siRNA沉默NCOA2基因对猪肌内前体脂肪细胞分化的影响

[目的]本文旨在研究核受体共激活蛋白2(nuclear receptor coactivator 2,NCOA2)对猪肌内前体脂肪细胞分化能力的影响。[方法]用荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测NCOA2在猪肌内前体脂肪细胞分化过程中的表达变化;通过NCOA2小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制内源NCOA2的表达,并用油红O染色检测沉默NCOA2对肌内前体脂肪细胞分化能力的影响,通过qRT-PCR检测沉默NCOA2对脂肪分化关键基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptorγ,PPARγ)、脂肪酸结合蛋白4(fatty acid binding protein 4,FABP4)、脂蛋白酯酶(lipoprotein lipase,LPL)和脂联素(adiponectin,ADIPOQ)表达的影响。[结果]NCOA2在肌内前体脂肪细胞分化第4天表达量显著升高(P0.05);降低NCOA2表达可显著抑制肌内前体脂肪细胞分化(P0.05),且PPARγ、FABP4、LPL和ADIPOQ基因的表达也受到显著抑制(P0.05)。[结论]体外siRNA沉默NCOA2基因可抑制猪肌内前体脂肪的分化,这可能与PPARγ、FABP4、LPL、ADIPOQ等基因的低表达有关。     

PPAR基因进化及其在脊椎动物发育过程中的表达

过氧化物酶体增殖剂激活受体(Peroxisome proliferator activated receptor,PPAR)是核激素受体家族中的配体激活受体,在不同的物种中已经发现了它的3种亚型,即PPARα、PPARβ(也有称δ)和PPARγ。它们在多细胞动物进化的过程中获得配体结合能力,通过结合到相应的激活剂上,在一些重要的代谢途径中刺激靶基因的表达。其中PPARα和β在爪蟾的胚胎发育早期表达的组织范围较广,在后期表现出较大的组织特异性;在啮齿动物中PPARα、β和γ在胎儿发育和成年动物体内表现出特定的时间和组织上的依赖性的表达模式;PPARα和γ在人体内的表达范围较窄,而PPARβ则较广。     

miR-27b及其靶基因PPARγ在肌内和皮下脂肪细胞中的差异表达分析

[目的]探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptorγ,PPARγ)在肌内和皮下脂肪细胞中的差异表达及其与脂质差异沉积的关系,并从miRNAs角度阐述PPARγ基因差异表达的机制。[方法]用油红O染色法检测肌内前体脂肪细胞与皮下前体脂肪细胞的分化聚脂能力;采用qRT-PCR与Western blot检测PPARγ在肌内脂肪细胞和皮下脂肪细胞中的表达水平;通过生物信息学预测靶向PPARγ的miRNAs,利用qRT-PCR检测候选miRNAs在肌内脂肪细胞和皮下脂肪细胞中的表达水平;用双荧光素酶报告系统鉴定候选miRNAs与PPARγ的靶向性。[结果]肌内前体脂肪细胞的分化聚脂能力显著高于皮下前体脂肪细胞(P0.05);PPARγ的mRNA和蛋白在肌内脂肪细胞中的表达水平显著高于其在皮下脂肪细胞中的表达量(P0.05);生物信息学预测得知miR-130a、miR-130b、miR-128、miR-301、miR-27a和miR-27b可以靶向PPARγ,其中miR-27a与miR-27b在肌内脂肪细胞中的表达量显著低于其在皮下脂肪细胞中的表达量(P0.05);荧光素酶活性分析表明,miR-27b可以显著抑制PPARγ的荧光活性。[结论]在体外,与皮下前体脂肪细胞相比,肌内前体脂肪细胞具有更强的分化能力。miR-27b在两种脂肪细胞中的差异表达可导致靶基因PPARγ的差异表达,进而引起肌内前体脂肪细胞与皮下前体脂肪细胞分化能力的差异。     

鸡肉质性状主要相关基因的研究进展

鸡肉品质是近年鸡遗传育种学家与营养学家研究的热点和难点。而利用候选基因策略寻找影响肉质性状的主效基因,应用于鸡的肉质改良,从遗传学的角度是可行的。本文综述了与鸡肉品质有关的基因:过氧化物酶体增殖物激活受体基因(PPAR)、解偶联蛋白基因(UCP)、脂蛋白脂酶(LPL)、黑色素皮质素受体(MCR)和脂肪酸结合蛋白(FABP)的研究进展。     

