罗非鱼湖病毒检测技术研究

罗非鱼是全球第二大重要养殖鱼类,也是我国重要的养殖和出口水产品。主要介绍了罗非鱼湖病毒的诊断技术,以期为有效防控该病毒的传播提供借鉴。     

罗非鱼湖病毒对吉富罗非鱼和E-11细胞的感染

为研究罗非鱼湖病毒在吉富罗非鱼体内和敏感细胞E-11中的感染特性,实验首先从人工感染罗非鱼湖病毒的吉富罗非鱼脾脏中获得罗非鱼湖病毒第4片段基因组,其cDNA全长1 250 bp,开放读码框长度为1 065 bp,编码354个氨基酸。通过进化树分析,该蛋白是罗非鱼湖病毒血凝素—酯酶融合蛋白(HEF)。随后通过在大肠杆菌大量表达和提纯GST融合HEF蛋白,免疫新西兰大白兔,制备了兔抗TiLV-HEF多克隆抗体。ELISA结果显示获得的抗血清效价高于1∶51 200,并且获得的抗体可以特异性识别病毒的TiLV-HEF蛋白。人工感染实验结果显示,TiLV的感染造成鱼体表面溃疡、全身性出血以及眼晶状体混浊等症状。H.E染色结果显示,肝脏形成合胞体,脾脏中含铁血黄素增加和部分细胞空泡变性。头肾出现淋巴细胞坏死,体肾蛋白质沉淀和肾小球坏死等病理症状。Western blot和免疫组织化学结果显示该病毒在所有组织中均有分布,其中脾脏、头肾和鳃中的病毒丰度高于肝脏、体肾和脑组织。通过细胞间接免疫荧光实验,发现TiLV感染E-11细胞后,HEF蛋白在细胞质中。TiLV可以通过感染吉富罗非鱼幼鱼的肝脏、脾脏...     

罗非鱼湖病毒核蛋白的克隆表达、抗体制备及其组织分布

近年来罗非鱼湖病毒(TiLV)在多个国家流行,对世界罗非鱼养殖业造成严重威胁。中国是罗非鱼第一养殖大国,尽管我国大陆还没有TiLV的正式报道,鉴于吉富罗非鱼是我国重要的罗非鱼养殖品种,其对TiLV的感染特性研究具有重要意义。本实验采用TiLV对吉富罗非鱼进行人工感染,随后在肝脏组织中克隆和测定了TiLV第6片段基因。罗非鱼湖病毒第6片段基因cDNA全长1 044 bp,开放读码框(ORF)为954 bp,编码317个氨基酸,预测分子量为36.38 ku;5′非编码区(NCR)为19 bp,3′非编码区(NCR)为972 bp。系统进化树分析表明该蛋白属于TiLV核蛋白(NP)。随后在大肠杆菌中表达和提纯了GST融合NP蛋白,在新西兰大白兔上制备了多克隆抗体。通过酶联免疫吸附实验(ELISA)检测抗体效价为1∶51 200,且抗体可特异性识别感染组织中的病毒NP蛋白。对吉富罗非鱼不同组织进行苏木精—伊红(H.E)染色观察,发现肝脏组织坏死并形成合胞体,脾脏部分细胞出现空泡、坏死,含铁血黄素增多,头肾细胞坏死,鳃丝上皮细胞明显解离脱落,鳃小片黏连,脑组织细胞肿大。通过蛋白印迹法(WB)和免...     

罗非鱼湖病毒微滴式逆转录数字PCR检测方法的建立

建立一种敏感性高、特异性强、重复性好的罗非鱼湖病毒反转录微滴式数字PCR (RT-ddPCR)检测方法,可为罗非鱼湖病毒的定量检测提供技术支持。参照NCBI中GenBank登陆的TiLV第3段全基因序列,选择hypothetical protein gene基因作为靶位基因设计合成了1对引物和探针,以TiLV-cDNA为模板,摸索、优化反应方法,建立与实时荧光RTPCR检测方法的线性关系,分析方法的敏感性、特异性、重复性,最后进行临床样品检测。结果显示,当引物、探针浓度分别为500、300 nmol·L^-1且退火温度为54.2℃时,建立的TiLV RT-ddPCR扩增反应效率最高、阴阳性微滴分布界限最明显、平均拷贝数较高;敏感性强,检测限低至2拷贝·μL^-1,且在1～90 000拷贝·μL^-1范围内与实时荧光RT-PCR检测的线性关系较好(R2=0.995 8);检测变异系数低(4.86%);与其他5种常见的水生动物疫病病毒[鲤浮肿病毒(Carp edema virus, CEV)、锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvi...     

