不同直径卵泡对猪卵母细胞体外成熟的影响

以TCM-199成熟培养猪卵巢表面直径2～3mm,3～5mm和5～8mm卵泡内的卵母细胞,比较了成熟培养液中添加以上各组卵泡液(pFF)对猪卵母细胞体外成熟(IVM)的影响,以成熟培养48h后排出第一极体为成熟标准对猪卵母细胞进行成熟鉴定。结果表明,2～3mm,5～8mm和3～5mm3组卵泡内卵母细胞的体外成熟(IVM)率依次升高,分别为12.7%,31.3%和46.0%,各组间差异显著(P<0.05);添加3～5mm卵泡液的卵母细胞体外成熟率(42.0%)也显著高于5～8mm组(11.0%)和2～3mm组(12.7%)(P<0.05)。试验同时观察记录了不同直径卵泡内卵母细胞的等级,结果发现5～8mm组中A级卵母细胞的比例(37.7%)显著高于3～5mm组(23.9%)(P<0.01),但其B级卵母细胞的比例(45.9%)却显著低于2～3mm(62.1%)组和3～5mm(59.2%)(P<0.05)。这说明,2～3mm,3～5mm和5～8mm3组卵泡中,卵泡直径增大,其在猪卵母细胞体外成熟中的优势渐增。     

山羊小腔卵泡卵母细胞的体外成熟

将小腔卵泡卵母细胞置于含有颗粒细胞并用20mMHepes缓冲的①TCM199＋15％GS,②TCM199＋15％GS＋10μg／mLFSH＋10μg／mLLH＋1μg／mL17β－E2,③TCM199＋15％GS＋10μg／mLFSH＋10μg／mLLH＋1μg／mL17β－E2＋ITS（5μg／mLInsulin,5μg／mlTransferrin,5ng／mLSodium,Sdenite,中培养26－28h,其成熟率分别为19．35％（6．31）,26．53％（26．98）,29.45％（43.146）。结果表明：山羊小腔卵泡卵母细胞在TCM199中可以成熟,促性腺激素及生长因子的添加有助于卵母细胞成熟。     

山羊小腔卵泡卵母细胞的体外成熟和体外受精

采集繁殖和非繁殖季节山羊卵巢，回收大腔（３－６ｍｍ）和小腔（＜２ｍｍ）卵泡卵母细胞，进行体外成熟和受精，结果如下：①繁殖季节的大腔和小腔卵母细胞体外成熟率（６８．４％，２７．５％）均显著（Ｐ＜０．０５）高于非繁殖季节（５２．５％，２０．６％）；②１和１．５周岁龄羊与成年羊相比，前两者的小腔卵泡卵母细胞采集数显著（Ｐ＜０．０５）多于后者（２５．６，２２．５：１５．１），但卵母细胞体外成熟主无显著差异     

猪卵泡液与猪卵母细胞体外成熟与凋亡的关系

本研究就猪卵泡液对猪卵母细胞的体外成熟及凋亡进行了探索试验一证明,体外培养46-48h,成熟液添加5%猪卵泡液能促进成熟,核成熟率为41.2%,成熟液添加20%猪卵泡液则抑制成熟,核成熟率为23.1%,二者差异显著;试验二证明,添加猪卵泡液可以促进猪卵母细胞体外存活时间的延长,体外培养第16天,含0%、5%、10猪卵泡液的存活率分别为2.6%、22.2%、18.6%,添加与否差异显著.     

猪卵泡液和促性腺激素处理时间对猪卵母细胞体外成熟的影响

研究猪卵泡液(pFF)的浓度和促性腺激素(FSH和LH)处理时间对猪卵泡卵母细胞体外成熟的影响.结果表明,在猪卵丘细胞-卵母细胞复合体体外成熟培养46～48 h中的后23～24 h去除促性腺激素可有利于卵丘细胞的扩散,但对卵细胞的核成熟无显著影响(P>0.05);添加适量(10%)的pFF对猪卵母细胞体外成熟有一定的促进作用,但添加浓度太高则相对抑制卵子核成熟进程.     

