“神索”葡萄体细胞胚干化保存的研究

以酿酒葡萄品种"神索"的体细胞胚为试验材料,研究了干化对体细胞胚的保存效应.结果表明:葡萄体细胞胚失水量与萌发率有关,失水量在40%~50%之间萌发率较高,达58%左右,较未经干化的胚状体萌发率高9.4%;在较高相对湿度下,体胚失水速度变慢,延长了干化处理时间,提高了体细胞胚的存活率和萌发率;相对湿度为70%,体细胞胚干化15 d效果最好,胚状体萌发率可由未经干化处理的33.5%提高到经干化处理15 d的56.2%.     

碳源对山核桃体细胞胚发生和植株再生的影响

以山核桃Carya cathayensis花后10～12周的幼胚为外植体,建立体胚发生及再生体系,同时分别对山核桃胚性愈合组织和体细胞胚诱导的碳源种类和质量浓度进行了比较分析。结果表明：接种在含葡萄糖培养基中的山核桃胚性愈合组织诱导率显著高于蔗糖、海藻糖和麦芽糖,诱导率达33.3%;在培养基中添加20 g.L-1葡萄糖,胚性愈合组织诱导率最高,达50.0%,显著高于其他处理。蔗糖为山核桃体细胞胚诱导的最佳碳源种类,体细胞胚诱导率显著高于葡萄糖、海藻糖和麦芽糖,诱导率达23.3%;在培养基中添加45 g.L-1蔗糖,体细胞胚诱导率最高,达30.1%,显著高于其他处理。体胚在WPM培养基（木本植物用培养基）附加5 g.L-1蔗糖的培养基上萌发率达20%,显著高于附加0,10,15,20,25,30 g.L-1蔗糖的体胚萌发率。     

影响胡桃体细胞胚萌发率若干因素的研究

在Mg(NO_3)_2饱和溶液保持的空气湿度以及4℃的黑暗条件下,进行胡桃成熟体细胞胚的低温脱水处理6、8、10、12天后,将胚移到DKW液体或固体培养基中,在光照条件下萌发,经10天处理的胚萌发率最高,分别有56％和14％的胚萌发成小苗。当液体培养基中加入BAP时,则萌发率可增加到68％,而加入GA_3,则产生抑制作用,其萌发率降至20～28％。     

抗松针褐斑病湿地松体细胞胚胎发生与植株再生

为将抗松针褐斑病湿地松(Pinus elliottii Engelm.)良种快速推广,以未成熟合子胚为外植体,研究了合子胚发育阶段对胚性愈伤组织诱导以及ABA与PEG8000对体细胞胚成熟的影响,并探讨了体细胞胚质量及干化条件对体细胞胚萌发的影响。结果表明:发育至2~4阶段的合子胚最利于胚性愈伤组织的诱导,LP+16 mg·L~(-1)ABA+180 g·L~(-1)PEG8000+2 g·L~(-1)AC适合于体细胞胚的成熟,高质量体细胞胚经"滤纸容器法"干化2周后萌发,萌发的体细胞胚于1/4WPM+0.3 mg·L~(-1)NAA+1 mg·L~(-1)IBA上培养70 d左右根部发育,转入1/2WPM中,30 d左右侧根产生发育完整的再生植株。     

影响葡萄花药愈伤组织产生和分化频率的因素

葡萄花药培养能产生体细胞胚。体细胞胚的诱导及其频率高低与材料基因型、培养基和培养条件有关。试验结果表明,对花药进行低温和药物处理不能明显地促进体细胞胚胎发生,但通过改进培养基成份,添加AgNO_3和用液-固培养均能促进葡萄花药胚性愈伤组织的产生。供试的14个基因型材料中仅有3个能产生体细胞胚,而体细胞胚仅部分能萌发成正常苗。     

甜瓜品种‘GT-1’基于体细胞胚发生的植株再生体系研究

以甜瓜(Cucumis meloL.)品种‘GT-1’5 d苗龄的子叶为外植体,建立了基于体细胞胚发生的植株再生体系.结果表明:在MS+2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 0.1 mg/L的培养基上,胚状体发生的频率可达81.7%.以葡萄糖为碳源,子叶块以间接方式发生胚状体;以乳糖为碳源,子叶块则以直接方式发生胚状体.剥离成熟体细胞胚置于MS培养基上可萌发生长出完整植株.     