罗非鱼病害及其防治技术研究进展

罗非鱼是联合国粮农组织向世界各国推荐养殖的鱼类之一,具有生长快、群体产量高、食性杂、适应性强等特点,适宜于在各种水体、采取多种方式进行养殖。近年来,全世界罗非鱼消费需求量逐年上升,成为继三文鱼、对虾之后的国际性市场的养殖水产品,     

罗非鱼养殖技术问答

1.罗非鱼有哪些优良性状?罗非鱼作为养殖对象有许多优良性状,它食性杂、食谱广,浮游生物、附生藻类、幼嫩水生植物、有机碎屑等以及人工饲料都能摄食;对环境的适应性强,池水溶解氧降至1.5毫克/升时,仍能正常生活;生长速度快,饲养周期短,春天繁     

罗非鱼海豚链球菌PCR检测方法的建立

近年来，海豚链球病已给我国及世界罗非鱼养殖带来了巨大的经济损失。为建立特异、敏感、快速的罗非鱼海豚链球菌PCR诊断方法，根据NCBI数据库已公布的海豚链球菌基因序列，设计合成种特异性引物CM1／CM2，进行海豚链球菌特异基因片段的PCR扩增试验、反应条件的优化及不同检测材料的比较。同时测试了方法的特异性和敏感性，对不同养殖鱼场的10份临床样品进行了检测。试验结果表明，引物CM1／CM2可以扩增到与预计大小相符的870bp海豚链球菌特异性基因片段；PCR反应与鮰爱德华氏细菌、Ⅰ型荧光假单胞菌、点状产气单胞菌点状亚种、鳗弧菌、温和气单胞菌、肠型点状产气单胞菌、柱状黄杆菌、嗜水气单胞菌和河弧菌水产常见病原菌均无交叉反应；能够检测的最低细菌数为20～30个海豚链球菌；同时，该PCR可以直接从病鱼的脑、肝脏、肾脏及脾脏组织扩增出特异性目的片段；临床菌株检测结果与基于菌株16srRNA基因序列系统进化分析结果一致。由于病鱼内脏组织总DNA、菌落及菌液可直接用于该PCR扩增，最大限度缩短了整个检测时间及降低了检测成本。方法的建立为致病性海豚链球菌检测提供了一种简便、快速的途径，具有较好的应用前景。     

红罗非鱼生物学特性及养殖技术

红罗非鱼(Red Tilapia)是近几年来引进的一种高产优质养殖鱼类,是鲈形目(Perci-formes)鲡鱼科(Cichidae)罗非鱼属(Tilapia)内种间杂交育出的新品种。具有体色诱人、腹膜洁白、生长速度快、肉味鲜美、食性广泛、适应性强、不易感染疾病、经济效益高等优点。台湾省、菲律宾、关岛等国家和地区养殖红罗非鱼较多,大陆广东、福建发展迅猛,并称之为彩虹鲷。其经济价值为黑色罗非鱼的3—4倍。红罗非鱼是一个十分具有推广前景的品种,笔者从1986年起开始红罗非鱼的选育与改良研究,几年来已取得了一定的经验,其优良性状更为明显。现结合有关资料,总结报告如下。     

罗非鱼鱼种越冬技术

<正> 罗非鱼食性广,抗病力强,生长快,产量高,近几年养殖面积逐年增加。罗非鱼是热水性鱼类,水温降到14℃以下时,便停止摄食。因此,10月以后,水温降至15℃时,要进入越冬池越冬。越冬过程技术要点如下: 1 越冬池的修建 土池、水泥池均可做为罗非鱼的越冬池,但无论哪种池,都应建在避风、向阳、水质良好、水源和电源都方便的地方。越冬池表     

罗非鱼营养研究进展

罗非鱼是原产非洲的热带性鱼类,隶属于鲈形目、丽鱼科,约有100种。罗非鱼具有生长快、食性杂、病害少、适应性强等特点,目前已成为世界上养殖最为广泛的鱼类之一。在我国南     

罗非鱼越冬病害防治技术

现又到了罗非鱼越冬的时候，今年气候比较特殊，罗非鱼越冬病害较多，现将有关罗非鱼在越冬期间可能发生的病害及防治措施通报一下，供广大养殖者参考：一、水霉病病症：水霉病又称肤霉病，主要是由于操作不慎，鱼体受伤，鳞片脱落，霉菌从伤口侵入并大量繁殖而引起。最明显的症状是病灶呈白色棉絮状，鱼体瘦弱，食欲减退，最后因衰弱死亡。防治方法：①越冬温室彻底消毒。鱼种入池前用３％～４％食盐水浸洗１０－１５分钟后放养。②发病后将水温提高至２０℃以上。③用５００～７００克／米３食盐水＋５００～７００克／米３小苏打全池泼洒…     

