一起藏绵羊溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌混合感染的实验室诊断

为查明2021年四川省甘孜州某藏绵羊养殖场呼吸道疾病的发病病因,本研究采用PCR方法对送检的5份深部鼻腔棉拭子进行了“山羊副流感病毒3型、牛病毒性腹泻-黏膜病病毒、牛冠状病毒、多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌、绵羊肺炎支原体、丝状支原体簇成员”等常见呼吸道病原的检测。结果显示：多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌为阳性,其他病原为阴性;通过细菌分离培养成功获得5株溶血性曼氏杆菌和5株多杀性巴氏杆菌;分型结果显示5株溶血性曼氏杆菌为A2型,5株多杀性巴氏杆菌为D型。结合临床症状,确诊该场藏绵羊的呼吸道疾病是由A2型溶血性曼氏杆菌和D型多杀性巴氏杆菌混合感染所致。     

山羊中绵羊肺炎支原体的分离及鉴定

从四川省乐至县发生胸膜肺炎性传染病的山羊群中采集12个鼻拭子及4个肺组织病料,进行病原分离培养和特异性PCR检测。结果从9个鼻拭子和4个肺组织中分离到支原体,经鉴定均为绵羊肺炎支原体,未发现丝状支原体簇成员及多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌。结果表明,绵羊肺炎支原体是引起该山羊群发生胸膜肺炎的病原,同时说明绵羊肺炎支原体也是山羊支原体性肺炎的重要病原之一。     

一起肉牛副流感病毒3型、巴氏杆菌、牛支原体混合感染的诊治

牛呼吸道综合征往往是多种病原体混合感染引起,致病机制复杂。云南省昆明市某肉牛养殖场部分犊牛出现了以咳嗽、气短、流鼻涕、腹泻等呼吸道症状为主要表现的呼吸道疾病,随后多头相继死亡,剖检主要病变为气管、胃黏膜、小肠出血,肺脏肝变,肝脏出血肿大,心脏出血,心包黏连等;经采病料用常见呼吸道疾病病原（牛病毒性腹泻病毒,牛冠状病毒,牛副流感病毒3型,牛呼吸道合胞体病毒,牛疱疹病毒1型,多杀性巴氏杆菌,溶血性曼氏杆菌,牛支原体）8联PCR检测试剂盒检测,结果为副流感病毒3型、多杀性巴氏杆菌、牛支原体混合感染。经用加米霉素、10%替米考星和20%氟苯尼考等大环内酯类药物治疗,结合加强饲养管理,多数病牛恢复了健康。     

羔羊肺炎病原的鉴定与分析

为了解羔羊肺炎病原感染状况,试验采用病原分离、纯化和16S rRNA序列分析的方法,对5个地点的15只肺炎羔羊进行了研究。结果表明:分离得到38株病原菌和2株支原体。优势病原有溶血性曼氏杆菌、化脓隐秘杆菌、多杀性巴氏杆菌、粪肠球菌和Streptococcus minor。说明羔羊肺炎新老病原混合感染,加大了防控难度。     

一起牛感染支原体与多杀性巴氏杆菌的诊断与治疗

2022年5月甘肃省某肉牛养殖场的部分犊牛,先后出现以咳嗽、呼吸急促、流鼻涕等为主的呼吸道症状,并陆续出现牛只死亡的情况,现场调查及临床检查后初步怀疑为细菌性病原感染。为进一步确诊病原并对症治疗,现场采集症状明显牛只的鼻拭子,同时对病死牛只进行解剖观察,无菌采集肺组织进行实验室病原检测。使用TaqMan探针荧光定量PCR进行3种(牛支原体、牛多杀性巴氏杆菌及牛溶血性曼氏杆菌)牛呼吸道疾病病原核酸检测。结果显示,病死牛只肺脏病变较为明显,肺尖实质化严重,上端有脂肪样颗粒状病灶;鼻拭子及肺组织呈牛支原体和多杀性巴氏杆菌核酸阳性。结果表明,该牛场本次发病是由于感染了牛支原体和牛多杀性巴氏杆菌引起的。通过采取隔离治疗、紧急免疫、严格消杀等综合性防控措施后,该牛场病情逐步好转并恢复正常生产。     

