大通犊牦牛组织中线粒体SDH活性与其亚基mRNA表达的测定

为探讨高原低氧环境下大通犊牦牛线粒体琥珀酸脱氢酶(SDH)在不同组织中的表达模式以及SDH活性与其亚基mRNA表达量之间的关系,采用酶联免疫分析法(ELISA)对犊牦牛心肌、骨骼肌、大脑、肝脏组织中线粒体SDH活性进行测定;实时荧光定量PCR(Real-Time PCR)检测组织中Sdha、Sdhb、Sdhc和Sdhd亚基mRNA表达量。结果表明:大通犊牦牛大脑、心肌、骨骼肌组织中线粒体SDH活性显著高于乐都犊牦牛;大脑组织中线粒体Sdh4个亚基mRNA表达量极显著高于乐都犊牦牛。结论:含野血大通犊牦牛组织线粒体SDH有氧代谢功能强于乐都犊牦牛;大脑组织线粒体Sdh4个亚基转录水平较高;大通犊牦牛大脑组织线粒体SDH活性与Sdh4个亚基mRNA表达量呈正相关。     

大通犊牦牛心肌组织超微结构与HIF-Iα表达量早期发育变化特点的研究

为研究低氧环境下大通牦牛这一杂交品种其心肌组织在早期发育过程中的代偿性改变,本实验选取出生1日龄、1月龄、3月龄、6月龄大通牦牛为研究对象.采用超微结构形态学方法,通过定性定量的方法对出生1日龄、1月龄、3月龄、6月龄大通牦牛心肌细胞线粒体的超微结构变化特点进行分析;采用实时荧光定量PCR(Real Time-PCR)...     

大熊猫等8种野生哺乳动物蛔虫的线粒体COXⅠ和COXⅡ基因的亲缘关系分析

为了探讨寄生于大熊猫、小熊猫、北极熊、棕熊东北亚种、棕熊西藏亚种、黑熊四川亚种、黑猩猩和白眉长臂猿体内蛔虫的分类地位,采用PCR技术扩增了这些野生动物体内寄生蛔虫的线粒体COXⅠ、COXⅡ基因序列,并与GenBank中注册的同源性序列进行了分析。序列分析结果显示:扩增的8种野生哺乳动物蛔虫的COXⅠ、COXⅡ基因长度均分别为393和582bp,其中大熊猫与小熊猫及4种熊科动物蛔虫COXⅠ和COXⅡ基因的相似性分别为94.8%～95.0%和94.9%～95.5%;黑猩猩和白眉长臂猿蛔虫的COXⅠ、COXⅡ基因的相似性分别为99.8%和99.5%。分子系统树(NJ/MP/ML)表明,寄生在大熊猫、小熊猫和4种熊科动物体内的蛔虫均为贝蛔属(Baylisascaris)蛔虫;而黑猩猩和白眉长臂猿体内寄生的蛔虫应为蛔属(Ascaris)蛔虫。同时,分析结果也揭示了蛔虫与宿主之间存在协同进化关系。     

不同发育期大通牦牛心肌、骨骼肌线粒体ATP酶活性的测定

对青海省大通牦牛1、30、180日龄及成年组心肌和骨骼肌线粒体Na+-K+-ATP酶、Mg2+-ATP酶、Ca2+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性进行测定。结果显示,牦牛心肌、骨骼肌线粒体Na+-K+-ATP酶、Mg2+-ATP酶、Ca2+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶活性在年龄组间差异均不显著(P>0.05)。表明大通牦牛在生长发育阶段心肌、骨骼肌线粒体ATP酶在物质运输、能量转换及信息传递等方面发挥着稳定的作用,且与年龄之间无明显的线性关系。     

高原犊牦牛培育的研究现状与进展

作者阐述了高原犊牦牛培育的研究现状,通过对近年关于牦牛围产期、初乳饲喂、放牧饲养、早期出栏、早期断奶与代乳料、益生素使用等方面研究文献的总结,结合高原地区实际情况,提出建立高原犊牦牛培育系统研究的需求。     

