洋葱挥发油的抗真菌作用及其机理

采用砂堡培养基液体稀释培养法和薄层色谱分析法研究了洋葱挥发油抗真菌效果及机理，以期发现天然抗真菌药物，开发洋葱资源．结果表明：洋葱挥发油提取物对酿酒酵母、白假丝酵母、新生隐球菌、黑曲霉、黄曲霉、红曲霉、青霉等真菌的生长有较强的抑制作用；其最低抑菌浓度酿酒酵母和白假丝酵母为0．25％，新生隐球菌为0．50％．薄层色谱分析表明：洋葱挥发油处理后的自假丝酵母的羊毛周醇、麦角固醇的古量降低。而角鲨烯的音量增高，说明洋葱挥发油可能抑制白假丝酵母麦角周醇的早期合成.     

老瓜头耐盐内生真菌抗真菌活性筛选研究

[目的]对荒漠植物老瓜头(Cynanchum komarovii Al.Iljinski)中以稻瘟霉模型初筛得到的耐盐内生真菌进行抗真菌活性复筛。[方法]采用微量液基稀释法,以白假丝酵母菌、近平滑假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌、新生隐球菌、石膏状小孢子菌、红色毛癣菌、烟曲霉菌等8株常见病原真菌为活性筛选菌株,进行抗真菌活性复筛,检测供试品的最低抑菌浓度(MIC)。[结果]菌株5%-11对新生隐球菌有一定的抑制活性(MIC=32μg/ml),其他菌株对8株常见病原菌的活性较弱(MIC64μg/ml)。[结论]复筛得到一株对新生隐球菌有抑制活性的耐盐内生真菌。     

油松猝倒病病原菌鉴定及致病性测定

[目的]油松苗期发生的猝倒病是油松育苗工作的极大障碍,对该病害病原菌的正确鉴定是研究其致病机理、开展防治工作等的基础。[方法]对1株引起油松苗猝倒病的病原真菌通过形态学、培养性状、致病性及rDNA ITS序列测定来鉴定该病原菌。[结果]在PDA培养基上,该病原菌幼嫩菌丝无色,但在生长过程中逐渐变为褐色,部分菌丝膨大成念珠状;菌丝细胞多核;菌丝平均直径6~10μm,分支发生点附近缢缩并形成一隔膜,分支与再分支呈直角;不产生无性孢子,也不产生菌核;能引起油松苗猝倒病;其rDNAITS序列与瓜亡革菌（Thanatephorus cucumeris）的2个菌株的相似性最大,均为97%。[结论]该病原菌被鉴定为立枯丝核菌（Rhizoctonia solaniKhn）。该研究可为后续试验的进行奠定基础。     

烟草内生细菌Itb295对黑胫病菌的抑制及其鉴定

[目的]确定分离自健康烟草植株的内生细菌Itb295的分类地位和生防潜能。[方法]通过平板对峙培养法测定菌株Itb295对烟草黑胫病菌的抑制作用,并结合菌株形态、生理生化特性和16S rDNA序列(GenBank登录号JF496206)比对分析确定该菌株的分类地位。[结果]鉴定Itb295菌株为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。菌株Itb295对黑胫病菌菌丝生长抑制率为34.64%,受抑制的黑胫病菌菌丝膨大、扭曲、分支增多,不能正常生长,抑菌效果的可逆性分析显示受抑制的菌丝在OA培养基上能够正常生长。[结论]为烟草黑胫病的防治及内生细菌Itb295的进一步研究提供了理论依据。     

灰树花的分离与鉴定

采用形态学和分子生物学相结合的方法,对采集自贵州省惠水县的一株担子茵进行鉴定.结果表明:该担子菌担子果有柄,担孢子卵圆形或椭圆形,单胞,透明(5.2～7.6)μm×(3.5～4.5)μm;茵丝无色至淡黄色,少分支;PDA培养基上茵落正面乳白色,背面淡黄色,生长缓慢.经rDNA-ITS序列分析,该真菌与GenBank中灰树花茵(Grifola frondosa)的同源性达100％.结合形态学特征,确认该担子茵为灰树花(G.frondosa).     