龙眼体细胞胚胎的高频率萌发与植株再生

以龙眼胚性愈伤组织诱导产生子叶形胚状体为试验材料，比较了蔗糖、活性炭的质量浓度，椰乳的体积分数，光照度和成熟时间等因素对体胚“成熟”的影响以及不同成熟过程、成熟时间、胚状体形态、品种（基因型）等因素对龙眼体细胞胚胎萌发的影响．结果表明，龙眼体胚在含５０ｇＬ－１蔗糖、体积分数为０．０５的椰乳、１００ｍｇＬ－１肌醇的ＭＳ固体培养基上，在黑暗或弱光条件下，不论白色还是透明化（玻璃化）子叶形小胚状体，都可完成“成熟”过程．体胚对成熟培养的蔗糖质量浓度和成熟时间有特定的要求．经过成熟培养的体细胞胚胎，可高频率萌发成苗     

甘薯不同外植体体细胞胚的发生及植株再生

[目的]分别以甘薯品种徐薯22的叶片与茎尖作为外植体,研究利用不同外植体通过体细胞胚胎再生途径得到再生植株的方法。[方法]将徐薯22的叶片和茎尖分别置于MSB和MSD培养基中诱导胚性愈伤,再将胚性愈伤置于MS培养基培养,观察体细胞胚的发生情况,最后对不同外植体得到的植株再生频率进行比较。[结果]用叶片作为外植体得到的胚性愈伤平均诱导频率为95.69%,而茎尖的则为30.56%;不同外植体在体细胞胚发生途径中的形态特征有一定差异;用叶片作为外植体的植株再生频率为60.61%,用茎尖的则为22.00%,且采用不同外植体诱导得到的再生植株无形态变化。[结论]在该试验中,体细胞胚的发生及植株再生的最适外植体为甘薯品种徐薯22的叶片。     

甘薯不同外植体体细胞胚的发生及植株再生(英文)

[目的]分别以甘薯品种徐薯22的叶片与茎尖作为外植体,研究利用不同外植体通过体细胞胚胎再生途径得到再生植株的方法。[方法]将徐薯22的叶片和茎尖分别置于MSB和MSD培养基中诱导胚性愈伤,再将胚性愈伤置于MS培养基培养,观察体细胞胚的发生情况,最后对不同外植体得到的植株再生频率进行比较。[结果]用叶片作为外植体得到的胚性愈伤平均诱导频率为95.69%,而茎尖的则为30.56%;不同外植体在体细胞胚发生途径中的形态特征有一定差异;用叶片作为外植体的植株再生频率为60.61%,用茎尖的则为22.00%,且采用不同外植体诱导得到的再生植株无形态变化。[结论]在该试验中,体细胞胚的发生及植株再生的最适外植体为甘薯品种徐薯22的叶片。     

生长环境及培养基对小麦单倍体胚萌发率和成苗率的影响

为了提高小麦单倍体幼胚的萌发率和成苗率,对不同小麦材料与玉米的杂交穗在不同生长环境(离体培养、盆栽和大田生长)及不同培养基[1/2MS培养基MC1,添加50 mg/L维生素C和150 mg/L谷氨酰胺的1/2MS培养基MC2,添加0.5 mg/L IAA(Indole-3-acetic acid)、0.5 mg/L KT(Kinetin)、150 mg/L谷氨酰胺的1/2MS培养基MC3]中的单倍体胚诱导及成苗效果进行分析。结果表明,环境条件及培养基对小麦单倍体胚的诱导及成苗均具有显著影响。小麦杂交穗离体培养条件下获得的单倍体胚质量较高,单倍体胚萌发率和成苗率分别为81.5%和63.0%,比大田条件下提高60.1%和3.4倍,比盆栽提高30.4%和68.0%。不同小麦材料在MC3培养基中的培养效果最好,小麦单倍体胚平均萌发率和平均成苗率在MC1培养基上分别为42.3%和15.3%,在MC2培养基上分别为46.2%和27.5%,在MC3培养基上分别为65.6%和38.2%。综合分析,1/2 MS+0.5 mg/L IAA+0.5 mg/L KT+150 mg/L谷氨酰胺对中小胚和发育不良幼胚的培养效果较好,获得了相对较高的萌发率和成苗率,但一次培养成苗率较低,需要及时更换培养基进行促根壮苗培养。     

龙眼体细胞胚胎高质量浓度蔗糖成熟培养后的超微结构变化

以龙眼红核子品种的松散型胚性愈伤组织诱导的体细胞胚胎为材料 ,研究了体细胞胚胎经 5 0 g· L- 1 蔗糖成熟培养后的超微结构变化 .结果表明 ,经过成熟培养之后 ,龙眼体细胞胚胎细胞在结构和代谢上都发生了根本性的变化 .该研究有助于了解龙眼体细胞成熟机理以及进一步优化龙眼体胚再生系统     