大通牦牛的培育——不同类型牦牛抗氧化酶活性测定及其与牦牛强抗逆性关系的研究

研究了半血野牦牛,横交一世代牦牛及家牦牛血液红细胞中铜锌超氧化物歧化酶(简称Cu Zn-SOD)、过氧化氢酶(简称CAT)二种抗氧化酶的活性.统计分析结果表明半血野牦牛、横交一世代牦牛两种酶的活性均显著或极显薯高于家牦牛,半血野牦牛和横交一世代牦牛之间、同一类型不同性别牦牛之间均无显著差异.并对抗氧化酶活性与牦牛抗逆性之间的关系作了初步探讨.     

野牦牛与大通牦牛初生重的比较研究

野牦牛（Bosmutus）是我国青藏高原上的特有牛种,是家牦牛（Bosgrunniens）的最近祖先。野牦牛性情猛烈,体躯高大,体质结实粗犷,对青藏高原严寒、缺氧、多变恶劣的环境具有极强的适应性。     

iNOS在大通牦牛和平原黄牛肺脏组织中增龄性表达变化研究

为了阐明大通牦牛肺脏组织中诱导型一氧化氮化酶(iNOS)随着年龄增长的变化趋势和特点,试验从青海省大通县(海拔3 200 m)选取健康的1日龄、30日龄、180日龄和成年的大通牦牛作为研究对象,同时选择湖北省襄阳市(海拔约100 m)相同发育阶段的平原黄牛作为对照,采用实时荧光定量PCR和Western-blot分析,从基因和蛋白质水平对大通牦牛iNOS在不同发育阶段中的表达情况进行研究。结果表明：随着年龄增长,大通牦牛肺脏组织iNOS基因表现为先降低再升高的趋势,与成年时比较,1日龄时相对表达量最高(P<0.05),30日龄时相对表达量最低(P<0.05);平原黄牛表现为随着年龄增长逐渐降低的趋势,与成年时比较各日龄时均差异显著(P<0.05)。相同发育阶段,1日龄时大通牦牛肺脏组织iNOS基因相对表达量显著高于平原黄牛(P<0.05),30日龄时显著低于平原黄牛(P<0.05),180日龄时差异不显著(P>0.05),成年时显著高于平原黄牛(P<0.05)。肺脏组织iNOS蛋白表达,无论是不同发育阶段的变化趋势,还是相同发育阶段的表达特点,...     

西藏牦牛血液酶活性与产奶量的相关性研究

本研究测定了 2 8头西藏牦牛血液中乳酸脱氢酶 (LDH)、碱性磷酸酶 (AKP)、酸性磷酸酶 (ACP)、过氧化氢酶(CAT)、淀粉酶 (Amy)、超氧化物歧化酶 (SOD)等 6种酶活性 ,并与产奶量进行了相关性分析。结果发现 ,西藏牦牛产奶量与LDH、AKP、CAT、Amy和SOD活性均呈正相关 ;与ACP活性呈负相关 ;其中 ,西藏牦牛产奶量与LDH活性呈极显著正相关 (R2 =0 .2 94 )。     

“大通牦牛”胎盘-胎儿组织线粒体SDH、CCO和ATP酶活性的测定

为探究牦牛发育早期低氧适应的生物学机制,以"大通牦牛"(海拔3 200 m左右)为研究对象,采用酶联免疫分析法(ELISA)和比色法对妊娠期4月龄牦牛胎盘、胎儿及出生1日龄牦牛组织中琥珀酸脱氢酶(SDH)、细胞色素C氧化酶(CCO)及三磷酸腺苷(ATP)酶活性进行测定。结果:胎儿和犊牦牛骨骼肌、心肌、肝脏及大脑各组织线粒体SDH、CCO活性差异均不显著(P>0.05);妊娠4月龄胎盘组织和胎儿肝脏组织线粒体中Na+-K+-ATP、Mg2+-ATP、Ca2+-ATP和Ca2+-Mg2+-ATP 4种ATP酶活性均高于心肌、骨骼肌、大脑组织,差异显著(P<0.05);出生1日龄牦牛骨骼肌、心肌、肝脏及大脑各组织间4种ATP酶差异不显著(P>0.05),各组织中Ca2+-Mg2+-ATP酶活性均高于其他ATP酶活性。研究表明牦牛在发育早期组织线粒体中SDH、CCO保持相对稳定的水平,而ATP酶在物质运送、能量转换以及信息传递方面发挥重要的作用。     