芽孢杆菌两菌株对香蕉炭疽病菌的抑制作用及其机制

分离了两个芽孢杆菌(Bacillus sp.)菌株25-1和25-17,均对香蕉炭疽病菌(Colletotrichum musae Berk.et Curt.)有较强的拮抗作用.平板对峙培养出现明显的抑菌环;以凹玻片法,用两菌株培养滤液处理病原菌分生孢子,其孢子萌发率降低53%~ 69%;将细菌培养滤液和孢子悬浮液涂布于PDA平板上,则两者均能抑制香蕉炭疽病菌分生孢子的形成.普通光学显微镜和扫描电子显微镜观察显示,两菌株均可抑制香蕉炭疽病菌菌丝生长,造成菌丝分支增多,顶端和中央膨大,随着时间的延长畸变结构增加,菌丝成念珠状或菌丝分支显著增多,且顶端细胞变形膨大聚集成簇,菌丝壁穿洞,内含物质泄漏,终使细胞崩解和消融,变成球状的空泡.     

芽孢杆菌两菌株对香蕉炭疽病菌的抑制作用及其机制*

 分离了两个芽孢杆菌（Bacillus sp.）菌株25-1和25-17,均对香蕉炭疽病菌（Colletotrichum musae Berket Curt.）有较强的拮抗作用。平板对峙培养出现明显的抑菌环;以凹玻片法,用两菌株培养滤液处理病原菌分生孢子,其孢子萌发率降低53%~ 69%;将细菌培养滤液和孢子悬浮液涂布于PDA平板上,则两者均能抑制香蕉炭疽病菌分生孢子的形成。普通光学显微镜和扫描电子显微镜观察显示,两菌株均可抑制香蕉炭疽病菌菌丝生长,造成菌丝分支增多,顶端和中央膨大,随着时间的延长畸变结构增加,菌丝成念珠状或菌丝分支显著增多,且顶端细胞变形膨大聚集成簇,菌丝壁穿洞,内含物质泄漏,终使细胞崩解和消融,变成球状的空泡。     

多孔材料对黑曲霉生长作用的研究

[目的]探究多孔材料对黑曲霉生长的影响。[方法]以膨胀石墨和硅藻土为添加剂,将其加入PDA培养基中,观察其对黑曲霉的作用。[结果]培养24 h后,加入膨胀石墨的培养基中黑曲霉菌落直径大于对照。加入硅藻土的培养基中黑曲霉菌落直径与对照差异不显著。培养48 h后,加入膨胀石墨的培养基中黑曲霉菌落直径大于硅藻土,且2种培养基中的黑曲霉菌落直径均大于对照。[结论]培养24 h后,膨胀石墨对黑曲霉有促菌作用,而硅藻土无明显作用;培养48 h后,膨胀石墨对黑曲霉促菌作用优于硅藻土;72 h后,膨胀石墨及硅藻土对黑曲霉促菌作用差异不显著。     

茭白黑粉菌营养菌丝的分离与确证

茭白黑粉菌冬孢子通过单孢子分离所得菌株,在马铃薯琼脂培养基上菌丝呈梭状,一般1～17个隔,于分隔处可产生1～2级分支或不分支,其上产生担孢子,两端尖锐或略钝圆,大小为1.5～6.0 μm×16.5～225.0 μm.这些形态特征与冬孢子在马铃薯液体中萌发形成的菌丝形态完全一致.此外,梭状菌丝能在人工培养基上形成厚垣孢子,其萌发方式与冬孢子一致.由此,确证了梭状短菌丝是茭白黑粉菌(Ustilago esculenta)的营养菌丝.     

尖顶羊肚菌菌丝、分生孢子及原基显微观察与分析

借助光学显微镜对尖顶羊肚菌(Morchella conica)菌丝、分生孢子及原基进行了显微观察分析。结果表明,尖顶羊肚菌气生菌丝呈透明状,根部粗,直径40～70μm;前段菌丝变细,直径20～60μm,且分叉增多。气生菌丝上有似孢子梗形成。土壤内菌丝粗,直径40～80μm,颜色比气生菌丝深,多见分叉与三角形联接。气生菌丝前端分枝形成孢子梗,分枝菌丝直径约20μm,分生孢子轮生于孢子梗上。同时还观察到,原基根部与1～3根活跃菌丝紧密相连,活跃菌丝直径40μm左右,在近原基端颜色深红,菌丝内分隔清晰可见,常呈叉状。推测是由活跃菌丝与分生孢子相互发生作用形成了原基,据此提出了羊肚菌生活史新模型。     