山羊支原体山羊肺炎亚种和多杀性巴氏杆菌双重 PCR 检测方法的建立

为建立一种能够同时检测山羊支原体山羊肺炎亚种和多杀性巴氏杆菌的双重 PCR 方法，本研究采用2对特异性引物，对退火温度和引物浓度比进行了优化，成功建立了一种能同时检测上述两种病原的双重 PCR 方法。结果显示，该方法具有很好的特异性，仅对山羊支原体山羊肺炎亚种和多杀性巴氏杆菌有扩增，而对其他常见的羊呼吸道病原无扩增；该方法对两种病原的检测限分别为32 pg 和50 pg，与单独 PCR相同；26份临床样品中山羊支原体山羊肺炎亚种的检出率为23．1％，多杀性巴氏杆菌的检出率为26．9％。所建立的双重 PCR 具有特异性好、灵敏度高的特点，为临床上这两种病原感染的快速诊断和流行病学调查等提供了更为有用的手段。     

一例山羊肺炎的诊断报告

正山羊肺炎是广泛流行于山羊的疾病,主要支原体病原有绵羊肺炎支原体、丝状支原体山羊亚种、山羊支原体山羊亚种、精氨酸支原体等,此外,细菌(如溶血曼氏杆菌、多杀巴氏杆菌、化脓隐秘杆菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌等)、寄生虫(肺丝虫等)均可引起山羊肺炎[1]。其中最为常见的是以绵羊肺炎支原体、丝状支原体山羊亚种、细菌发生的单感染或混合感染为主,具有发病率和死亡率较高的特点,对养羊业的发展造成巨大的经济损失。1发病情况2019年8月,兴安县     

一种由5种细菌抗原和2种免疫原组成的新型多价牛细菌性呼吸道疾病疫苗安全性和效价检测

牛细菌性呼吸道疾病是造成犊牛高死亡率和巨大经济损失的最严重问题之一。由于没有多价疫苗,牛细菌性呼吸道疾病疫苗接种程序很复杂。本研究研发了新型多价牛细菌性呼吸道疾病疫苗,并进行了安全性和效价检验。新型多价牛细菌性呼吸道疾病疫苗由5种细菌抗原和2种免疫原组成,其中细菌抗原包括A型溶血性曼氏杆菌菌素、多杀性巴氏杆菌菌素、睡眠嗜血杆菌菌素、牛支原体菌素、化脓性隐秘杆菌菌素;免疫原包括A型溶血性曼氏杆菌白细胞类毒素、多杀性巴氏杆菌外膜蛋白。与没有接种疫苗的猪相比,接种5种细菌抗原的几内亚猪的ELISA抗体滴度升高。在本研究中,新型多价牛细菌性呼吸道疾病疫苗对犊牛和妊娠牛是安全的。用溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌对犊牛攻毒,和没有接种疫苗的犊牛相比,接种疫苗的犊牛平均日增重和抗体滴度明显增加(P<0.05),呼吸道症状极显著减轻(P<0.01),治疗频率极显著减少(P<0.01)。有趣的是,溶血性曼氏杆菌白细胞类毒素和牛支原体抗体滴度与呼吸道症状减轻有密切相关性。接种新型多价牛细菌性呼吸道疾病疫苗将会是防制牛细菌性呼吸道疾病的一种经济有效的措施。     