番木瓜美中红品种体胚转化体系的建立

利用已构建的番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)基因,通过农杆菌介导法,建立美中红番木瓜(Carica papaya L.)体胚的转化体系。结果表明:共培养时,当农杆菌EHA105携带pCAMBIA2300质粒时,农杆菌的浓度(OD600 nm)应小于或等于0.1,其共培养后抑制农杆菌的羧苄青霉素浓度应以750 mg/L为宜;当农杆菌EHA105携带pBI121质粒时,则农杆菌的浓度(OD600 nm)应小于或等于0.8,其共培养后抑制农杆菌的羧苄青霉素的浓度则为500 mg/L;加上滤纸处理,抗生素洗涤以及洗涤后的干燥处理,可完全抑制体胚表面的农杆菌生长。对再生的番木瓜体胚进行PCR检测,结果表明PRSV基因已转入体胚中,但还需要成苗后的进一步检测。     

芸芥体细胞胚胎成熟的影响因素研究

[目的]研究蔗糖、聚乙二醇(PEG)、脱落酸(ABA)及活性炭(AC)对芸芥体胚成熟的影响。[方法]以青城芸芥的无菌苗为试验材料,通过观察诱导体胚的形态和调查成熟体胚及正常体胚的比例,研究各因素对芸芥体胚成熟的影响。[结果]高浓度蔗糖(609、0 g/L)或添加适当浓度的PEG或一定量活性炭的条件下,芸芥体胚成熟均较好,生长快,直径达2 mm左右。45 g/L PEG最适于诱导芸芥体细胞胚胎的成熟,体胚成熟率和正常体胚率分别达35.0%和53.1%。1 g/L AC的效果最好,体胚成熟率和正常体胚率分别达30.6%和46.0%。在添加ABA的条件下,芸芥体胚成熟率和正常体胚率都低于对照。[结论]高糖培养基、添加适当浓度的PEG和一定量的活性炭均有利于芸芥体胚的成熟,ABA不利于芸芥体胚的成熟。     

糖对椰枣组织培养物的影响

【目的】为降低椰枣愈伤组织褐化率和提高体胚发生率,研究培养基中不同糖处理对愈伤组织和体胚发生的影响,为优化培养基配方提供依据。【方法】以椰枣组织培养物为研究对象,进行3种糖处理（蔗糖、蔗糖+果糖、蔗糖+葡萄糖）的组织培养试验,统计椰枣愈伤组织褐化率及体胚发生率,测定不同糖处理下愈伤组织、体胚和不定芽的淀粉、蔗糖、果糖、葡萄糖含量,综合分析不同糖处理对椰枣组织培养物影响的差异。【结果】在蔗糖培养基中增加果糖,体胚和不定芽的蔗糖含量和葡萄糖含量下降,愈伤组织和体胚的果糖含量及愈伤组织的淀粉含量上升,愈伤组织褐化率升高。在蔗糖培养基中增加葡萄糖,不定芽蔗糖含量和愈伤组织果糖含量降低,愈伤、体胚和不定芽的淀粉含量上升,愈伤和体胚的葡萄糖含量上升,体胚发生率升高。愈伤组织和体胚的淀粉和果糖含量显著高于不定芽的淀粉和果糖含量（P<0.05,下同）,愈伤组织的葡萄糖含量显著高于体胚和不定芽,体胚的蔗糖含量显著高于不定芽,不定芽的蔗糖含量显著高于愈伤组织。相关分析结果表明:愈伤组织褐化率与愈伤组织果糖含量、不定芽果糖含量均呈显著正相关;体胚发生率与体胚淀粉含量呈显著正相关;体胚发生率与体胚蔗糖含量、愈伤组织褐化率与愈伤组织果糖含量均呈极显著正相关（P<0.01,下同）;体胚发生率与体胚蔗糖含量、愈伤组织葡萄糖含量、体胚葡萄糖含量均呈极显著正相关,同时,与体胚淀粉含量呈显著正相关。【结论】在椰枣愈伤组织诱导与增殖培养过程中减少果糖的用量,在体胚发生培养时增加葡萄糖的用量,可降低愈伤组织的褐化率,提高体胚发生率。     

抗性湿地松体胚的发育、成熟与萌发

为加快抗松针褐斑病湿地松体细胞胚胎发生技术的产业化应用进程,本研究以肌醇浓度、脱落酸(ABA)的添加方式、基本培养基、ABA与聚乙二醇(PEG6000)互作、PEG6000及琼脂糖种类及浓度、活性炭(AC)、ABA、液体悬浮培养等因素对抗性湿地松体胚的发育、成熟与萌发的影响进行研究。结果表明:添加8g/L的肌醇为宜,过高浓度的肌醇则不利于湿地松体胚的发育;ABA可以采用高压灭菌;基本培养基、ABA、PEG6000互作对湿地松体胚的成熟影响很大,基本培养基以LP为最佳,ABA的最适浓度为10mg/L,PEG6000以添加25g/L、50g/L为最佳;在湿地松体胚的成熟培养过程中,PEG6000的浓度不能高于100 g/L;在湿地松体细胞胚的成熟培养基中,添加60g/L蔗糖最合适;湿地松体细胞胚的成熟培养基中添加0.5g/L或1g/L的活性炭最有利于体胚的成熟;培养基的状态对体胚的高频率诱导具有一定的影响,悬浮培养以100mL的三角瓶装30mL的培养液,摇床转速以130r/min为宜,液体转固体时吸取1mL培养液为宜;未建立成熟的体胚发生体系前,以采用固体培养为佳。最佳成熟培养基、激素及部分添加物组合为LP+10mg/L ABA+50g/L PEG6000+60g/L蔗糖+1g/L活性炭。     