哺乳动物小腔卵泡卵母细胞体外成熟的研究进展

介绍了哺乳动物小腔卵泡卵母细胞体外成熟的研究现状,对小腔卵泡卵母细胞体外成熟的采集方法、培养时间、血清、激素等影响因素进行了分析,指出了存在的问题及解决办法.     

小鼠腔前卵泡卵母细胞的采集和体外成熟

酶消化配合机械分离，采集１０日龄小鼠腔前卵泡中的卵母细胞－颗粒细胞复合体（ＯＧＣｓ），以自制的胶原膜为底物，在ＭＥＭ培养液中培养１０ｄ，卵母细胞－颗粒细胞复合体由１１０．５±１８．６μｍ增长到１８４．４±６０．６μｍ，卵母细胞由５６．２５±２．０μｍ增长到８２．０±１０．５μｍ．３６．７％的ＯＧＣｓ具有５层以上颗粒细胞，其中９．１％放出第一极体。     

山羊小腔卵泡卵母细胞的体外成熟和体外受精

采集繁殖和非繁殖季节山羊卵巢，回收大腔（３～６ｍｍ）和小腔（＜２ｍｍ）卵泡卵母细胞，进行体外成熟和受精，结果如下：①繁殖季节的大腔和小腔卵泡卵母细胞体外成熟率（６８．４％，２７．５％）均显著（Ｐ＜０．０５）高于非繁殖季节（５２．５％，２０．６％）；②１和１．５周岁龄羊与成年羊相比，前两者的小腔卵泡卵母细胞采集数显著（Ｐ＜０．０５）多于后者（２５．６，２２．５：１５．ｌ），但卵母细胞体外成熟率无显著差异（Ｐ＜０．０５）；③随卵母细胞直径增加，其体外成熟率呈显著上升趋势；④与加新生犊牛血清和生殖激素在颗粒细胞悬浮液中培养相比，加发情山羊血清和激素在颗粒细胞单层上培养可显著（Ｐ＜０．０５）提高小腔卵泡卵母细胞体外成熟率（２０．８％：３４．５％）；⑤将体外成熟的小腔卵泡卵母细胞与体外获能精子进行受精，其受精率为３５．７％（５１／１４３）。     

猪腔前卵泡卵母细胞体外成熟培养初探

【研究目的】为了进一步挖掘猪的遗传潜力,为体外受精、动物克隆和转基因等胚胎生物技术研究提供大量优质卵源。【方法】以极体排出情况为判断标准,采用一步法和两步法成熟培养猪腔前卵泡卵母细胞,来考察猪腔前卵泡卵母细胞最佳成熟方式。【结果】采用任何一种方法卵母细胞经体外成熟后都没有达到MⅡ。然而,腔前卵泡体外培养5d后,分离出的卵丘卵母细胞复合体再培养12d,卵母细胞平均直径达到102.68μm(102.68±12.21),接近正常成熟卵母细胞的体积,为卵母细胞的成熟创造了条件。【结论】用两步法培养猪的腔前卵泡,其卵母细胞能够达到接近正常成熟卵母细胞的体积,说明采用两步法培养猪腔前卵泡卵母细胞是可行的。     

猪卵母细胞体外成熟与冷冻保存的初步研究

比较从不同卵巢卵泡直径获得的卵母细胞体外成熟能力的差异 ,并研究其冷冻保存效果。结果表明 :在体外成熟培养液中添加 10 % (体积分数 ,下同 )ECS的成熟率 (72 86 % )显著高于添加 10 %NCS (6 2 2 1% ) (P <0 0 5 ) ,而添加10 %pFF则抑制卵母细胞的体外成熟。随着卵泡直径的增大 ,卵母细胞体外成熟能力逐渐增强。采用程序冷冻保存方法 ,培养成熟组的卵母细胞成活率 (35 5 9% )显著高于培养前 (2 4 6 4 % )和培养 2 4h组 (2 3 36 % ) (P <0 0 5 )。培养 2 4h(77 2 2 % )和培养成熟 (72 81% )组 ,卵母细胞解冻后的形态完整率均显著高于培养前 (5 3 2 4 % ) (P <0 0 5 )。     