PPARβ与哺乳动物生殖的关系

PPARβ是过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)核受体家族中的一员,在体内广泛表达于与脂类代谢有关的组织中。最近的研究发现,PPARβ除了参与脂肪细胞的增殖与分化外,还通过参与胚胎着床及其蜕膜化等过程来影响胚胎的发育。     

柠檬醛对小鼠生长性能、肌内脂肪含量及脂肪酸代谢酶的影响

本试验目的是探究柠檬醛对小鼠生长性能、肌内脂肪(Intramuscular fat, IMF)含量,调控IMF关键基因及脂肪酸代谢酶的影响。选取40只5周龄雄性小鼠,随机分为对照组和试验组,对照组饲喂基础饲料,试验组在基础饲料中添加3.5%的柠檬醛,经过7 d试验环境适应后,饲喂期维持18 d。结果表明,与对照组相比,1)试验组小鼠生长速度显著加快,采食量无显著差异;2)股四头肌IMF含量显著升高(P0.05),同时与IMF沉积相关基因脂肪酸结合蛋白(A-FABP)(P0.05)、过氧化物酶体增殖物激活受体PPARα(P0.01)、PPARγ(P0.05)转录和翻译水平显著上升;3)脂肪酸合成代谢酶基因FASN、ACC的转录水平显著升高(P0.05),分解代谢酶基因CPT-1、ACOX1、AMPK的转录水平显著下降(P0.05)。     

青钱柳低聚糖对3T3-L1前脂肪细胞增殖分化及相关基因表达的影响

探讨青钱柳低聚糖(Cyclocarya paliurus oligosaccharide,CPO)对3T3-L1脂肪细胞增殖分化及相关基因表达的影响。采用水提醇的方法得到青钱柳初多糖,经D301-R大孔吸附树脂和DEAE纤维素阴离子交换树脂分离纯化,收集CPO作用于3T3-L1前脂肪细胞,并采用Q-PCR测定相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisomes proliferator-activated receptorγ,PPARγ)和CAAT/增强子结合蛋白α(CAAT/enhancer binding proteinα,C/EBPα)mRNA表达。结果表明:CPO含有2个组分,其重均分子量分别为3 842 Da和1 481 Da;CPO在低浓度时能促进脂肪细胞的增殖,高浓度时能抑制脂肪细胞的增殖;对脂肪细胞分化的影响较小。CPO可抑制PPARγ和C/EBPαmRNA表达,与对照组比较差异有极显著性意义(P0.01)。表明高浓度的CPO抑制脂肪细胞增殖分化水平,其机制可能与抑制PPARγ和C/EBPαmRNA表达有关。     

脂联素对动物脂肪沉积调控的影响

脂联素（Adiponectin）是脂肪组织分泌的脂肪细胞因子之一,对脂肪沉积具有重要的调节作用。它主要是通过对AMP激活的蛋白激酶（AMPK）、过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）和p38促分裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）等细胞因子作用,增加脂肪酸氧化,减少脂肪沉积。现就脂联素及其受体分子的结构和组织分布、AMPK、PPARα、p38 MAPK3因子对脂肪沉积的调节作用机理,以及在畜禽中的研究进展作一综述,望能为提高畜禽生产水平提供一个新的思路。     

三羟基异黄酮对脂肪酸氧化关键酶的调控研究

[目的]探讨三羟基异黄酮(Genistein,Gen)对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)模型中脂肪酸β氧化限速酶肉碱棕桐酰转移酶1(Carnitine acetyltransferase 1,CPT-1)的调节作用。[方法]油酸诱导细胞建模,实时荧光定量PCR测定三羟基异黄酮处理后细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)和CPT-1的mRNA相对表达量。[结果]Gen能经由PPARs途径上调CPT-1 mRNA的表达。[结论]该研究为三羟基异黄酮在临床药理上的应用以及非酒精性脂肪肝的预防治疗和药物研究提供了试验依据。     

