宜昌部分地区高致病性猪蓝耳病RT-PCR检测

从宜昌部分地区猪散养户中随机抽取部分猪血样及疑似高致病性猪蓝耳病病例血样共计181份,进行高致病性猪蓝耳病RT-PCR的检测,结果显示23份为阳性。试验初步证明,随机抽取的181头猪中有部分猪感染高致病性猪蓝耳病病原。     

高致病性猪蓝耳病案例浅析

2020年8月初,湖南省桃江县某镇养殖户60kg左右架子猪48头出现体温升高、厌食或不食,部分出现顽固性腹泻,经自行治疗,出现死亡.笔者结合临床症状、病理剖检和病料送检,综合诊断为高致病性猪蓝耳病.     

高致病性猪蓝耳病的实验室诊断

采用猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2基因RT-PCR检测方法和猪繁殖与呼吸综合征病毒变异毒株试剂盒检测方法,对六盘水市钟山区某猪场发生的一起疑似高致病性猪蓝耳病进行实验室诊断,确诊为由猪繁殖与呼吸综合征病毒变异毒株引起的高致病性猪蓝耳病。     

高致病性猪蓝耳病防控

随着人们生活方式的变化,养猪户也变得越来越多,不仅能为其带来更多的经济收入,也可提高其生活质量和水平。调查数据显示,很多养殖户在养猪中通常会因很多因素致使猪群感染疾病,倘若不能及时处理,势必会对自身带来较为严重的经济损失,甚至会加大疫病的扩散。该文主要对高致病性猪蓝耳病防控新理念展开分析,并提出一些可行的对策。     

高致病性猪蓝耳病的诊断与防控

高致病性猪蓝耳病(PRRS)是由猪繁殖与呼吸道综合征(俗称蓝耳病)病毒所引起的.属于动脉炎病毒科动脉炎病毒属.该病是以怀孕母猪流产、早产、死胎和木乃伊胎等繁殖障碍、仔猪呼吸困难、高死亡率和育肥猪呼吸异常为特征的传染病.该病具有传播快、发病率和死亡率高等特点,目前尚无有效药物治疗,疫苗免疫和采取综合防控措施是预防和控制该痛最主要的手段.从病原学、流行特点、临床症状、剖检变化等几个方面,对高致病性猪蓝耳病的发病特点及综合防控措施进行了探讨,以供同行参考.     

高致病性猪蓝耳病的防控研究

高致病性猪蓝耳病主要是因为猪繁殖以及呼吸系统产生的综合病症进而变异成为毒株从而产生出的一种急性、高传染性、高致病性的疫病,并且主要是以母猪繁殖障碍和仔猪、育肥猪为主要特点生物严重呼吸道病症,还会引发其他病原的感染。相关工作人员要针对高致病性猪蓝耳病的主要病症、病理变化、分子生物学诊断以及防控措施多方面进行研究,为下一步生产提供更具体的指导作用。     

猪高致病性蓝耳病的诊断及防治

我国的中南、华东地区自2006年夏季开始发生大范围猪高致病性蓝耳病,然后向全国范围延伸,猪高致病性蓝耳病的临床症状主要是呼吸急促、皮肤发红并且体温升高,解剖病猪可以发现病猪有内脏出血或者肺炎等症状。高致病性蓝耳病的发病率和死亡率都很高,并且很难治愈,给我国的养殖户造成了很大的经济损失。本文就猪的高致病性蓝耳病的诊断与防治展开探讨。     

高致病性猪蓝耳病防治的现状和对策

高致病性猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株引起的一种急性高致死性传染病.仔猪发病率可达100％,死亡率可达50％以上,母猪流产率可达30％以上,育肥猪也可发病死亡.该病传播性强、防治难度大,严重影响着我国畜牧养殖业的发展.本文通过实际研究,对高致病性猪蓝耳病的流行特点、防治现状进行具体分析,进一步提出科学防治对策...     

