c-Fos调节hCG诱导的仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的信号转导途径

睾酮是一种重要的类固醇激素,动物体内约95%的睾酮都由睾丸间质细胞合成并分泌。研究显示,原癌基因参与性腺功能调控,c-Fos作为原癌基因的1种,在生精细胞发育过程和睾丸内分泌功能中起着重要调控作用。本试验以荣昌仔猪为试验对象,探究c-Fos调节hCG诱导仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的信号转导途径,为进一步研究仔猪睾酮分泌的机理奠定基础。结果显示:(1)间质细胞cAMP在hCG诱导后显著增高,当二丁酰cAMP与hCG共同作用时,睾酮分泌达到最大,且当二丁酰cAMP与c-Fos ASONDs作用时,可明显逆转c-Fos ASONDs对hCG诱导仔猪间质细胞睾酮分泌的抑制作用。(2)维拉帕米(10-5 mol/L)对hCG诱导的间质细胞睾酮分泌未见明显作用,当维拉帕米和c-Fos ASONDs共同作用时也没有加强c-Fos ASONDs对hCG诱导的睾酮分泌的抑制作用。     

催乳素调节绵羊睾丸间质细胞睾酮分泌机制的研究

本实验利用睾丸间质细胞体外培养方法，研究了催乳素（ＰＲＳ）对睾酮分泌调节的机制。结果表明，体外培养的绵羊睾丸间质细胞对激素的刺激在培养的前四天较敏感。ｈＣＧ依剂量关系刺激睾酮的分泌。ＰＲＬ对ｈＣＧ的刺激作用起着双相调节作用：低剂量的ＰＲＬ（１￣３０ｎｇ／ｍｌ）可以增加ｈＣＧ的刺激强度３５￣７１％，而高剂量的ＰＲＬ（１０００ｎｇ／ｍｌ）则抑制ｈＣＧ的活性４０％。当培养液中加入不同剂量的睾酮合成前体物     

c-jun对体外培养仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的影响

本试验用c-junASODNs诱导c-jun基因发生转录后沉默,探讨原癌基因c-jun对仔猪睾酮分泌的作用及可能机制。以2~3周龄长白仔猪为研究对象,采用体外培养体系,研究c-jun对基础状态下和hCG诱导下间质细胞(Leydig cell,LC)睾酮分泌及基础状态下LC增殖及凋亡的影响。结果显示,c-junASODNs以剂量依赖性方式抑制基础状态下和hCG诱导下睾酮分泌(P0.01)及基础状态下LC增殖(P0.01),当1μmol/Lc-junASODNs时,显著抑制LC的凋亡(P0.05)。结果表明,c-jun在基础状态下还是hCG诱导下均可促进仔猪LC睾酮的分泌,这种作用与c-jun促进LC增殖和凋亡有关。     

白细胞介素-1α调节仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的机制

本实验利用体外培养的２～３周龄仔猪睾丸间质细胞,研究了ＩＬ１α调节间质细胞睾酮分泌的机制。结果表明,ＩＬ１α能抑制ｈＣＧ刺激间质细胞分泌睾酮,其睾酮产生量随ＩＬ１α剂量增大（０～１００μ／ｍｌ）及刺激时间延长（０～４８ｈ）而下降。用２０μ／ｍｌ和５０μ／ｍｌ的ＩＬ１α刺激４８ｈ,可分别抑制６０％和６５％的睾酮产生。ＩＬ１α同样抑制ｃＡＭＰ（３μｍｏｌ／ｍｌ）诱导的间质细胞睾酮的分泌,但不影响ｈＣＧ与间质细胞膜受体的结合量及ｈＣＧ诱导的第二信使ｃＡＭＰ的增加。说明ＩＬ１α抑制ｈＣＧ促睾酮分泌的作用,其抑制点不在ｈＣＧ与受体的结合及第二信使ｃＡＭＰ的聚集上,而在ｃＡＭＰ产生之后的某个环节。     

白纤维介素—1α调节仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的机制

本实验利用体外培养的２－３周龄仔猪睾丸间质细胞,研究了ＩＬ－１α调节间质细胞睾酮分泌的机制。结果表明,ＩＬ－１α能抑制ｈＣＧ刺激间质细胞分泌睾酮,其睾酮产生量随ＩＬ－１α剂量增大（０－１０μ／ｍｌ）及刺激时间延长（０－４８ｈ）而下降。     

