cells/ml,接种后在 4 8h内 ,细胞基本处于生长的适应期 ;4 8～ 84h ,细胞快速增殖 ,处于对数生长期 ;在 84～ 12 0h ,细胞基本处于稳定期状态 ;当细胞培养到 12 0h以后 ,活性开始急速下降 ,细胞进入衰亡期 ,到 14 4h ,活细胞只有8.5 6 %。在细胞培养 10 8h以内 ,葡萄糖基本处于缓慢的直线消耗状态 ,由起始浓度 2 .2 91g/l降至 0 .0 3g/l。葡萄糖耗竭 12h后 ,细胞开始快速死亡     

钙调素拮抗剂三氟拉嗪对犬肾上皮细胞增殖的影响

为探讨钙调素拮抗剂三氟拉嗪(TFP)对犬肾上皮细胞(MDCK)增殖的抑制作用及对细胞各周期时相的影响,采用细胞计数法、流式细胞术、[γ-32P]ATP掺入外源性底物的液体闪烁法和免疫组化技术,分别测定5、10和15μmol/L浓度的TFP对MDCK细胞增殖的抑制作用、细胞各周期时相的百分率、胸苷激酶(TK)的活性以及增殖细胞核抗原(PCNA)表达的阳性率。结果表明:给药3 d后,各浓度TFP对MDCK细胞生长均具有明显抑制作用;G0/G1期的细胞比率均显著增加(P<0.05),而S期、G2/M期细胞的比率则有所下降,其中高浓度TFP组显著下降(P<0.05);细胞内TK的活性和PCNA的表达显著降低,呈明显的时间剂量效应关系。说明TFP可通过阻断钙调素信号通路,影响DNA合成和细胞周期而抑制MDCK细胞的增殖。     

应用套式PCR在MDCK细胞系中发现犬细小病毒

本研究自１９９７年至１９９９年从国内部分大学实验室、卫生防疫站和动检局陆续收集１１个犬肾（ＭＤＣＫ）细胞系样品,选取犬细小病毒基因组的ＶＰ２基因上４段核苷酸序列作引物,对样品ＤＮＡ进行套式ＰＣＲ（Ｎｅｓｔｅｄ ＰＣＲ）检测;ＰＣＲ扩增产物经０．０１ｇ／ｍＬ琼脂糖凝胶电泳和克隆到ｐＧＥＭ＾－Ｔ载体并进行核苷酸序列测序鉴定后,发现我国ＭＤＣＫ细胞系中存在犬细小病毒的传代病毒株。该病毒基因组部分序列测定结果显示与犬细小病毒ＣＰＶ－Ｎ株有９１％同源性。     

赤霉素对银拖墨兰生长发育及开花的影响

为银拖墨兰的培养及生产提供实用技术,研究了叶喷赤霉素对银拖墨兰生长发育及开花的影响。结果表明:赤霉素处理对银拖墨兰有提早抽箭和开花的作用。其中以200mg·L-1赤霉素处理对提前抽箭及开花效果较好。同时,赤霉素有促进叶长和花箭长的作用,也可以提高叶片内的叶绿素含量和POD、CAT活性,其中以赤霉素浓度为150和200mg·L-1处理对提高叶片叶绿素含量、POD和CAT活性效果较好。     

犬肾细胞系的染色体组型分析与致癌/致瘤性的实验研究

 以人类子宫颈癌细胞系Hela为阳性对照 ,以连传 3代的犬、猫肾原代细胞 (CKC、FKC)为阴性对照 ,对来自国内外不同单位收集的 4株MDCK传代细胞系培养 2 5～ 4 5代的完整活细胞或冻融裂解细胞进行裸鼠致癌 /致瘤实验观察 ,筛选出致癌性极低、符合细胞遗传学要求、无传染因子污染的几株MDCK细胞系用于制苗 ,并建立了相应的细胞种子库和工作库 ,供科研和生产使用 ,4年运转很好。不同代次MDCK细胞系染色体众数所占比率的相差率一般不超过 5 %～ 15 % ,结构畸变率一般为 0～ 3%。研究表明 ,MDCK细胞染色体遗传特征决定致瘤性质 ,并具有种属特异性 ,MDCK细胞不论核型如何 ,始终具有致癌性 ,但其致癌 /致瘤性差 ,只有超二倍体以上细胞才具有高的致癌 /致瘤率 (如YA株的为 2 8/ 5 8) ,亚二倍体细胞的致癌 /致瘤率很低 (其它 3株MDCK细胞的致癌 /致瘤率为 5 / 5 4 ) ,且一般致上皮源性恶性肿瘤 ,多为高中分化腺癌。冻融裂解癌细胞系 (X株Hela、JA株Vero、M株BHK 2 1、YA株MD CK)的致癌 /致瘤性相应降低 ,极低致癌 /致瘤性细胞系 (M株或JC株MDCK)不会因冻融裂解而增加致癌 /致瘤性。证明MDCK细胞系冻融裂解物不致癌 ,降低制苗毒液中细胞系基因含量 ,完全可以将MDCK细胞系 (M ,JB ,JC株 )用于犬五联苗生产。MDCK细胞