新疆乌鲁木齐周边地区犬布鲁菌病血清学调查

<正>布鲁菌病是由布鲁菌引起的一种严重的人兽共患病。布鲁菌属分为6个种19个生物型,其中羊种布鲁菌(B.melitensi),牛种布鲁菌(B.abortus),猪种布鲁菌(B.suis),犬种布鲁菌(B.canis)均可以感染犬。乌鲁木齐地区近年来宠物业发展较快,但对布病的流行病学调查和病原学研究还少见报道。对2013-2014年来自新疆乌鲁木齐地区动物医院收治     

不同种型布鲁菌标准株的比较基因组学研究

探究不同种型布鲁菌标准株的基因组构成差异。通过布鲁菌全基因组DNA芯片技术对19株不同种型布鲁菌标准株进行比较基因组学研究。结果显示：19株不同种型布鲁菌标准株之间存在大量缺失基因,同时发现一些基因以多拷贝形式存在。缺失基因的功能大致分为4类：信息储存和传递;胞内活动处理;营养代谢、功能未知或仅了解部分功能,共鉴定到这类基因211个。深入认识了19株不同种型布鲁茵标准株基因组组成上的差异,为我们进一步认识不同种以及亚型在毒力以及宿主特殊性提供了依据。大量缺失基因在19株布鲁菌标准株出现,构成了布鲁菌标准株不同种以及亚型之间的遗传学基础。     

野生动物感染布鲁菌的研究进展

布鲁菌病是一种分布广泛的重要人兽共患病,多年来已经证实许多种类的陆地野生动物和海洋哺乳动物存在布鲁菌感染.目前已经鉴定了9种布鲁菌,能感染野生动物并呈现临床病症的致病性布鲁菌种包括羊种布鲁菌(B.melitensis)、猪种布鲁菌(B.suis)、牛种布鲁菌(B.abortus)、犬种布鲁菌(B.canis)、沙林鼠布鲁菌(B.neotomae)等5种,可感染野牛、鹿、羚羊、野兔、海豚和鲸等动物,并具有或潜在具有传播给人类的能力.论文重点对野牛、野羊、野猪、野鹿、野鼠、狐狸、骆驼、北极熊、海豚和海豹等动物布鲁菌感染状况的研究进展进行综述,表明这些动物均能易感并表现不同的布鲁菌病临床病症.野生动物布鲁菌病的发生与家畜和人的布鲁菌病防控密切相关,必须予以关注.     

布鲁菌脂多糖的研究进展

正布鲁菌(Brucella)为革兰氏阴性胞内寄生菌,根据宿主偏爱性分为10个种~[1],除经典的羊种、牛种、猪种、犬种、绵羊附睾种与沙林鼠种外,还包括新发现的从海洋哺乳动物分离到的鳍种和鲸种布鲁菌,以及从红狐狸和土壤中分离到的田鼠型布鲁菌和从乳房移植物中分离到的湖浪布鲁菌~[2]。布鲁菌可以感染包括人在内的多种哺乳动物引起布鲁菌病,对畜牧业生产、人类健康和公共卫生安全危害严重。在感染细胞或机体内增殖能力和持续生存时间是     

羊布鲁氏菌病的正确防控

羊布鲁氏菌病是一种人畜共患病,是一个需要重点预防控制的疫病.本文分析了羊布鲁氏菌病的病原学,总结了近代防控本病的成功经验,旨在纠正兽医和养殖户的认识误区.1病原学羊布鲁氏菌病的致病原是布鲁氏杆菌(Brucella),革兰氏阴性,绝对需氧菌(非抗酸性),无芽孢,无荚膜,无鞭毛,不能运动,寄生于动物体细胞内.布鲁氏菌属包括6个种19个型,其中羊种布鲁氏杆菌有3个型、绵羊附睾种布鲁氏杆菌有1个型,羊种布鲁氏杆菌致病力最强且人畜均易感,所以羊布鲁氏菌病属于人畜共患病.     

布鲁菌进化和分类学研究进展

布鲁菌属革兰氏阴性兼性胞内寄生菌,能感染多种宿主动物和人。该属可分为6个典型种,包括羊种、牛种、猪种、沙林鼠种、绵羊附睾种以及犬种布鲁菌等。此分类是基于其致病性以及宿主偏好性的差异划分。尽管6个种通过传统表型试验能区分,但布鲁菌种内采用DNA-DNA杂交证明DNA同源性高度一致（相似性大于90%）。因此有人提议布鲁菌由单一种组成,即布鲁菌属中只有羊种布鲁菌,其他种都是羊种菌的生物亚型之一。然而基于其他分子技术的基因分型表明其DNA多态性表现明显,说明目前对这个种的分型还是比较准确。而最近分离的海洋种布鲁氏菌分离株（鳍型和鲸型）采用传统分型标准和一些特异的分子标记也证明这种分型比较正确。本文对目前布鲁菌种属进化和分类学进行综述,希望对研究其进化和分类有所帮助。     