发酵凤眼莲的菌种筛选

[目的]通过菌种筛选探讨发酵凤眼莲的利用价值。[方法]将5种菌种分别置于PDA、PD、营养琼脂、牛肉汤固定培养基上进行菌种活化培养,继后通过单个菌种发酵试验和组合菌种平板拮抗试验对菌种进行筛选。[结果]根据5种菌种在凤眼莲固体培养基上的生长状况,选择生孢噬纤维菌、产朊假丝酵母和黑曲霉作为发酵菌种,其菌种组合发酵效果显著优于单一菌种发酵效果。采用3种菌组合在水分65％、pH值7．0和温度28℃的条件下发酵凤眼莲,产物的粗蛋白含量为47．33％,比所用培养基的粗蛋白含量提高173．74％,粗纤维降解率达77．06％,且有发酵香味,具有优质蛋白饲料的特性。[结论]筛选良好的组合菌种对凤眼莲进行发酵,能有效解决凤眼莲作为饲料存在的高水分、高纤维、低蛋白等问题。     

柳枝稷的组织培养技术研究

[目的]探索柳枝稷的不同组培条件,优化其诱导和分化培养基。[方法]以柳枝稷幼穗为外植体进行组织培养获得组培苗,建立相应的植株再生系统。[结果]愈伤组织诱导培养基为MS＋5．00mg／L2,4-D＋0．15mg／L6．BA＋3．00％蔗糖＋0．75％琼脂;继代与增殖培养基为MS＋4．00mg／L2,4-D＋3．00％蔗糖＋0．75％琼脂;分化培养基为MS＋0．2mg／L KT＋3．00％蔗糖＋0．75％琼脂;生根培养基为1／2MS＋0．80％蔗糖＋0．70％琼脂。愈伤组织诱导和继代培养阶段培养温度为24℃,在分化和生根培养阶段培养温度为28℃。幼穗外植体的出愈率达95％,愈伤组织增殖率在800％-1000％以上,分化率达80％以上,生根率在98％以上。经炼苗后,获得的组培苗的移栽成活率达95％以上。[结论]采用优化激素搭配的培养基可得到高效的诱导率、分化率和生根率。     

矮溲疏组培快繁中的茎芽增殖与生根培养研究

[目的]探讨矮溲疏试管苗的茎芽增殖和生根培养技术。[方法]分别研究培养基中不同的大量元素浓度（1/4MS、1/2MS和MS）、IBA浓度（0~0.8 mg/L）和蔗糖浓度（5、10、15和30 g/L）对矮溲疏试管苗茎芽增殖和生根培养的影响。[结果]大量元素浓度为1/2MS处理的茎芽增殖系数可达3.9,与MS处理差异不明显,但在0.05水平显著高于1/4MS处理;0~0.8 mg/L IBA对矮溲疏试管苗的茎芽增殖无明显作用;蔗糖浓度为5 g/L处理的茎芽增殖系数为3.8,与10和30 g/L处理无明显差异,但在0.05水平显著高于15 g/L处理。上述处理的试管苗生根率均为100%。以土取代琼脂作培养基支撑物进行矮溲疏试管苗的生根培养,生根率可达100%,根茎比大于琼脂支撑培养对照,根毛也长于对照。[结论]该研究为矮溲疏组织培养快繁技术体系的建立奠定了基础。     

蚯蚓体内植酸酶的来源研究

[目的]研究蚯蚓体内植酸酶的来源,为其开发利用提供借鉴。[方法]将干蚯蚓与0.9%NaCl溶液按照1∶4的比例在50℃条件下反应8 h,获得蚯蚓自溶液,再稀释得到10-1、10-2、10-33个浓度梯度溶液,涂布在改良的细菌培养基、合成培养基、改良的查氏培养基及含有植酸钙的琼脂平板上,在不同温度下培养。[结果]在改良的查氏培养基上,28℃培养5 d,出现了透明菌圈,且该透明菌圈随着培养时间的延长而逐渐扩大;在改良的细菌培养基、合成培养基及琼脂平板上均无透明菌圈出现。[结论]蚯蚓体内植酸酶来自于蚯蚓体内的真菌,而非细菌产生或蚯蚓自身产生。     