栀子苷的降糖作用和对PPARγ受体的激活

葡萄糖消耗试验表明,栀子苷能显著促进前脂肪细胞对葡萄糖的吸收。小鼠荷糖试验和四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖试验证实,栀子苷具有剂量依赖性降低小鼠餐后血糖及糖尿病高血糖的作用。通过基于PPARγ受体信号通路的报告基因诱导表达试验,发现栀子苷在体内外的降糖功效,可能与过氧化物酶增殖体激活受体γ的激活有关。     

辛酸钠对奶牛乳腺上皮细胞甘油三酯合成及乳脂合成转录调节因子表达的影响

为研究辛酸钠对细胞甘油三酯合成能力及对乳脂合成关键转录调节因子固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达的影响,以体外培养的奶牛乳腺上皮细胞为模型,采用CASY细胞分析仪检测细胞活力和增殖能力,甘油三酯定量试剂盒检测培养液中甘油三酯浓度,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SREBP1和PPARγ相对表达丰度,Western blot检测SREBP1和PPARγ蛋白相对表达水平。结果显示,与不添加辛酸钠组相比,4.0、8.0、12.0mmol/L的辛酸钠能显著抑制细胞活力和增殖能力;0.5~2.0mmol/L的辛酸钠以浓度依赖方式显著降低培养液中甘油三酯的浓度,且能降低或显著降低SREBP1、PPARγ的表达。表明,辛酸钠能抑制奶牛乳腺上皮细胞甘油三酯合成,并对乳脂合成关键转录调节因子的表达具有抑制作用。     

PPARγ与2型糖尿病大血管病变的研究进展

大血管病变是2型糖尿病患者的主要并发症和致残早死的重要原因。糖尿病的代谢异常引起动脉功能障碍，长期高血糖症、高血压、血脂异常及胰岛素抵抗(IR)等是导致2型糖尿病患者合并大血管病变的主要因素。过氧化物酶体增殖蛋白激活性受体γ(Peroxisome Proliferator-activated receptor-γ，PPARγ)是细胞核内受体大家族成员，在脂质和脂蛋白新陈代谢、     

动物脂肪组织相关调节转录因子SREBP-1c、PPARγ、LXRα和UCP1的研究进展

动物脂肪组织的生长包括脂肪细胞的分化和脂肪细胞体积的增大两部分。在脂肪合成和代谢路径中,脂肪分化因子和转录调控因子起到重要作用,本文主要对脂肪组织中调控脂肪生成关键基因表达的转录因子固醇调节元件结合蛋白(SREBP-1c),过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ),肝脏X受体(LXRα)和脂类代谢调控基因解偶联蛋白1 (UCP1)的生理功能进行综述。     

PPARγ对脂类代谢和脂肪细胞分化的调控

 过氧化物酶体增殖物激活受体γ是一种配体活化的核转录因子,具有多种生物学效应。除能调节脂肪细胞分化、脂代谢,细胞增殖、细胞周期外,还能调控细胞因子生成,增强机体对胰岛素的敏感性等作用。主要就PPARγ对脂类代谢和脂肪细胞分化调控作用的最新研究进展进行综述。     

PUFA对脂肪代谢基因表达的影响及其作用机制

综述了多不饱和脂肪酸(PUFA)可以抑制脂肪酸合成酶的基因表达,促进脂肪酸氧化的基因表达的作用。其具体机制可能与3种细胞核受体肝细胞核因子-4α(HNF-4α)(、LXR-α和β)和过氧化物酶体活化增殖因子受体(PPAR-α,β和γ)的相互作用以及转录因子胆固醇调节元件结合蛋白(SREBP1和2)相关。     

徐淮山羊PPAR基因cDNA的克隆和生物信息学分析

为克隆徐淮山羊过氧化氢酶体激活增殖受体(PPAR)基因的cDNA,探讨徐淮山羊PPAR基因的生物信息学功能.根据GenBank中发表的绵羊PPAR基因序列,设计并合成1对引物,采用RT-PCR方法克隆徐淮山羊脂肪组织中PPAR基因cDNA,提交GenBank,并运用DNAStar软件及在线工具进行生物信息学分析.成功克隆出徐淮山羊PPAR基因的编码区全序列cDNA,大小为1 428 bp,GenBank登录号为GU082382,有起始密码子ATG和终止密码子TAG,编码475个氨基酸;徐淮山羊PPAR基因序列与鸡、鼠、猪、牛、绵羊相应编码区(CDs)的同源性分别为81%、89%、92%、98%、99%,徐淮山羊PPAR氨基酸序列与鸡、鼠、猪、牛、绵羊的PPAR氨基酸序列同源性分别为92.9%、97.3%、98.3%、99.6%、99.8%;PPAR蛋白无信号肽区域,属于非分泌型蛋白.     