成熟培养基对猪卵母细胞的影响

评估NCSU23和TCM199两种培养基对猪卵母细胞体外成熟、孤雌激活以及核移植重构胚发育的影响。分别以NCSU23和TCM199为基础培养基,向其中添加相同浓度的半胱氨酸、激素和生长因子,作为猪卵母细胞体外成熟培养液,培养44 h(5%CO2、39℃、饱和湿度),挑选第一极体;成熟后的卵母细胞进行孤雌激活和核移植重构胚操作,144 h后观察囊胚数。结果表明,NCSU23组与TCM199组对卵母细胞体外成熟(68.18%和67.55%)、孤雌囊胚率(38.40%和37.60%)与核移植囊胚率(23.79%和21.38%)无显著影响(P>0.05),但是两者对孤雌囊胚细胞数的影响差异显著(分别为38.4和37.6个细胞)(P<0.05)。NCSU23成熟培养基能够使胞质成熟完全,提高囊胚细胞数,有利于妊娠的发生。可见,以NCSU23为基础培养基的体外成熟液有利于猪卵母细胞体外发育。     

山羊卵泡卵母细胞的采集与体外成熟研究

为了建立针对山羊卵母细胞的理想体外成熟培养体系,研究了山羊卵泡卵母细胞的采集方法和采集获得的可用卵母细胞的体外成熟培养条件,结果表明:切割法能够获得较多的可用卵母细胞,且明显增加了用于体外成熟的卵母细胞数;卵母细胞在37.0℃下培养的成熟率显著低于在38.5℃、39.0℃下培养的成熟率(P＜0.05);卵母细胞培养18 h和培养20h的成熟率极显著低于培养24 h和培养26 h的成熟率(P＜0.01);此外,卵母细胞体外成熟培养时,培养液中的胎牛血清添加量以10%～15%为宜.     

人卵泡液对牛未成熟卵母细胞体外培养的影响

【目的】探讨以人成熟卵泡液作为体外成熟培养液培养牛卵母细胞的可能性。【方法】观察并比较未成熟牛卵母细胞分别在灭活人卵泡液与成熟培养液、灭活与未灭活人卵泡液、未灭活人卵泡液不同培养温度(38,38.5和39℃)下,进行体外成熟培养时卵母细胞的极体排出率。【结果】在灭活人卵泡液与成熟培养液中,牛卵母细胞成熟率分别为58.5%和63.5%,二者无显著性差异(P>0.05);在未灭活人卵泡液中,牛卵母细胞成熟率(58.8%)显著高于灭活人卵泡液(37.5%)(P<0.01);在未灭活人卵泡液中38,38.5和39℃培养的牛卵母细胞的成熟率分别为60.7%,58.1%和54.1%,三组间差异不显著(P>0.05)。【结论】人卵泡液可以用于未成熟牛卵母细胞体外成熟;人卵泡液用作成熟培养液时无需灭活,培养温度为38~39℃。     