黄粉虫幼虫抗真菌物质的诱导及其抗真菌活性研究

[目的]研究用真菌诱导黄粉虫幼虫表达抗菌物质及其对真菌的影响。[方法]用黄粉虫幼虫从土壤中诱捕真菌,培养出2种病原真菌作为诱导源分别对黄粉虫幼虫做诱导试验,每种试验分别进行对照、菌刺和菌饲3种处理,并于处理后1、2、3、4和5 d分别提取抗菌物质,用平板琼脂打孔扩散法测定其抑菌圈直径而确定其抗真菌活性。[结果]结果表明,黄粉虫幼虫受真菌诱导后抗真菌活性比对照都有不同程度的增加,同时不同真菌诱导表达样品对于相应的诱导真菌均表现明显的抗真菌活性。说明不同真菌诱导产生的抗真菌物质与诱导源有关,抗真菌物质为黄粉虫幼虫体内固有成分,诱导增加了抗真菌物质的表达量,同时刺激新的抗真菌物质的产生。[结论]用真菌直接诱导黄粉虫幼虫可以产生抗真菌物质。     

产涩柿单宁酶菌株的筛选及鉴定

[目的]获得可产生涩柿单宁酶的微生物,并对其鉴定。[方法]微生物在以涩柿为培养基上自然生长,进行划线分离,获得纯种菌株。将菌株接种于溴酚蓝培养基上,选取变色圈较大的8个菌株,进行COD去除率和单宁耐受力试验,选取COD去除率高、单宁耐受力强的菌株,使用形态学观察法进行菌种鉴定。[结果]获得可产生涩柿单宁酶的菌株,初步鉴定为黑曲霉。[结论]利用该方法,可获得产生涩柿单宁酶的黑曲霉,其COD去除率高、单宁耐受力强,有成为工程菌株的潜力。     

冰砂糖寿组培快繁研究

[目的]探讨冰砂糖寿组培快繁的最佳条件。[方法]以冰砂糖寿幼嫩花序为外植体,研究冰砂糖寿组培快繁技术。[结果]于MS+5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IBA+30 g/L蔗糖+7g/L琼脂的诱导培养基上成功诱导出愈伤组织,在分化培养基MS+0.3 mg/L6-BA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂上继代培养可分化成不定芽,将不定芽转接到增殖培养基MS+0.3 mg/L 6-BA+0.1 mg/LNAA+30 g/L蔗糖+7 g/L琼脂上增殖速度较快,增殖系数达3.79。将其移栽至营养基质(混合泥炭∶粗砂=1∶1)中,移栽成活率可达95%。[结论]建立了冰砂糖寿花序再生及快繁体系,为其规模化生产提供理论依据。     

琼脂培养基质条件下砷在水稻幼苗中的积累转运

[目的]研究砷（As）在水稻幼苗中的积累转运。[方法]利用琼脂培养基质模拟厌氧的湿地环境,在不同As浓度条件下对水稻幼苗进行培养。[结果]培养基质中的As对水稻根部干重没有显著影响,对地上部干重产生了显著抑制作用。低剂量的As可以促进部分水稻品种干物质的积累。水稻根系对As具有较强的吸收积累能力,As被根系吸收后多数被固定于根部,只有少量被转运至茎叶,二者呈极显著正相关关系。[结论]该结果为进一步研究As在水稻中的积累转运规律提供了重要的理论依据。     

黑曲霉HQ-1液体发酵产纤维素酶条件研究

[目的]探讨黑曲霉HQ-1液体发酵产纤维素酶的最适条件。[方法]以1株产酶活力相对较高的黑曲霉HQ-1为出发菌株,采用单因子试验和正交试验对黑曲霉HQ-1液体发酵产纤维素酶的最适条件进行初步研究,并测定了CMC酶（CMCase）和滤纸酶（FPAase）的活力。[结果]影响黑曲霉HQ-1液体发酵产CMCase和FPAase的因素依次是复合碳源的含量、2种碳源的比例、氮源含量和装液量。该菌产CMCase的最适培养基为：麸皮＋玉米秸秆粉15‰（1：1）,NH4Cl2．0‰,其他成分同Mandel’s营养液;产FPAase的最适培养基为：麸皮＋玉米秸秆粉20‰（1：1）,NH4Cl1．5‰,其他成分同Mandel’s营养液。2种培养基的最适pH值和装液量均分别为5．0和50ml／250ml三角瓶。在30℃和170r／min下培养4d后,CMCase和FPAase达到525．2和217．6IU。[结论]该研究为纤维素酶生产菌株的研发提供一定的技术参考。