布鲁菌分型方法研究进展

<正>布鲁菌病是一种呈世界性流行并严重影响畜牧业发展和人类公共卫生安全的人兽共患病。布鲁菌属细菌是布鲁菌病的病原菌。目前已发现的布鲁菌有10个种23个亚型。建立快速、可靠的布鲁菌分型技术对于布鲁菌病的追根溯源、判断毒力、免疫力、遗传变异、流行病学特征及其防控具有重大意义。目前用于布鲁菌属细菌分型的方法主要分为生物分型和分子分型两类。传统的生物分型方法操作繁琐,周期长,使用活菌试验,生物安全风险较大[1]。另外,由于菌株遗     

3株非典型羊源布鲁菌的基因分型研究

[目的]探讨采用基因分型方法对非典型布鲁菌鉴定的实用性,为非典型菌株的鉴别提供参考。[方法]采用常规鉴定方法和VITEK 2.0全自动细菌鉴定分析系统对菌株进行初步鉴定,利用AMOS-PCR进行种型鉴定,应用多位点可变数目串联重复序列分析方法(MLVA)确定菌株的基因型。[结果]常规鉴定结果显示试验菌株为疑似布鲁菌;VITEK 2.0全自动细菌鉴定系统显示3株试验菌株均为布鲁菌;AMOS-PCR扩增表明试验菌株均为羊种菌,MLVA聚类分析表明试验菌株与羊种2型布鲁菌紧密地聚为一类,属东地中海基因型,并在Panel 2B中发现了新的基因型(4-4-3-7-5),命名为CN2B-45。[结论]MLVA基因分型方法对非典型布鲁菌具有极高的分辨力,是非典型布鲁菌分型鉴别的最佳策略。     

布鲁菌分子标记菌壳株的构建与鉴定

旨在构建一种安全、高效的犬布鲁菌分子标记疫苗株。本试验将温控裂解部件(TLC)插入布鲁菌自杀质粒pBK-CMV-SacB-ΔB0419中,构建温控裂解型自杀质粒pBK-CMV-SacB-ΔB0419-TLC;通过电转化方式转入犬布鲁菌RM6/66感受态中,经卡那抗性和蔗糖培养基的正、负向筛选,将TLC片段定点插入布鲁菌B0419基因中,获得犬布鲁菌分子标记菌壳株。采用PCR法对连续30代次的菌株进行鉴定,结果显示裂解E基因和靶向插入位点区域(B0419基因)并未出现丢失和回复突变现象,表明该菌壳株具有良好的遗传稳定性。该菌壳株在培养至D_(600)值为0.6时,经42℃诱导60 h后,可获得裂解率达100%的犬布鲁菌菌壳;经超薄切片和染色处理后,在透射电镜观察下可见形态完整的空心结构,其内容物明显减少。本试验结合细菌菌壳技术与同源重组技术,成功构建了具有分子标记特征的犬布鲁菌菌壳株,为新型布鲁菌疫苗的研制提供策略。     

流产布鲁菌LysR家族转录调控子LTTR8缺失株的构建及其生物学特性分析

布鲁菌是一种重要的人畜共患病病原,兼性胞内寄生,无典型毒力因子,毒力相关基因的研究对阐明布鲁菌持续感染的机制具有重要意义。本研究以流产布鲁菌S2308为亲本株,通过同源重组的方法,构建流产布鲁菌LysR家族转录调控子基因bab＿RS24670缺失株ΔlttR8,基于广宿主质粒pBBR1MCS构建成互补株ΔlttR8-Com。免疫印迹试验表明：ΔlttR8为光滑型菌株;体外培养分析发现lttR8缺失不影响布鲁菌的生长;细胞感染试验发现lttR8缺失不影响布鲁菌黏附、入侵细胞和胞内存活的能力。耐受性试验分析发现：lttR8缺失不影响布鲁菌对过氧化氢（H2O2）和多粘菌素B(polymyxin B)的敏感性。小鼠感染试验分析发现lttR8缺失显著减弱流产布鲁菌的毒力。综上所述,本研究发现一个新的与流产布鲁菌致病性相关的转录调控子,为布鲁菌致病机制研究提供参考。     