西方蜜蜂的线粒体DNA细胞色素氧化酶亚基-Ⅰ～细胞色素氧化酶亚基-Ⅱ富含A+T非编码区单倍型类群

西方蜜蜂(Apis mellifera)的线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)细胞色素氧化酶亚基-(Icytochrome C oxidase subunit Ⅰ,COⅠ)~细胞色素氧化酶亚基-Ⅱ(COⅡ)富含A+T非编码区(AT-rich noncoding region,NC)属于高变异DNA序列,既呈现mtDNA长度变异又呈现mtDNA序列变异,它作为mtDNA多态性标记广泛地应用于A.m.地理亚种的DraⅠ酶限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,DraⅠ RFLP)分析和单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)分析。在本文中,A.m.非洲世系mtDNA的28种DraⅠ RFLP谱图被归纳为3种COⅠ-COⅡ NC单倍型类群,即P_0、Q元件组成类群,P_1、Q元件组成类群以及P_2、Q元件组成类群;A.m.西部欧洲世系mtDNA的90种DraⅠ RFLP谱图被归纳为1种COⅠ-COⅡ NC单倍型类群,即P、Q元件组成类群;A.m.东部欧洲世系mtDNA的25种SNP谱图被归纳为1种COⅠ-COⅡ NC单倍型类群,即Q元件组成类群;A.m.亚洲世系mtDNA的29种DraⅠ RFLP谱图被归纳为3种COⅠ-COⅡ NC单倍型类群,即P_0、Q元件组成类群,P_0'、Q元件组成类群以及P_1'、Q元件组成类群。本文综述了这个研究进展。     

大通牦牛的培育——6月龄、18月龄产肉性能的研究

通过屠宰试验和胴体分割可检验一世代大通牦牛的产肉性能.6月龄组和18月龄组牦牛分别为14头和12头.结果表明一世代大通牦牛6月龄和18月龄体重分别为88.98 kg±10.41 kg,150.5 kg±56.1 kg,比同龄家牦牛的71.83 kg±10.23 kg和117.7 kg±17.4 kg分别高17.45 kg和32.8 kg,差异极显著(P＜0.01);两年龄组中一世代大通牦牛和家牦牛屠宰率均为48%～50%;两年龄组中,一世代大通牦牛胴体重、净肉重和优质肉块重显著高于家牦牛(P＜0.05).     

大通牦牛血液生化指标和激素与体重的相关性研究

对生长牦牛(0.5～3.5岁)的血液总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)、血钙(CA)、无机璘(IP)和对血液生长激素(GH)、三碘甲状腺素(T3)、四碘甲状腺素原(T4)、胰岛素(INS)含量的季节性变化进行了系统的测定和分析,同时跟踪测定了生长牦牛的体重和放牧草场牧草产量和营养成分的变化.结果表明,所测血液生化指标和激素的季节性变化达极显著水平(P＜0.01)或显著水平(P＜0.05),同一季节内各年龄阶段间差异主要表现在A组(0.5～1.5岁)与B组(1.5～2.5岁)和C组(2.5～3.5岁)之间,B组与C组间无显著差异.各组牛的体重增长表现出明显的阶段性,5～9月增重显著,1～5月减重显著,五月为生长牦牛减重转入增重的临界月.体重与血液TP、ALB、CREA、T4呈极显著正相关(P＜0.01).因此,生长牦牛的物质代谢系统在2～3岁已趋于稳定和完善,能适应高寒草原上终年放牧的生态环境.血液生化指标和激素都与牧草的季节性变化相一致.血清T4、TP、CREA可作为2岁以上放牧牦牛营养状况的监控指标.牦牛的体重季节性变化依牧草产量和营养成分的变化而转移.     