卵巢皮质与输卵管上皮细胞对猪卵母细胞体外成熟与体外受精的影响

在猪输卵管上皮细胞（pOECs）与猪卵巢皮质细胞（pOCCs）共培养体系中进行猪卵子体外成熟（IVM）,研究比较了pOECs与pOCCs对猪卵母细胞体外成熟（IVM）、体外受精与胚胎发育的影响。结果显示：pOCCs或pOECs参与猪卵子体外成熟可显著提高卵丘扩散与MⅡ期卵子的比例（P<0.05）,然而GV期卵子的比例却没有显著减少（P>0.05）;pOCCs组内成熟卵子的GSH含量显著高于其余各组（P<0.05）,而GSH在pOECs组与对照组之间差异不显著（P>0.05）;尽管pOCCs和pOECs共成熟可显著降低多精入卵的比例（P<0.05）,但是受精率与雄原核形成率（MPN）在各组间却无显著差异（P>0.05）;pOCCs和pOECs共培养均可以显著提高卵裂率与囊胚发育率（P>0.05）,然而囊胚细胞数在处理组与对照组间没有显著性差异（P>0.05）。研究认为,pOCCs与pOECs共培养体系能显著提高猪卵母细胞IVM质量,降低多精入卵的发生,并提高囊胚发育率。     

猪卵母细胞体外成熟的影响因素

通过采集屠宰场废弃猪卵巢,体外分离和培养猪卵母细胞,探讨基础培养基、激素、卵泡直径大小及卵丘细胞层数对猪卵母细胞体外成熟的影响.结果表明:改良TCMl99(mTCMl99)较NCSU-23培养猪卵母细胞成熟率显著提高(P<0.05);基础培养基中添加PMSG、hCG和pFF,卵母细胞体外成熟率(80.63%)显著高于仅...     

不同洗卵液对猪卵母细胞体外成熟和体外受精后早期发育的影响

探讨不同洗卵液对猪卵母细胞体外成熟和体外受精后早期发育的影响,以便开发出简易、经济的洗卵液。结果表明,使用TL-Hepes液、DPBS液、TCM-199()液和TCM-199()液作为洗卵液,对猪卵母细胞体外成熟和体外受精后的早期发育没有显著影响,说明4种洗卵液均可用于猪卵母细胞的洗涤,但DPBS液配制较简易且价格便宜,是最佳的选择。     

乙二胺四乙酸钠对猪卵母细胞的体外成熟和孤雌激活后早期发育的影响

探讨乙二胺四乙酸钠(EDTA-Na)对猪卵母细胞的体外成熟和孤雌激活后早期发育的影响.利用屠宰场猪卵巢卵母细胞,在不添加或添加不同浓度EDTA-Na的成熟培养液中体外成熟44～48 h,挑选核成熟卵母细胞进行孤雌激活,然后移到不添加或添加不同浓度EDTA-Na的胚胎培养液中进行体外培养168 h.结果表明:(1)胚胎培养液中添加适当浓度(25～100 μmol·L-1)EDTA-Na对体外成熟猪卵母细胞孤雌激活后的早期发育具有促进作用,在EDTA-Na浓度为100 μmol·L-1时,效果最佳;(2)成熟液和胚胎培养液中同时添加100 μmol·L-1EDTA-Na对体外成熟猪卵母细胞孤雌激活后的早期发育具有促进作用;(3)成熟液或/和胚胎培养液中添加不同浓度EDTANa对体外成熟培养后的猪核成熟卵母细胞及孤雌激活后的4-细胞孤雌胚SDS-PAGE电泳的蛋白质表达图谱都无显著影响.     

培养条件对绵羊卵巢卵母细胞体外成熟及受精的影响

对绵羊卵巢卵母细胞体外成熟培养及体外受精培养条件进行筛选,结果表明:在基础培养基中添加FCS可以显著提高卵母细胞的体外成熟率,而添加10%、15%和20%FCS的组间,卵母细胞的成熟率差异不明显,表明在基础培养液中添加10%FCS即可使绵羊卵母细胞的体外成熟率达到一个比较高的水平;体外培养时间不同对绵羊卵母细胞的成熟有较大的影响,培养24 h和26 h的卵母细胞成熟率(分别为73.3%和77.5%)显著高于培养18 h和20 h的卵母细胞成熟率(分别为62.5%和65.0%);对活力较低的绵羊精子而言,采用直接上浮法要比离心洗涤法更有利于选取活力较高的精子,并可提高受精卵的卵裂率.