高致病性猪蓝耳病的防治

高致病性猪蓝耳病又被称之为高热病,主要是由呼吸综合征、繁殖变异株所引起的高致病性的传染性疾病。该病的主要临床表现为免疫力降低、母猪繁殖障碍、高死亡率、发热和呼吸困难等。高致病性猪蓝耳病混合与其他传染性疾病和寄生虫病混合感染时,还会导致猪群发生病原性感染。     

高致病性猪蓝耳病的预防

高致病性猪蓝耳病对养猪业的影响较大。笔者介绍了高致病性猪蓝耳病的病原、传播途径、临床症状、病理变化、诊断方法及预防高致病性猪蓝耳病的几点措施。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征的RT-PCR诊断及病理分析

根据高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV)的Nsp2基因部分缺失的特征,设计合成1对特异性引物,对长春某猪场4份疑似HP-PRRSV感染病死猪的淋巴结、脾脏、肺脏等病料进行RT-PCR检测,结果均扩增出226 bp的特异片段,与预想结果一致。取病死猪淋巴结、肺脏、脾脏等组织,用10%中性福尔马林固定,石蜡包埋,HE染色,进行病理组织学分析,结果显示,淋巴结和脾脏中淋巴细胞严重坏死,肺脏呈弥漫性间质性肺炎病变,肝脏、肾脏、脑等器官实质细胞均出现不同程度的损伤。     

一步法RT—PCR检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的方法建立及应用

根据GeneBank公布的猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSV）美洲型毒株VR-2332序列设计了一对特异性引物P1／P2,扩增片段为508bp,从而建立了检测PRRSV的一步法RT—PCR蛤测方法,特异性试验表明,该引物均不能扩增其它常见的与繁殖障碍有关的病毒基因。敏感性实验表明,该引物可以检测到10^-5TCID50的病毒含量。利用该方法对青海某猪场中20份临床上疑似PRRS的组织进行检测,其中16份样品呈PRRSV阳性结果,阳性率为80％,表明建立的该方法完全可以快速检测组织中的PRRSV。     

猪繁殖与呼吸综合症病毒的RT-PCR快速诊断技术研究

根据猪繁殖与呼吸综合症病毒（PRRSV）的N基因序列设计了一对引物,建立诊断PRRSV的RT—PCR技术。使用该方法对山东某些地区疑似为PRRS的28份送检样品进行检测,结果4份为阳性,证实山东存在PRRSV的流行。RT—PCR方法的建立为PRRS的快速、准确诊断以及进行分子流行病学的调查提供了新的技术手段。     

猪繁殖与呼吸综合症病毒的RT-PCR快速诊断技术研究

根据猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)的N基因序列设计了一对引物,建立诊断PRRSV的RT-PCR技术。使用该方法对山东某些地区疑似为PRRS的28份送检样品进行检测,结果4份为阳性,证实山东存在PRRSV的流行。RT-PCR方法的建立为PRRS的快速、准确诊断以及进行分子流行病学的调查提供了新的技术手段。     

高致病性与低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重RT-PCR检测方法的建立及应用

为建立高致病性与低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP/LP-PRRSV)快速鉴别诊断方法,本研究根据GenBank已登录的HP-PRRSV与LP-PRRSV的Nsp2基因序列,分别设计了特异性的上游引物(HP-Upper-p1/LP-Upper-p2) 和共用下游引物(Co-Lower-p3)。以HP-PRRSV和LP-PRRSV混合物总RNA为反转录模板,建立了HP-PRRSV和LP-PRRSV的二重RT-PCR检测方法;并进行了特异性、敏感性和重复性试验;利用所建立的检测方法对临床疑似样品进行了检测。结果显示,本试验成功建立了HP-PRRSV和LP-PRRSV二重RT-PCR检测方法,该方法灵敏度高,最低检出限均为100拷贝/μL;重复性好,特异性强,可特异性地扩增HP-PRRSV细胞培养物和LP-PRRSV疫苗毒,但对Marc-145细胞和其他8种病原对照扩增不出任何条带;自25份临床疑似PRRSV感染病料中共检测出了21份PRRSV阳性样品,其中HP-PRRSV阳性样品共计20份,LP-PRRSV阳性样品4份。结果表明,本研究成功建立了HP-PRRSV和LP-PRRSV二重RT-PCR检测方法,可适用于高致病性与低致病性猪繁殖与呼吸综合征的快速鉴别诊断。     

