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1.
王明霞 《福建农业大学学报(自然科学版)》1996,25(1):56-60
利用狄高辛(DIG)标记制备菊花矮化类病毒(CSV)特异性探针,由反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)进行CSV RNA的反转录和cDNA的扩增,然后比较2种核酸杂交方法-微量板杂交和斑点杂交检测CSV的灵敏度。本研究结果表明,30mg干燥样本抽提的CSV RNA被稀释400倍,取4μL(约750pg样本抽提的RNA)经RT-PCR,其产物再用10×SSC稀释100倍,采用微量板杂交仍可很容易得到 相似文献
2.
应用光敏生物素标记鸡传染性支气管炎病毒cDNA,制备核酸探针、经斑点杂交法和碱性磷酸酶显色后,探针同以cDNA为模板合成的PCR产物及其重组子pSXIBVS1均呈现强阳性的蓝色斑点,而与正常尿囊液、新城疫病毒和鸡败血霉形体无杂交。一个初诊为IB感染的田间病料与探针杂交阳性结果相符合。试验表明该cDNA探针是敏感和特异的检测方法。 相似文献
3.
用光敏生物素标记鸡新城疫鸡cDNA,制备核酸探针,经斑点交和碱性磷酸酶为色后,探针同该cDNA的PCR产物、PCR产物重组子和新城疫强弱毒株呈现阳性反应,与IBV、ILTV、MG和正常尿囊液等均呈阴性杂交反应,该cDNA探针是敏感且特异的检测方法。 相似文献
4.
鸡胚成纤维细胞培养HVT,蔗糖梯度垫层纯化病毒颗粒,抽提病毒DNA,经BamHI降解,光敏生物标记制备成HVTDAN生物素探针,经斑点印迹杂交试验,生物素HVTDNA探针具有较高的灵敏性,可检测出31pg水平的同源DNA序列。 相似文献
5.
PCR技术鉴定中国株和西德株兔出血症病毒核酸作者在先行构建兔出血症病毒(RHDV)中国分离NJ株cDNA克隆的研究基础上,采用酶切鉴定和地高辛标记NJ株病毒核酸探针杂交鉴定,从已获得的cDNA克隆中筛选一克隆PGD-12.把其中插入片段亚克隆M13噬... 相似文献
6.
用以选择犬瘟热病毒RNA的有关碱基顺序,设计DNA探针,并在5'末端偶关一个氨基连接分子:5×AGGGCTCA-GGTAGTCCAGCAATG3',共23个碱基和一个氨基连接分子。NH2-DNA探针在DNA合成仪上合成。合成产物同生物素酰氨基已酸盐N-羟琥珀酰亚胺酯反应,反应物经高效硅胶薄层板纯化,得到生物素标记犬温热病毒DNA探针。 相似文献
7.
以生物素标记的簇毛麦基因组DNA作探针与小麦-簇毛麦杂种双二倍体及异附加系染色体进行原位杂交,旨在探索一种鉴定小麦中簇毛麦染色质的分子细胞遗传学方法。首先试验了标记的簇毛麦DNA与小麦DNA之含量比对原位杂交效果的影响,发现探针混合液中不加未标记的小麦DNA时,获得的原位杂交结果较理想。在八倍体小麦-簇毛麦双二倍体(2n=56)中,14对簇毛麦染色体出现明显的棕褐色原位杂交信号,而小麦染色体不显标记,使这2个物种的染色体很易相互区分开来。进一步用生物素标记的簇毛麦DNA与小麦-簇毛麦6V染色体附加系体细胞杂交,也可检测出其中1对附加的6V染色体。由于该方法标记的簇毛麦DNA覆盖各簇毛麦染色体的整个染色体臂,由此,用其鉴定小片段小麦-簇毛麦染色体易位是有效的。 相似文献
8.
左蕾 《西南大学学报(自然科学版)》1995,17(4):368-370
采用非放射性物质辣根过氧化物酶和生物素代替放射性同位素^32P标记DNA探针进行斑点杂交表明,其灵敏度与^32P标记的相当,且为更简单,快速、安全的DNA杂交检测和应用方法。 相似文献
9.
为准确检测鸡群中减蛋综合征病毒感染情况,从减蛋综合征病毒(EDS)贵州分离毒株HS-1中提纯病毒DNA后,用地高辛标记制备了全基因组探针。在Dot-blot中该探针不与正常鸭胚尿囊液核酸提取物及马立克氏病病毒(MDV)DNA发生反应,只与3株EDS病毒(国际标准毒AV-127、贵州分离毒HS-1、南京分离毒(GC2)DNA呈阳性反应,具有较高的特异性;可检测出30pg的同源DNA,具有较强的灵敏度 相似文献
10.
尿激酶原基因cDNA在BHK21细胞中的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
将人尿激酶原基因cDNA分别插入到真核表达载体pcDNA3的CMV启动子和pSV2neo的SV40启动子下游,构建了重组表达质粒pcDNA3-UK和pSV-2-UK分别将这两种表达质粒以脂质体载体法转染BHK21细胞。ELISA检测结果表明,pcDNA3-UK和pSV2-UK在哺乳动物细胞中能够表达,72h表达量分别为28.7ng/ml和13.5ng/ml。 相似文献
11.