C-fos对体外培养仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的影响

通过C-fos ASODNs诱导C-fos基因发生转录后沉默,用人绒毛膜促性腺激素(HCG)诱导体外培养的3周龄荣昌仔猪睾丸间质细胞(Leydig cells,LC)睾酮分泌,用酶联免疫分析方法检测基础状态下和HCG诱导下体外培养的仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的水平。结果显示,C-fos ASODNs以剂量依赖性方式抑制基础状态下和HCG诱导下的睾酮分泌(P0.01),这表明C-fos在基础状态下还是HCG诱导下均可促进仔猪睾丸间质细胞睾酮的分泌。     

牛磺酸对大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮的影响及作用机理初探

将雄性Wistar大鼠（220～250g）的睾丸间质细胞混悬液用不连续梯度（5％、30％、58％、70％）Percoll分离液分离，在细胞培养液中分别加入牛磺酸及促性腺激素（HCG）、雄烯二酮、孕酮、cAMP进行培养，用放射免疫分析方法测定作用24h后培养液中睾酮含量。结果表明，牛磺酸可使睾丸间质细胞分泌睾酮的能力显著增加；能增加HCG和cAMP诱导的睾酮分泌；能促进雄烯二酮和孕酮向睾酮的转化。牛磺酸能增加睾丸间质细胞睾酮的分泌，并可能在类固醇合成的多个环节中都起到了一定的促进作用。     

IGF-Ⅰ对山羊睾丸间质细胞分泌睾酮的调节机理

以３０～４０日龄山羊的睾丸间质细胞为研究对象,采用体外细胞培养的方法,用胰岛素样生长因子－Ⅰ（ＩＧＦ－Ⅰ）和ｈＣＧ进行不同的处理,用放射免疫分析法（ＲＩＡ）测定了睾酮和ｃＡＭＰ的含量,用荧光分光光度分析法测定了ＤＮＡ含量。结果表明,ＩＧＦ－Ⅰ能促进体外培养的山羊睾丸间质细胞ｃＡＭＰ生成、睾酮分泌及ＤＮＡ合成,以上作用随ＩＧＦ－Ⅰ剂量的增大而加强,并且与ｈＣＧ有协同作用。根据以上结果首次提出ＩＧＦ－Ⅰ调节山羊睾丸间质细胞分泌睾酮机理的假设：ＩＧＦ－Ⅰ与其膜受体结合引起ｃＡＭＰ增多,ｃＡＭＰ通过激活一系列合成ＤＮＡ和睾酮所需酶类而使ＤＮＡ和睾酮的合成增加。这与催乳素（ＰＲＬ）和白细胞介素－１α（ＩＬ－１α）等含氮激素（因子）调节间质细胞分泌睾酮的机理不同,而与ＦＳＨ、ＬＨ等含氮激素调节性腺分泌类固醇激素的作用机理相似。     

白细胞介素-1α对仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的影响

用体外培养的仔猪睾丸间质细胞,研究了白细胞介素－１α（ＩＬ－１α）对间质细胞睾酮分泌的影响。结果,ＩＬ－１α能抑制ｈＣＧ诱导的间质细胞分泌睾酮,其睾酮产生量随ＩＬ－１α剂量的增加及作用时间的延长而下降;用２０Ｕ／ｍＬ和５０Ｕ／ｍＬ的ＩＬ－１α作用４８ｈ,可分别抑制６０％及６５％的睾酮分泌量;但无ｈＣＧ诱导时,５０Ｕ／ｍＬ的ＩＬ－１α可使间质细胞基础睾酮的生成量增加１倍。提示睾丸内ＩＬ－１α可能通过多种途径调节间质细胞睾酮的产生。     

X射线照射对体外培养仔猪睾丸间质细胞增殖和睾酮分泌的影响

通过X射线照射体外培养仔猪睾丸间质细胞(Leydig Cells,LC),检测睾酮分泌及LC增殖情况,了解X射线对雄性睾酮分泌的影响.以3周龄仔猪为研究对象,采用体外培养体系,在hCG诱导下,X射线辐射,测定24 h后LC睾酮分泌量及LC增殖的影响.结果显示,试验常用X射线曝光剂量(43.12～84.86 μGy)曝光一次以及在63.16μGy剂量下照射5 min、15min、30 min对体外培养仔猪睾丸间质增殖有抑制作用,但在曝光剂量43.12～84.86 μGy下LC睾酮分泌量与对照组相比差异不显著,在63.16μGy剂量下照射15 min、30 min睾酮分泌量与对照组相比差异显著(P＜0.05).表明常用X射线剂量曝光一次对睾丸间质细胞增殖有抑制作用,但睾酮分泌量影响不大,但随着照射时间的延长,间质细胞增殖和睾酮分泌显著下降,故在临床使用X射线时应该缩短照射时间,并做好防护.     