牦牛、犏牛睾丸组织中SYCP 3基因mRNA表达水平研究

本文采用RT-PCR和荧光定量PCR对牦牛SYCP3基因的组织表达,以及SYCP3基因在牦牛和犏牛睾丸组织中的表达水平进行分析。结果表明,SYCP3基因在牦牛睾丸组织中特异表达,牦牛与犏牛睾丸组织中SYCP3基因的表达水平差异极显著（P〈0．01）。睾丸和附睾组织切片显示,牦牛睾丸组织中可见各级生精细胞,附睾内可见发育良好的精子,而犏牛睾丸组织中无次级精母细胞和更高级生精细胞、附睾内未观测到精子,与人和小鼠SY-CP3基因缺失或表达水平降低出现的表型一致,可以认为SYCP3基因的表达水平可能与犏牛的雄性不育有一定的关系。     

麦洼牦牛乳蛋白多态性与泌乳性能相关性的研究

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)对 10 9头麦洼牦牛乳蛋白多态性进行分型 ,并采用最小二乘法分析乳蛋白多态性与泌乳性能及乳蛋白组分之间的相关性 ,结果表明 :β CN、κ CN和α La呈单态 ,而αs1 CN和 β Lg呈多态 ,优势基因型分别为DD和EE型 ,频率分别为 0 .7798和 0 .95 4 1,乳蛋白基因座对泌乳性能及乳蛋白相对含量均无显著影响     

胰岛素、胰高血糖素对体外培养犊牛肝细胞CPT-Ⅰ和CPT-ⅡmRNA表达的影响

体外原代培养犊牛肝细胞,添加不同浓度的胰岛素（insulin,INS）（0、1、10、100、1 000nmol/L）和胰高血糖素（glucagon,GLN）（0、1、10、100、1 000nmol/L）,每个处理做3个重复,分别培养1h后,提取总RNA。实时荧光定量PCR（qRT-PCR）的方法,检测肉碱棕榈酰转移酶Ⅰ（carnitine palmitoyl transferase,CPT-Ⅰ）和肉碱棕榈酸转移酶Ⅱ（carnitine palmitoyl transferase,CPT-Ⅱ）mRNA表达的变化。结果显示,随着培养液中INS含量的升高,肝细胞中CPT-ⅠmRNA和CPT-ⅡmRNA的表达量逐渐降低,呈现一定的剂量依赖性。随着培养液中GLN含量的升高,肝细胞中CPT-ⅠmRNA和CPT-ⅡmRNA的表达量均升高,呈现一定的剂量依赖性,且当GLN的添加浓度高于100nmol/L时,CPT-ⅠmRNA和CPT-ⅡmRNA的表达量显著升高（P〈0.01）。结果表明,INS可在一定程度上抑制脂氧化关键酶的表达,GLN可显著促进脂氧化关键酶的表达。     

产肠毒素大肠杆菌肠毒素LTB、STⅠ和STⅡ融合基因的构建与表达研究

PCR方法扩增产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)LTB、STⅠ、STⅡ基因,将LTB、STⅠ、STⅡ基因重组入pET32a质粒载体,对构建的重组质粒pBST进行酶切分析、PCR检测以及核苷酸序列分析,结果表明,插入片段LTB-STⅡ-STⅠ的核苷酸序列与预期一致,且阅读框正确.pBST在宿主菌BL21(DE3)RIL中的表达产物经SDS-PAGE初步分析,显示重组融合蛋白的分子量约为40kD,其表达量约占菌体总蛋白的46%.     