一种由5种细菌抗原和2种免疫原组成的新型多价牛细菌性呼吸道疾病疫苗安全性和效价检测

牛细菌性呼吸道疾病是造成犊牛高死亡率和巨大经济损失的最严重问题之一。由于没有多价疫苗,牛细菌性呼吸道疾病疫苗接种程序很复杂。本研究研发了新型多价牛细菌性呼吸道疾病疫苗,并进行了安全性和效价检验。新型多价牛细菌性呼吸道疾病疫苗由5种细菌抗原和2种免疫原组成,其中细菌抗原包括A型溶血性曼氏杆菌菌素、多杀性巴氏杆菌菌素、睡眠嗜血杆菌菌素、牛支原体菌素、化脓性隐秘杆菌菌素;免疫原包括A型溶血性曼氏杆菌白细胞类毒素、多杀性巴氏杆菌外膜蛋白。与没有接种疫苗的猪相比,接种5种细菌抗原的几内亚猪的ELISA抗体滴度升高。在本研究中,新型多价牛细菌性呼吸道疾病疫苗对犊牛和妊娠牛是安全的。用溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌对犊牛攻毒,和没有接种疫苗的犊牛相比,接种疫苗的犊牛平均日增重和抗体滴度明显增加（P〈0.05）,呼吸道症状极显著减轻（P〈0.01）,治疗频率极显著减少（P〈0.01）。有趣的是,溶血性曼氏杆菌白细胞类毒素和牛支原体抗体滴度与呼吸道症状减轻有密切相关性。接种新型多价牛细菌性呼吸道疾病疫苗将会是防制牛细菌性呼吸道疾病的一种经济有效的措施。     

羊呼吸道主要支原体和细菌病原的多重PCR检测方法的建立及应用

为建立一种能够同时检测绵羊肺炎支原体、丝状支原体簇成员、多杀性巴氏杆菌和溶血性曼氏杆菌4种羊呼吸道主要病原的多重PCR方法,本研究采用各病原的特异性引物,经优化反应条件,建立了一种可以同时检测以上4种病原的多重PCR方法,并对128份临床样品进行了检测。结果显示,该方法对其它细菌和支原体扩增结果均为阴性,特异性强;该方法对以上4种病原基因组DNA的检测下限分别为2.2×10~3拷贝、2.1×10~3拷贝、1.1×10~3拷贝和8.3×10~2拷贝。该方法特异性强、敏感性高,为上述4种病原的快速检测和鉴定,以及临床羊呼吸道疾病的诊断提供了一种方便、快捷和准确的工具。     

2016-2017年广西牛呼吸道疾病综合征病原学的调查研究

为了解广西地区牛呼吸道疾病综合征（bovine respiratory disease complex，BRDC）的病原情况，本研究通过RT-PCR/PCR方法和细菌分离鉴定方法对2016-2017年送检的117份患有呼吸道疾病的病料进行病原诊断，并对主要分离菌进行药物敏感性试验。结果显示，RT-PCR/PCR方法检测的肺炎克雷伯氏菌、牛支原体、化脓隐秘杆菌、多杀性巴氏杆菌、牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）、溶血性曼氏杆菌的检出率分别为41.0%（48/117）、28.2%（33/117）、20.5%（24/117）、15.4%（18/117）、12.8%（15/117）、5.1%（6/117），而细菌分离鉴定方法检测的肺炎克雷伯氏菌、大肠杆菌、牛支原体、化脓隐秘杆菌、多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌的检出率分别为41.0%（48/117）、33.3%（39/117）、17.1%（20/117）、7.7%（9/117）、2.6%（3/117）、2.6%（3/117），牛副流感病毒3型、牛呼吸道合胞体病毒和牛病毒性腹泻病毒未检出，且PCR方法更敏感。药敏试验结果显示，20株牛支原体对β-内酰胺类、磺胺类、多肽类药物的耐药率为90.0%~100.0%，对喹诺酮类、庆大霉素、阿米卡星和卡那霉素敏感（耐药率为在10.0%~25.0%）；30株大肠杆菌和30株肺炎克雷伯氏菌除了对头孢噻肟、头孢曲松和头孢他啶敏感外（耐药率分别为13.3%~20.0%、10.0%~30.0%），对其他15种药物均具有耐药性（耐药率分别为50.0%~100.0%、40.0%~100.0%）。综上所述，广西地区牛呼吸道疾病主要以牛支原体、大肠杆菌和肺炎克雷伯氏菌引发的混合感染为主，且分离菌均已出现不同程度的耐药性。     