PPARγ基因多态性与绍兴鸭生长发育性能关联分析

以绍兴鸭为材料,选择与生长发育密切相关的候选基因——过氧化物酶体增殖剂激活受体γ(PPARγ)基因,通过直接测序方法扫描其核苷酸多态性位点,并分析其与生长发育性能的关联性。结果表明:在PPARγ基因的8 169bp(AC)处检测到1个多态性位点,且处于Hardy-Weinberg平衡状态(P0.05);最小二乘法分析表明,PPARγ基因的AC基因型个体8周龄体重显著高于CC基因型个体,CC基因型个体12周龄半潜水长、53周龄胫围显著高于AA基因型个体;其屠体重、全净膛重、胸肌重、腿肌率各基因型间差异不显著。这一研究为该品种选育中监测绍兴鸭的生长发育和充分利用淘汰种公鸭肉用价值提供了一定的参考材料,并从分子水平上丰富了绍兴鸭的遗传信息。     

大豆异黄酮对大鼠肝脏脂肪酸代谢的影响

【目的】研究不同剂量大豆异黄酮对大鼠肝脏脂肪酸代谢的影响并对其机理进行探讨。【方法】试验选取40只6周龄SD大鼠并随机分为对照组和低、中、高剂量组,每组10只。将不同剂量的大豆异黄酮(0、50、250、500 mg/kg)连续4周经口灌胃并记录大鼠每周体重变化;利用荧光定量PCR检测大鼠肝脏中固醇调节元件结合蛋白1(SREBP-1c)、乙酰辅酶A羧化酶α(ACC1)、脂肪酸合成酶(FAS)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)以及甘油三酯水解酶(ATGL)mRNA表达水平。【结果】与对照组相比,中、高剂量组大鼠体重极显著(P0.01)降低并呈剂量依赖性;低剂量组甘油三酯含量显著下降(P0.05),中剂量组总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白含量显著下降(P0.05),高剂量组甘油三酯和低密度脂蛋白含量极显著下降(P0.01);肝脏HE染色未见异常病理变化,油红O染色可见中、高剂量组脂滴明显减少;低剂量组大鼠肝脏中FAS、ACC1 mRNA表达量显著降低(P0.01),中、高剂量组FAS、SREBP-1C和ACC-1mRNA表达量显著降低(P0.05或P0.01),而PPARα和ATGL mRNA表达量显著升高(P0.05或P0.01)。【结论】大豆异黄酮可通过抑制SREBP-1c、ACC1和FAS,增加ATGL和PPARα的基因表达,从而影响肝脏脂肪酸代谢。     

广西三黄鸡PPARγ基因克隆及实时荧光定量PCR的建立

[目的]克隆广西三黄鸡过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因,建立该基因的实时荧光定量PCR,为后续开展广西三黄鸡PPARγ基因组织表达谱及品种间表达差异研究奠定基础.[方法]根据GenBank已公布的鸡PPARγ基因序列保守区域,用Oligo 6.0软件设计合成1对引物,以广西三黄鸡脂肪总RNA为模板,用RT-PCR从广西三黄鸡克隆PPARγ基因.以携带PPAR γ基因片段的重组质粒为标准品,建立基于SYBR Green Ⅰ染料法的实时荧光定量PCR标准曲线.[结果]广西三黄鸡PPARγ基因的编码区序列(CDS)长1428 bp,编码475个氨基酸;与GenBank已公布的鸡PPARγ基因(AF163811)参考序列比对,其同源性为99.7%,存在4个位点碱基突变,但均为无义突变.广西三黄鸡PPARγ基因的实时荧光定量PCR标准曲线方程为:y=-3.568x+28.50,扩增效率为1.907,实时荧光定量PCR扩增产物的溶解曲线峰单一.[结论]鸡PPARγ基因在进化中比较保守;建立的广西三黄鸡PPARγ基因实时荧光定量PCR是可行的.