睾丸间质细胞线粒体调控睾酮合成的研究进展

睾丸间质细胞(Leydig cells, LCs)的主要功能是合成和分泌睾酮。在睾丸间质细胞内,以胆固醇为原料,位于线粒体外膜上的类固醇合成急性调节蛋白(steroidogenic acute regulatory protein, StAR)促进胆固醇向线粒体内膜转运,在线粒体内膜胆固醇侧链裂解酶(cholesterol side-chain cleavage cytochrome, P450scc)的催化下生成孕烯醇酮,而后通过光面内质网的羟基类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase, 3β-HSD)和转运蛋白(translocator protein, TSPO)的共同作用合成睾酮。因此,睾丸间质细胞合成和分泌睾酮与线粒体密切相关,线粒体结构和功能的完整性直接影响睾酮的生物合成,而位于线粒体上的StAR和P450scc是睾酮合成的关键调控因子。睾酮能够促进雄性生殖器官发育成熟并维持其功能,对促进蛋白质合成(如肌肉、骨骼及生殖器官的蛋白质合成)具有重要意义。近年来,通过维持线粒体结构完整性和改善线粒体氧化损伤、线粒体生物发生等功能进而促进睾酮的合...     

维生素E对绵羊原代睾丸间质细胞睾酮合成的影响

本试验旨在研究维生素E对绵羊原代睾丸间质细胞睾酮合成的影响。选择2月龄杜×寒杂交公羔,屠宰后取睾丸组织。分离绵羊睾丸间质细胞,随机分为4个处理组,每个处理组3皿,培养基内添加不同浓度维生素E(0、40、80、160μg/m L)。培养结束后,测定培养基上清睾酮含量,将细胞裂解测定睾酮合成相关酶3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)、17β-羟基类固醇脱氢酶(17β-HSD)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、17α-羟化酶(CYP17)以及睾酮合成相关基因3β-HSD、17β-HSD、P450scc、CYP17、类固醇合成急性调节蛋白(St AR)基因相对表达量。结果表明:与对照组相比,添加40μg/m L维生素E有提高绵羊睾丸间质细胞睾酮分泌量的趋势(P=0.061),添加40μg/m L维生素E能显著提高P450scc和3β-HSD酶含量(P0.05),P450scc m RNA与3β-HSD m RNA相对表达量也显著提高(P0.05)。     

大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌对奶牛睾丸间质细胞炎症反应和睾酮分泌的影响

探讨不同数量大肠埃希菌(E.coli)和金黄色葡萄球菌(S.aureus)对奶牛睾丸间质细胞(LCs)炎性因子、类固醇合成快速调节蛋白(StAR)以及睾酮(T)分泌的影响。通过体外培养LCs,选取生长状态良好的第3代LCs进行试验。根据E.coli和S.aureus作用数量,试验各分为6组,即用不同数量的E.coli(0、10~4、10~5、10~6、10~7、10~8 CFU/mL)和不同数量的S.aureus(0、10~4、10~5、10~6、10~7、10~8 CFU/mL)感染LCs。通过实时荧光定量PCR检测相关炎性因子和StAR mRNA表达的变化;用牛睾酮(T)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒检测睾酮分泌水平的变化。结果表明,E.coli数量为10~8 CFU/mL和S.aureus数量为10~7 CFU/mL时,IL-6和IL-1βmRNA的表达量最高,与其他组相比较增加极显著(P<0.01);E.coli数量为10~4、10~5、10~6、10~7、10~8 CFU/mL时感染LCs后,StAR mRNA表达量显著低于对照组(P<0.05);S.aureus浓度为10~6、10~7和10~8 CFU/mL时,StAR mRNA的表达量显著低于对照组(P<0.05);分别用E.coli和S.aureus感染LCs 12 h,睾酮分泌量与对照组相比无显著变化(P>0.05)。结果表明,LCs被E.coli和S.aureus感染12 h,能引起LCs的炎症反应,同时抑制StAR mRNA的表达,但对睾酮的分泌无显著影响。     

FSH调节仔猪睾丸支持细胞GDNF表达的信号机制

本研究旨在阐明FSH调节睾丸支持细胞GDNF表达的信号机制.以体外培养的仔猪睾丸支持细胞为试验材料,通过加入不同信号通路因子,采用RT-PCR和Western blot等方法研究了FSH对支持细胞GDNF表达的调节.结果:(1)FSH(50 ng· mL-1)处理支持细胞,可迅速激活MEK激酶,随着FSH刺激时间的延长,ERKl/2活性逐渐升高(0～30 min);(2)dbcAMP(100 μmol·L-1)同样能迅速激活MEK激酶,诱导GDNF蛋白、mRNA的表达;ERK1/2活性随dbcAMP刺激时间的延长逐渐升高(0～30 min);(3)加入MEK1/2的抑制剂U0126和PKA的抑制剂H89,则显著抑制了FSH对GDNF的激活作用,GDNF蛋白、mRNA和活性明显下降;(4)加入PKA的抑制剂H89(10 μmol·L-1),则明显抑制了FSH诱导的ERK1/2磷酸化的激活作用.结果表明,FSH可通过cAMP-PKA激活ERK级联调节支持细胞GDNF的表达.     