江苏地区羊鼻腔7种病原体感染的调查

为了解江苏省羊鼻腔传染性疾病的病原分布情况,于2020年冬季(11月份)采集江苏省地区多个地级市11家羊场的269份鼻腔拭子,采用PCR方法对多种病原体进行检测,分析7种呼吸道病原体在鼻腔分布的特征。结果表明：269份鼻腔拭子中,7种病原体检出率分别为溶血性曼氏杆菌(243份,90.3%),绵羊肺炎支原体(197份,73.2%),乳链球菌(138份,51.3%),多杀性巴氏杆菌(44份,16.3%),羊口疮病毒(44份,16.3%),肺炎克雷伯菌(22份,8.2%)和山羊副流感病毒3型(6份,2.2%)。其中南通(海门)、南京和淮安等市与泰州和连云港等市相比鼻腔病原的阳性率更高,检出病原种类数量更多。另外,江苏地区羊鼻腔病原呈混合感染状态,混合感染率达到82.5%。对阳性病原进行相关性分析发现,溶血性曼氏杆菌和绵羊肺炎支原体有超过50%的几率存在显著的共存关系(R=0.756,P<0.000 1)。本研究结果初步明确了江苏地区冬季羊的鼻腔病原分布情况,为进一步对羊呼吸道病原感染的防控提供了参考。     

犊牛支原体肺炎的诊断和防治措施

牛支原体是危害我国养牛业的重要致病性支原体,目前已证实该病呈世界性分布,病原除导致牛肺炎、乳腺炎外,还导致关节炎、角膜结膜炎、耳炎、生殖道炎症、流产与不孕等多种病症。据报道,欧美国家约四分之一至三分之一的牛呼吸疾病综合征是由牛支原体引起的。同时,牛支原体与其它病原的混合感染和协同致病是牛支原体肺炎重要的致病机制之一。据报道,混合感染的常见病原菌主要包括:多杀性巴氏杆菌、化脓隐秘杆菌、溶血性曼氏杆菌、昏睡嗜血杆菌等;混     

猪肺疫多杀性巴氏杆菌的分离鉴定

为了研究四川乐山某猪场爆发的保育猪严重呼吸道疾病的主要病原,试验采用病理剖检、病毒检测、细菌分离鉴定、生化鉴定、动物回归试验以及多杀性巴氏杆菌种特异性KMT基因的PCR检测对病原进行鉴定。结果表明:发病猪有严重肺炎症状,支气管内部有少量泡沫,腹股沟淋巴结出血、水肿,其他实质器官未见明显病理变化;病毒检测结果显示为蓝耳病病毒阳性,猪瘟病毒、伪狂犬病毒、圆环病毒2型阴性;从病猪肺脏中分离获得大肠杆菌和1株蓝耳病病毒继发的高致病性多杀性巴氏杆菌;该分离菌株对多种药物均高度敏感。     

某牛场犊牛呼吸道疾病的诊断与药敏试验

2017年3月份,黑龙江省五常市某规模化奶牛场发生犊牛急性肺炎,为了确诊其病因,无菌采取7份呼吸道症状犊牛鼻拭子进行细菌分离鉴定,同时进行生化试验、PCR鉴定和药敏试验。结果表明:共分离得到3株细菌,符合大肠杆菌、巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌生化特性;PCR引物能有效扩增巴氏杆菌OmpH基因、溶血性曼氏杆菌lkt A基因和大肠杆菌Sta基因;分离的大肠杆菌对恩诺沙星、环丙沙星、阿米卡星中敏,巴氏杆菌对恩诺沙星、阿莫西林、青霉素高敏,溶血性曼氏杆菌对阿米卡星、头孢唑林、青霉素高敏;经检查7份鼻拭子中大肠杆菌感染1份,溶血性曼氏杆菌感染1份,巴氏杆菌感染5份。说明该牛场细菌污染严重,应引起重视。     