高致病性猪蓝耳病与经典猪蓝耳病二重RT—PCR检测方法的建立及应用

高致病性猪蓝耳病病毒（HP—PRRSV）（JX-EF112445）核苷酸序列与经典猪蓝耳病病毒（LP-PRRSV）（U87392）核苷酸序列,设计两对特异性引物,建立了HP—PRRSV和LP—PRRSV二重RT-PCR快速检测体系。应用此体系成功对1498份组织／血清进行了准确检测。同时,分别与商品化的HP-PRRSVRT-PCR检测试剂盒和LP—PRRSV检测试剂盒进行比对试验,结果吻合率达100％,该方法特异性好、敏感性高、克服了对两种病原进行分别检测所带来的耗时、耗试剂、增加污染几率等风险,为蓝耳病的快速诊断和流行病学调查奠定了基础。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量RT-PCR和RT-LAMP快速检测方法的建立

猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）是世界各地重要猪病毒性病原之一,每年给养猪业造成重大损失。本试验建立了应用TaqMan-LNA的荧光定量RT-PCR和逆转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)2种PRRSV检测方法。结果表明荧光定量RT-PCR和RT-LAMP检测下限分别为10²和10¹ 拷贝数/μL,都具有良好的特异性。临床样本检测结果同样表明2种方法都具有良好的特异性和灵敏度。本试验所建立的TaqMan-LNA荧光定量RT-PCR和RT-LAMP可有效的应用于PRRSV的检测。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒TaqMan-MGB实时荧光定量RT-PCR方法的建立及应用

为了快速、准确地检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRSV),本研究根据PRRSV基因序列设计特异性引物和探针,建立了一种可同时检测PRRSV经典毒株、高致病性变异毒株以及近几年中国新出现的NADC30-like毒株的TaqMan-MGB实时荧光定量方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行验证,同时用建立的实时荧光定量方法与常规PCR方法对临床收集的120份疑似PRRSV样品进行检测。结果表明,该方法特异性良好,对PRRSV的经典毒株、高致病性变异毒株及NADC30-like毒株均有良好的扩增,但对猪瘟病毒(CSFV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(RV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)和猪圆环病毒2型(PCV2)的检测结果均为阴性,无交叉反应;模板浓度在101～108拷贝/μL范围内具有良好的线性关系,标准曲线结果显示其扩增的相关系数为0.9999,扩增效率为93%;敏感性高,约是常规PCR方法的100倍,最低可以检测到101拷贝/μL的模板;重复性好,批内和批间重复性试验变异系数分别为0.17%～0.90%和0.65%～2.34%;用本研究所建立的实时荧光定量检测方法对120份临床样品进行检测,PRRSV阳性检出率为59.2%(71/120),而常规PCR方法的PRRSV阳性检出率为44.2%(53/120)。该方法的建立为PRRSV的实验室诊断、流行病学调查,以及预防和控制中国PRRSV的流行提供了快速、准确的检测手段。     

Establishment of a Duplex Real-time RT-PCR Assay for the Differential Detection of Nipha Virus and Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus

To establish a rapid,sensitive and specific assay for the differential detection of Nipah virus (NiV) and highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus (HP-PRRSV),a duplex Real-time RT-PCR was developed with specific primers and probes targeting to the special sequences of NiV M gene and HP-PRRSV nsp2 gene by optimization of reaction conditions.The performance of the assay was linear ranging from 4.6×10¹ to 4.6×10⁷ copies/μL for RNA standard control of NiV M (NiV-M-RNA) and from 4.1×10¹ to 4.1×10⁸ copies/μL for RNA standard control of HP-PRRSV nsp2 (HP-PRRSV-nsp2-RNA),and detection limits of the assay was 46 copies for the NiV-M-RNA and 4.1 copies for the HP-PRRSV-nsp2-RNA,respectively.The coefficients of variation (CVs) of both inter-assay and intra-assay repeatability were less than 2.0%,showing good repeatability.The assay was able to specifically detect NiV and HP-PRRSV simultaneously without cross-reaction with classical swine fever virus (CSFV),porcine epidemic diarrhea virus (PEDV),swine influenza virus (SIV),porcine parvovirus (PPV),pseudorabies virus (PRV) and porcine circovirus type 2 (PCV2).Of the 236 samples from pigs for both NiV and HP-PRRSV detection by the established assay,all the samples were negative for NiV,8 samples were HP-PRRSV positive.In conclusion,this assay offers a useful approach for the differential detection of NiV and HP-PRRSV in clinical specimens from the pigs.