Constant Light Exposure Causes Dissociation in Gonadotrophin Secretion and Inhibits Partially Neuroendocrine Differentiation of Leydig Cells in Adult Rats

The objective of this work was to study the changes that occur in the Leydig cells of rats exposed to continuous light. The laboratory rat is considered a non-photoperiodic species because exposure to short photoperiod has little or no effect on the reproductive status. However, exposure of adult female rats to constant light induces polycystic ovaries, indicating that extreme changes in the photoperiod affect the reproductive function seriously. Adult male rats were placed under continuous light conditions for a duration of 15 weeks. After this period, the animals were killed and testicles were dissected and processed by routine histologic protocols. Follicle-stimulating hormone (FSH) and luteinizing hormone (LH) serum levels were determined by radioimmunoassay (RIA). The visualization of antigens was achieved by the streptavidin-peroxidase immunohistochemical method. Antibodies against chromogranin A, S-100 protein, P substance, synaptofisin, neurofilament protein-200, gliofibrillary acidic protein and neurone-specific enolase were used. The mean LH serum concentration was significantly lower, while the mean FSH level was significantly higher in treated animals. The expression of S-100, NSE, CrA, SP and SYN was significantly lower in treated animals. In conclusion, the constant light exposure acting directly at the pituitary level decreases LH secretion. The increased FSH secretion may be due to a partial reduction of the negative androgen feedback in the pituitary gland. Moreover, the constant light exposure affects the expression of some immunomarkers in Leydig cells, possibly because of the changes found in the gonadotrophin level and feedback mechanism.     

牛膝多糖对仔猪肠上皮细胞免疫应激的调控及其作用机制

本试验旨在考察牛膝多糖(ABPS)对脂多糖(LPS)免疫应激下仔猪空肠上皮细胞(IPEC-J2)促炎细胞因子分泌和表达的影响,并探讨ABPS调控IPEC-J2免疫应激可能的作用机制。选用4~5代的IPEC-J2,培养基中分别添加0(对照)、300、600、900、1 200μg/m L ABPS和10μg/m L LPS,每组12个重复,每孔为1个重复。培养72 h后,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测ABPS对促炎细胞因子白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)分泌量的影响,采用实时定量PCR测定Toll样受体4(TLR4)、核转录因子κB(NF-κB)的mRNA表达量,采用Western blot法测定TLR4、NF-κB、磷酸化核转录因子κB(p-NF-κB)蛋白表达量。结果显示:与对照组相比,300、600、900和1 200μg/m L ABPS组能显著减少IL-1、IL-6、IL-8和TNF-α的分泌量(P0.05);300μg/m L ABPS组能显著减少p-NF-κB蛋白的表达量(P0.05),900和1 200μg/m L ABPS组能显著减少TLR4、NF-κB的mRNA和NF-κB蛋白的表达量(P0.05)。由此可见,ABPS通过TLR4/NF-κB信号转导途径来调控促炎细胞因子的分泌,从而缓解免疫应激,低浓度ABPS通过直接抑制NF-κB磷酸化过程来降低免疫应激,高浓度ABPS则是通过抑制TLR4 mRNA、NF-κB mRNA和NF-κB蛋白的表达量来缓解免疫应激。     

仔猪睾丸组织c-jun mRNA表达量与其血浆睾酮水平关系研究

对不同时期仔猪血浆睾酮含量和睾丸组织c-jun mRNA表达量进行了检测,以初步推测c-jun mRNA表达与睾酮分泌的关系,为进一步体外研究原癌基因c-jun对睾酮分泌的影响奠定基础。试验选择1、3、5周龄仔猪作为研究对象,利用睾酮ELISA检测试剂盒检测血浆中睾酮含量;采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测睾丸组织c-jun mRNA的表达。结果表明,仔猪血浆睾酮水平随周龄增加而显著升高,其中3周龄时睾酮含量最高;c-jun在各周龄睾丸组织中均有表达,其中3周龄仔猪睾丸组织c-jun mRNA表达量最高。因此,仔猪睾酮分泌与c-jun mRNA表达量可能存在相关性。