反刍动物溶血性曼氏杆菌病的诊断与防控

<正>溶血性曼氏杆菌常存在于牛、羊等反刍动物的上呼吸道中,正常情况下不易导致动物发病,为条件性致病菌,但在应激因素影响下,如气候变化、长途运输或者存在病毒、支原体、多杀性巴氏杆菌混合感染导致免疫力降低时,可引起牛地方流行性肺炎、奶牛急性胸膜肺炎、犊牛多发性血管炎、山羊肺炎、绵羊乳房炎和羔羊急性败血症等多种疾病,且其引发乳房炎的能力可能强于金黄色葡萄球菌。     

兔源多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌的分离鉴定与药敏试验

为了确定引起兔呼吸困难、死亡的病原,本研究对河南省某兔场发病病例剖检,采集8份有呼吸道症状的病兔样品对病原进行分离培养,通过生化鉴定、16S rRNA PCR鉴定及小鼠致病性试验确定病原,并采用药敏试验分析其耐药性。结果显示,分离得到8株两端钝圆、卵圆形的革兰阴性球杆菌及8株短粗、卵圆形的革兰阴性菌;生化鉴定结果显示分离的细菌1和细菌2分别符合多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌的生化特性,分别命名为HN-W01和LY-W05株;扩增的分离菌16S rRNA基因序列片段大小分别为643和1 494 bp,与多杀性巴氏杆菌AY604234.1和肺炎克雷伯菌MK824895.1的同源性分别为99.32%和99.93%,表明该兔场患病兔为多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌混合感染。致病性试验显示,分离出的多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌对小鼠均有致病力,可使小鼠死亡。经药敏测定发现分离得到的多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌同时对多粘菌素B和氯霉素敏感,对其他药物有不同程度的耐药性。本研究为家兔养殖过程中多杀性巴氏杆菌和肺炎克雷伯菌混合感染的分离鉴定以及临床科学用药提供了参考依据。     

D型多杀性巴氏杆菌和绵羊肺炎支原体引起山羊的混合感染

2018年9月广西某羊场部分山羊发生流涕、咳嗽、呼吸困难和体温升高等临床症状的疾病,为确诊发病原因并提供治疗方案,采用病原分离培养、PCR扩增鉴定的方法进行诊断,并对分离菌进行生化鉴定、致病性试验和药敏试验。结果显示,病料在血平板有圆形的小菌落生长,革兰阴性小球短杆菌,而在PPLO培养基上不生长;病料的PCR扩增结果显示绵羊肺炎支原体和多杀性巴氏杆菌均为阳性;所分离到的病原菌经生化鉴定,该菌符合多杀性巴氏杆菌的特性;用多杀性巴氏杆菌种属和D型多杀性巴氏杆菌特异性引物扩增为阳性;致病性试验显示该菌对小鼠有很强的致病性;药敏试验显示该菌对头孢他啶、头孢噻肟、氧氟沙星高度敏感,对复方新诺明、强力霉素、红霉素、青霉素为耐药。结果表明该病是由绵羊肺炎支原体和D型多杀性巴氏杆菌混合感染引起。     

一例绵羊肺炎支原体和溶血性曼氏杆菌混合感染山羊的诊断

2015年5月,四川省成都市龙泉驿区某山羊养殖场发生了以发热、呼吸困难、流鼻液等呼吸道症状为主要特征的传染病,且以1~3月龄小羊最易感,病死率达到40%。通过其流行病学、临床症状、病理剖检变化和实验室诊断,确定是由绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)和溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica)的混合感染引起的山羊呼吸道疾病。     

荚膜D型多杀性巴氏杆菌引起兔化脓性肺炎的诊断及病原生物学特性研究

本研究对河南某兔场发生呼吸道感染病死兔的组织样本进行病原核酸检测、分离鉴定和生物学特性研究.病原核酸荧光定量PCR结果显示,多杀性巴氏杆菌呈现阳性;细菌分离获得多杀性巴氏杆菌,命名为HN0604株;特异性和荚膜血清型PCR鉴定结果显示,该细菌为荚膜D型多杀性巴氏杆菌;将分离株HN0604人工感染兔后,复制出纤维素性化脓...