布鲁菌Cycling探针荧光定量PCR检测方法的建立

根据布鲁菌BCSP31基因序列设计布鲁菌通用检测引物和探针,建立了布鲁菌Cycling探针荧光定量PCR检测方法。以构建的含BCSP31基因的质粒标准品10倍递进稀释为模板检测其敏感性,结果显示,本方法能检测约10个拷贝的阳性质粒,且标准曲线的线性关系良好。用本方法检测5株不同种的布鲁菌以及猪大肠杆菌K99、巴氏杆菌C48-1、猪链球菌ST171、绿脓杆菌等4株对照菌。结果显示,5株不同种的布鲁菌均出现典型的"S"型扩增曲线,4株对照菌40个循环内均无CT值出现。用本方法和B4/B5-PCR方法对来自布鲁菌病流行地区3个不同牛场的40份血样、奶样和血清样进行平行检测。结果显示,本方法和B4/B5-PCR方法的结果符合率为80.0%。B4/B5-PCR检测为阳性的27份样品经本方法检测均为阳性;B4/B5-PCR检测为阴性的13份样本,经本方法检测,其中8份呈阳性,5份为阴性。本方法的敏感性明显高于B4/B5-PCR方法。试验表明,所建立的Cycling探针荧光定量PCR方法具有敏感、特异、稳定等特点,可用于布鲁菌感染的快速检测。     

布鲁菌免疫分子研究进展

布鲁菌病是布鲁菌引起的人兽共患传染病,包括7种21型,其中感染人的主要有牛、羊、猪布鲁菌3种,其免疫涉及体液免疫和细胞免疫.在布鲁菌的免疫过程中,先天性免疫应答主要通过补体、自然杀伤细胞、巨噬细胞、细胞因子等的参与.获得性免疫应答中,CD4 、CD8 、γβT细胞起重要作用.布鲁菌重组亚单位疫苗是近年研究的热点,而且发现的免疫分子也很多.文章围绕布鲁菌免疫机理、免疫相关分子进行探讨,为筛选疫苗候选分子奠定基础.     

呼和浩特地区布鲁菌OMP25基因的克隆、序列分析

为了扩增呼和浩特地区布鲁菌OMP25基因的序列,试验参照GenBank上已登录的布鲁菌外膜蛋白OMP25的基因序列设计1对引物,采用聚合酶链式反应(PCR)技术从灭活的羊种布鲁菌中扩增出OMP25基因片段,将其克隆到pMD19-T载体后测序并应用计算机软件进行分析。结果表明:所测定的序列与羊种布鲁菌(B.melitensis)U33003 OMP25基因的核苷酸同源性为99.5%,推导出的氨基酸同源性为98.1%;与绵羊种布鲁菌(B.ovis)U33004 OMP25基因的核苷酸同源性为98.7%,氨基酸同源性为97.0%。     

绵羊种布鲁菌致病机制与防控研究进展

布鲁菌病(Brucellosis)是一种高度流行的人畜共患传染病,可造成巨大的经济损失,严重制约了当今畜牧业的发展并对人类健康构成了严重威胁。绵羊种布鲁菌病是由绵羊种布鲁菌(Brucella ovis,B.ovis)引起的一种以绵羊生殖系统功能障碍和怀孕绵羊流产为特征的慢性传染性疾病。目前,对于绵羊种布鲁菌的胞内寄生机制和感染机制尚不清楚,现将从病原学、流行病学、致病机制和疾病防控等方面对绵羊种布鲁菌病的研究进展进行概述,为后期挖掘绵羊种布鲁菌的致病机理和与其相关的研究奠定一定的理论基础。     

基于VNTR技术对布鲁菌的基因多态性研究

应用15个VNTR位点对我国保存的19株布鲁菌标准株和4株减毒活疫苗以及松源地区10株临床分离株进行基因多态性研究。采用15个VNTR位点对33株布鲁菌进行PCR扩增,产物进行琼脂糖电泳,根据产物大小计算序列重复数,据此分析菌株的遗传多态性。建立了15个VNTR位点的琼脂糖凝胶电泳及拷贝数计算分析方法,应用该技术分析了33株布鲁菌的遗传多态性。结果表明这15个位点能较好地区分不同种型或亚型以及减毒活疫苗株,同时也为临床株的分型提供了依据。     

呼和浩特地区牛羊布鲁菌流行株种及生物型鉴定

应用常规细菌学方法,对呼和浩特部分地区疑似布鲁菌病的牛、羊流产胎儿病料进行了布鲁菌分离,共分离到4株布鲁菌.进一步根据细菌形态、培养特性、生化特性以及平板凝集试验等对分离到的细菌进行种型鉴定.结果表明,其中3株为羊种布鲁菌生物3型,1株为牛种布鲁菌生物3型.本研究结果为内蒙古地区布鲁菌病的防控奠定了病原学基础.     