棉花体细胞胚萌发及植株再生的研究

对棉花体细胞胚萌发规律及其影响因素进行研究结果,棉花体细胞胚的葫发可分为3种类型:①先出根,后出芽;②先出茅,后出根;③根、芽平衡生长,且3种类型所占的比例不同.不同基础培养基、不同激素种类和浓度,以及不同蔗糖浓度对棉花体细胞胚的萌发和植株再生的影响不同.BT培养基有利于根的发育,MS培养基有利于芽的发育,而SH培养基则有利于根、芽的平衡生长.KT的使用显著降低了棉花体细胞胚的生根率、生芽率、葫发率及再生植株率.低浓度的NAA有利于胚的葫发和再生植株,其最佳浓度为0.1 mg/L;MS培养基中添加0.1mg/L NAA,可使芽的分化率提高83.3%,再生植株率提高50.0%;而高浓度的NAA又抑制了芽的发育.在棉花体细胞胚萌发中蔗糖的最佳使用量为20g/L.     

苜蓿转录因子基因Mfhb-1的生物学功能初探

以苜蓿转化植株为材料,利用苜蓿的直接体细胞胚胎发生体系,对苜蓿HD-Zip转录因子基因Mfhb-1的生物学功能进行了初步研究。结果发现,正义转化植株F4(转入基因编码区序列)产生体细胞胚胎时期较对照47/1-5反义转化植株D3(转入编码区的反向序列)和C5(转入编码区+uORF)早,且形成的体细胞胚胎数量远高于对照47/1-5;D3植株产生的体细胞数量较对照少;C5植株产生的体细胞数量较对照少,但比D3稍多。从以上结果可以推测,属于HD-Zip转录因子的Mfhb-1基因能够促进苜蓿体细胞胚胎的发育,并能够提高苜蓿体细胞胚胎发生的数量。     

小麦成熟胚高频再生基因型筛选及再生体系研究

以目前生产上主栽或主推的、具有优良农艺性状的18个黄淮麦区冬小麦品种(系)和2个西北春麦区春小麦品种为材料,对它们成熟胚再生能力进行比较,从中筛选出再生频率高的基因型,并探讨不同接种方法、麦草畏质量浓度、细胞分裂素和干燥处理等对小麦成熟胚愈伤组织诱导和分化频率的影响。结果表明,小麦成熟胚愈伤组织诱导率普遍较高,为66.7%～100.0%,而分化率普遍较低,为3.6%～35.8%。基因型间差异显著,其中愈伤组织分化率较高的基因型有泛麦8号、周麦27和邢麦6号,绿苗分化率超过30%;采用胚十字形切割法接种小麦成熟胚愈伤组织分化率较高,达到54.5%～73.3%;诱导培养基中麦草畏的诱导效果显著优于2,4-D。在麦草畏质量浓度为2～4mg/L时有利于愈伤组织诱导和分化;成熟胚愈伤组织转入不含激素或含有2mg/L 6-BA或KT的分化培养基中时,分化率分别达到38.5%,45.8%和37.0%,较其他细胞分裂素和质量浓度处理分化率高,而愈伤组织分化前干燥处理6h和未干燥处理的差异不显著,干燥12h分化率明显降低。     

不同培养液对牛体细胞核移植胚胎发育的影响

旨在为牛体细胞克隆胚胎体外培养体系的建立奠定基础。利用体细胞核移植技术生产牛重构胚,将重构胚随机分成2组,分别用mSOF和G1.5/G2.5培养,统计2种培养液对牛核移植克隆胚胎发育的影响,用TUNEL荧光检测系统检测2个培养组胚胎细胞凋亡情况,同时用Real time RT-PCR检测热应激蛋白基因Hsp70和凋亡相关基因Bax在2个培养组的相对表达水平。两组的卵裂率分别为85.6%和87.0%、囊胚率分别为22.9%和27.1%,差异都不显著(P>0.05),但G1.5/G2.5组的8-细胞形成率显著高于mSOF组(P<0.05);mSOF组凋亡率为12.1%±1.9%,显著高于G1.5/G2.5组(P<0.05),G1.5/G2.5组的Hsp70和Bax相对表达量显著低于mSOF组(P<0.05)。结果表明,G1.5/G2.5培养液更有利于牛体细胞核移植胚胎的体外发育。