西藏牦牛粪便大肠杆菌毒力特性、耐药性与Ⅰ类整合子分子特征相关性分析

【目的】牦牛作为西藏自治区人畜共患及多重耐药病原体的重要宿主之一,在养殖过程中滥用抗菌药物是导致牦牛多重耐药发展及传播的主要原因。本研究旨在对西藏牦牛源大肠杆菌菌株毒力特性、耐药性、整合酶、生物被膜表型的相关性进行分析。【方法】在西藏拉萨、林芝、那曲养殖户采集200份牦牛腹泻样品,利用细菌学方法使用麦康凯培养基和伊红-美蓝培养基分离纯化大肠杆菌,用16S rDNA通用引物对疑似大肠杆菌进行PCR扩增及测序,所获序列用NCBI数据库进行BLAST比对。对大肠杆菌进行7类16种抗菌药物敏感性试验,选择致病性关系密切的4类10种毒力基因,以及20个常见耐药基因和2个Ⅰ类整合子进行PCR检测,采用改良半定量结晶紫染色法确定分离大肠杆菌生物被膜表型并进行相关性分析。【结果】共分离鉴定出91株牦牛源大肠杆菌,对7类16种抗菌药物的纸片扩散试验结果表明,大肠杆菌对克林霉素耐药性最强(87.91%),存在多重耐药现象且最多出现13耐。在毒力基因检测中,STEC、ETEC、EPEC、NTEC 4类毒力基因均有阳性存在,其中F17毒力基因占59.34%(54/91),stx1毒力基因占49.45%(45/...     

无角牦牛与有角牦牛血液生理、生化指标的比较研究

本研究从血液生理、生化指标水平探讨有角和无角牦牛群体的体况和代谢差异,为无角牦牛新品种的选育提供理论依据。试验检测了有角、无角牦牛群体的30项血液生理与生化指标,并用独立样本t检验对两个群体测得的各项指标进行了比较分析。结果表明,两群体间有11项指标差异极显著（P<0.01）,5项指标差异显著（P<0.05）,14项指标差异不显著（P>0.05）。从测定的数据初步判定,有角与无角牦牛群体在高原低氧适应性、肝脏代谢、肾脏代谢及骨质形成方面存在一定差异,无角牦牛比有角牦牛更适应高原低氧的环境。本试验结果可为牦牛品种资源的合理保护和利用以及新品种的选育提供科学依据。     

牦牛PRLHR基因的克隆、序列分析及组织表达研究

试验旨在对牦牛催乳素释放激素受体（prolactin releasing hormone receptor,PRLHR）基因进行克隆、序列分析及组织表达研究。采集5头母牦牛和5头母黄牛的下丘脑、脑垂体前叶、卵巢、输卵管和子宫组织,采用RT-PCR技术扩增得到PRLHR基因cDNA全长,通过生物信息学方法分析该基因编码蛋白的生物信息学特征,利用实时荧光定量PCR技术测定PRLHR基因在牦牛及黄牛各组织中的表达量。结果显示,牦牛PRLHR基因序列长1 625 bp,其中CDS区1 113 bp、5'-UTR 22 bp和3'-UTR 490 bp,编码370个氨基酸,与黄牛、水牛、绵羊、猪和人的核苷酸序列有较高的同源性,在进化过程中十分保守;牦牛PRLHR为不稳定疏水蛋白,无信号肽,存在7个跨膜结构域;有13个丝氨酸磷酸化位点、6个苏氨酸磷酸化位点和4个酪氨酸磷酸化位点;有3个N-糖基化位点和10个O-糖基化位点;蛋白二级结构中α-螺旋、无规则卷曲、延伸链和β-转角分别为49.19%、31.89%、15.68%和3.24%;蛋白质三级结构预测显示,牦牛PRLHR蛋白具有GPCRs超级家族中PrRP家族的典型结构域。实时荧光定量PCR结果表明,PRLHR基因在牦牛输卵管组织中的表达量显著高于其他组织（P<0.05）;在牦牛下丘脑、脑垂体前叶、子宫和输卵管组织中的表达量极显著高于黄牛（P<0.01）。试验成功克隆得到牦牛PRLHR基因序列,并对其进行了生物信息学和组织表达特性分析,为进一步研究PRLHR基因在牦牛繁殖活动中的调控作用奠定了基础。