新疆布鲁菌病发生情况及变化趋势

为了掌握布鲁菌病在新疆地区的发生情况及变化趋势,基于对该地区布鲁菌病监测数据的收集和整理,对2005—2011年新疆地区14个地(州、市),96个县(市、区)上报的布鲁菌病监测数据进行了初步的分析,并对不同牲畜、不同场点及地区分布的布鲁菌病发生及流行情况进行了比较。结果表明,2005—2011年牛和羊布鲁菌病平均阳性率是0.66%和0.61%,牛布鲁菌病规模场和行政村平均阳性率是0.37%和0.77%,羊布鲁菌病规模场和行政村平均阳性率是0.77%和0.52%;牛布鲁菌病阳性率以塔城地区最高,阳性率为2.91%,羊布鲁菌病阳性率以乌鲁木齐市最高,阳性率为14.67%。     

Development and Primary Application of Hybridoma Cell Lines Secreting Monocional Antibodies Against LPS Antigen of B.Melitensis

研制抗羊种布鲁菌脂多糖抗原的单克隆抗体,并应用其建立检测布病的双夹心ELISA方法.本研究采用热酚水法提纯羊种布鲁菌(16M菌株)的脂多糖抗原,并经SDS-PAGE鉴定.用脂多糖和灭活的羊种布鲁菌16M作为免疫抗原,交替免疫6～8周龄BAIB/c雌鼠,第1次免疫用羊种布鲁菌标准菌16M全菌加等量弗氏完全佐剂;第2次免疫用脂多糖加等量弗氏不完全佐剂.将脂多糖作为包被抗原建立间接ELISA方法,筛选针对抗羊种布鲁菌(16M菌株)脂多糖的单克隆抗体杂交瘤细胞株.筛选出3株能稳定分泌抗羊种布鲁菌脂多糖单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为5H3、6B8和3H7,细胞培养上清的ELISA效价在1:1 000～1:5 000,小鼠腹水单克隆抗体ELISA效价在1:10 000～1:160 000;抗体亚类鉴定表明:5H3、6B8属于IgM亚类,3H7属于IgG3亚类;特异性试验结果显示:3株杂交瘤细胞分泌的抗体不与大肠杆菌O157裂解抗原、鸡白痢沙门氏菌裂解抗原、鸭源鸡杆菌脂多糖抗原以及福氏志贺菌裂解抗原反应,仅与灭活的羊种布鲁菌(16M)发生反应.布鲁菌虎红平板凝集试验和试管凝集试验检测结果显示,获得的单抗可与标准检测抗原形成明显的颗粒凝集物和伞状凝集物.利用所建立的单克隆抗体细胞株,建立了一种检测布鲁菌的双夹心间接ELISA方法,并进行了特异性和敏感性检测.对模拟样品和临床样品进行检测,准确性均很高.     

人感染布氏杆菌病的原因及预防措施

正布氏杆菌病是由布氏杆菌引起的人畜共患的传染病。其临床特点为长期发热、多汗,关节痛、睾丸炎、肝脾肿大等,病菌为革兰阴性短小杆菌,按生化和血清学反应分为马尔他布鲁菌(羊型)、流产布鲁菌(牛型),猪布鲁菌(猪型),另外还有森林鼠型、绵羊附睾型和犬型,感染人者主要为羊、牛和猪型。其致病力以羊型最强,次为猪型,牛型最弱。传染源是患病的羊、牛、猪,病     

布鲁菌病研究进展

布鲁菌病是目前世界上流行最广、危害最大的人兽共患病之一,在全世界170多个国家和地区有人、畜布鲁菌病存在和流行.我国25个省(市、区)有人、畜布鲁菌病存在和流行.随着畜牧业的快速发展,布鲁菌病在多数疫区明显有回升趋势.2005年全国新发病19 664人,发病率为1.504/10万,超过历史最高记录.布鲁菌是细胞内寄生的革兰氏阴性菌,主要引起人的波状热和慢性感染以及动物睾丸炎和流产等,直接危害公共安全,造成严重的经济损失.近年来从多种海洋哺乳动物(海豹、海豚、鲸等)中也分离出布鲁菌.通过DNA同源性比较,发现海洋与陆地哺乳动物布鲁菌DNA的同源性高达90%以上.随着分子生物学的发展,对布鲁菌分子结构的研究不断获得新的发现,为进一步认识和控制布鲁菌病提供了可能.文章从布鲁菌病流行的历史与现状、布鲁菌的抗原分子生物特性、布鲁菌病的检测方法和布鲁菌病疫苗的现状等方面对布鲁菌病的研究进展做了介绍.