罗非鱼链球菌病研究进展

链球菌（Streptococcus spp．）是一种广泛分布于自然界的革兰氏阳性菌,是人类的重要病原之一,也是其他多种脊椎动物包括猪、牛、鱼等的重要病原菌。目前已有多个国家报道了鱼类链球菌病的暴发与流行,受感染的鱼类包括多种海水和淡水鱼类,以温水性鱼类最为严重。近年中国罗非鱼链球菌感染的报道也呈现增加趋势,尤其在2009年,广东、海南、福建和广西地区养殖罗非鱼的链球病发病率为20％～50％,死亡率达50％～70％,甚至更高。链球菌病已严重危害着中国罗非鱼养殖业的健康发展。文章对罗非鱼链球菌病的病原、流行及防治方法作一综述,以期为今后开展罗非鱼链球菌病防控研究提供参考。     

罗非鱼养殖技术

目前广东省养殖的罗非鱼品种主要有：奥尼罗非鱼、吉富罗非鱼、尼罗罗非鱼、红罗非鱼等，本主要针对在海丰县养殖的奥尼罗非鱼养殖技术的介绍。     

古巴的罗非鱼雄性化技术简介

古巴的气候条件得天独厚,常年水湿在２４～３０℃之间,非常适合罗非鱼的养殖。众所诸知,罗非鱼的全雄单性养殖,可以大大提高养殖经济效益,人们一直在努力寻找一种简单有效的方法来实现这个目的。目前,国内已普遍采用罗非鱼种间杂交的方法,其杂种后代可获得９５％以...     

罗非鱼养殖技术总结

罗非鱼原产非洲。形似本地鲫,故又有人叫它“非洲鲫鱼”。目前我国养殖比较广泛的主要有尼罗罗非鱼、莫桑比克罗非鱼、奥利亚罗非鱼。罗非鱼具有食性广、耐低氧、生长快、发病少、繁殖能力强等优点,而且易饲养,市场好。是许多地方渔农增收的主要养殖品种,尤其是罗非鱼在目前国际市场上比较活跃,因此集约化养殖方兴未艾。     

罗非鱼肉块保鲜技术

影响罗非鱼肉块保鲜效果的因素有温度、pH值、保鲜剂、保鲜时间。用6种不同配方的保鲜剂处理罗非鱼肉块后放在4℃～7℃、13℃～16℃二个温度段下，进行保鲜对比，温度低，保鲜时间长。在同一个温度段下，不同配方的保鲜效果不同，在4℃～7℃温度下，经保鲜剂处理过的都可保鲜4d，1号、2号和5号配方的可保鲜8d，效果较好。     

小罗非鱼的加工技术

由于传统海水鱼类的价格不断上升、渔业资源的受损及波动致使人们致力于寻找新的鱼类蛋白源。具有发展前途的是水产养殖业。虽然水产养殖业的产量已有增加,但还具有很大的潜力。许多热带淡水鱼类的商业价值并不高,但却可作为人类食用的潜在的鱼类蛋白源。罗非鱼就是其中的一种,该鱼资源丰富,个体小,市场价格也较低,只有超过400克的鱼体的价格才较高。罗非鱼系多骨鱼类,成熟早,繁殖多,但个体小,不受消费者的重视,     

罗非鱼池轮养鳜鱼技术

罗非鱼不耐低温,秋末冬初,当水温降至15℃时,就不能继续生长。实际上罗非鱼养殖池只能利用半年(5～10月)。鳜鱼则不同,到了冬季并不完全停食,仍能持续生长,只是摄良减少,生长速度减慢。利用罗非鱼养殖池空闲期养鳜鱼,此阶段苗种便宜,饲料鱼丰富,鳜鱼养至翌年5月份上市,价格相对较高。盐都县义丰镇通过多年的生产实践,探索出利用罗非鱼池轮养鳜鱼的实用技术,有效地提高了池塘产出率,每0.067公顷(1亩)效益比单一养殖罗非鱼或鳜鱼增加3%以上。其具体技术如下。鳜鱼种放养罗非鱼养至8～9月份,大部分已达到上市规格(每尾400克左右),可以捕捞上市…