葡萄微茎尖培养及葡萄扇叶病毒的ELISA和探针检测 总被引:6,自引:0,他引:6
在建立‘藤稔’等5个葡萄品种离体培养快速繁殖体系的基础上,通过热处理和微茎尖脱毒培养获得了再生植株;并经过PAS-ELISA和长臂光敏生物素标记GFLV-CP基因cDNA探针检测.结果表明白天38℃夜晚35℃处理脱除GFLV效果最佳;多次继代培养也有脱除GFLV的作用.从而首次获得了‘藤稔’、‘红地球’、‘9307’3个葡萄品种的脱除GFLV的试管苗.PAS-ELISA与探针平行检测的结果还表明,PAS-ELISA检测以P/N<1作为阴性标准更为可靠 相似文献
12.
研究人乳头状瘤病毒可否感染食管鳞状细胞癌及其感染后的意义。方法采用原位杂交和免疫组化法检测33例ESCC中HPVDNA、HPV属特异性结核抗原和增殖细胞核抗原。结论8/33ESCC中可见少量HPVDNA阳性细胞。作者认为,HPV感染可能在某些ESCC的进展中起一定的作用。 相似文献
13.
将人尿激酶原(Pro-UK)基因cDNA分别插入到真核表达载体pcDNA3的CMV启动子和pSV2-neo的SV40启动子下游,构建了重组表达质粒pcDNA3-UK和pSV2-UK,分别将这两种表达质粒以脂质体载体法转染BHK21细胞。ELISA检测结果表明,pcDNA3-UK和pSV2-UK在哺乳动物细胞中能够表达,72h表达量分别为28.7ng/ml和13.5ng/ml。 相似文献
14.
经SDS—冷酚法由纯化的蜀柏毒蛾NPV颗粒抽提到了NPV的DNA.经SephadexG—100柱层析和聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,该DNA是均一制剂.PoNPV-DNA的Tm值测定为70℃,经限制性内切酶HindⅢ和EcoRⅠ酶切,琼脂糖电泳分析测得该DNA分子量约为55×106道尔顿左右. 相似文献
15.
利用地高辛标记技术,对从双峰驼肝脏和肾脏提纯的线粒体DNA进行了标记,制成探针,并用它检测了包含于白细胞总DNA中的微量线粒体DNA.结果表明这一技术完全可以成功地用于微量线粒体DNA RFLP的分析。 相似文献
16.
利用地高辛标记技术,对从双峰驼肝脏和肾脏提纯的线粒体DNA进行了标记,制成探针,并用它检测了包含于白细胞总DNA中的微量线粒体DNA。结果表明这一技术完全可以成功地用于微量线粒体DNARFLP的分析。 相似文献
17.
新城疫病毒F_(48)E_8株cDNA文库的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
以SPF鸡胚繁殖我国标准新城疫病毒F_(48)E_8强毒株,经蔗糖密度梯度超速离心纯化病毒。再以酚-SDS法提取病毒基因组RNA,作为反应模板、采用Promega公司商品试剂盒合成双股cDNA。以同聚物加尾的方法将cDNA克隆到质粒pGEM3Zf(一)中,经AIX平板筛选,限制性内切酶分析和Digoxigenin标记的核酸探针检测,共获得插入外源片段大小在0.6~4.8kb的阳性克隆75个,初步构建了F_(48)E_8株的cDNA文库 相似文献
18.
家蚕核多角体病毒Lef—1和DA26基因的克隆及部分序列分析 总被引:2,自引:1,他引:2
lef-1和DA26基因分别位于egt基因的上游和下游.从pUAc-egt中分离出EcoRI-XbaI1.1kb的egt基因片段,进行缺口平移标记,获得探针。与BmNPVDNA经HindⅢ酶切、电泳、转移至NC膜的DNA进行Southernblot杂交,发现BmNPVDNA的HindⅢD片段呈阳性。从BmNPV基因组中分离出10.4kb的HindⅢD片段,用EcoRI酶切得到HindⅢ-EcoRI2.2kb、EcoRI1.4kb和EcoRI-HindⅢ6.8kb3个片段,分别克隆于pUC19中,命名为pUHE2.2、pUE1.4和pUEH6.8。经双链测序并与AcNPV相关基因序列进行比较,发现lef-1基因被克隆于pUHE2.2中,DA26基因克隆于pUEH6.8中。从所测定的lef-1和DA26基因的启动子及5'端部分序列来看,它们在AcNPV和BmNPV之间有极高的同源性。 相似文献
19.
用地高辛为标记物,以随机引物法标记猪PGD cDNA和HSL cDNA探针,经与半微量全血培养法制备的染色体进行原位杂交后,将猪PGD和HSL基因分别定位在猪6号染色体6q^25和6cen-6q^21区域。 相似文献
20.
新城疫病毒F48E8株cDNA文库的构建 总被引:2,自引:0,他引:2
以SPF鸡胚繁殖我国标准新城疫病毒F48E8强毒株,经蔗糖密度梯度超速离心纯化病毒。再以酚-SDS法提取病毒基因组RNA,作为反就模板,采用Promega公司商品试剂合成双股cDNA。以同聚物加尾的方法将cDNA克隆 粒pGEM 3Zf中,经AIX平板筛选,限制性内切酶分析和Digoxigenin标记的核酸探针检测,共获得插入外源片段大小在0.6-4.8kb的阳性克隆75个,初步构建了F48E8株 相似文献