多浪羊NPTX1基因克隆、生物信息学分析及在初情期的表达研究

【目的】试验旨在克隆多浪羊神经元正五聚体蛋白1(neuronal pentraxin 1,NPTX1)基因CDS序列,利用生物信息学分析NPTX1蛋白的结构和功能,并研究其在多浪羊初情期启动过程中性腺轴不同组织中的表达规律。【方法】采集初情期前、初情期、初情期后健康雌性多浪羊的下丘脑、垂体、输卵管、卵巢、子宫组织,提取总RNA并反转录成cDNA,以初情期前下丘脑cDNA为模板,PCR扩增多浪羊NPTX1基因并克隆测序,对其进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR分析NPTX1基因在多浪羊下丘脑、垂体、卵巢、子宫、输卵管5个组织中的表达水平。【结果】克隆得到NPTX1基因长1 576 bp,其中CDS区序列为1 299 bp,与GenBank上预测的绵羊mRNA序列(登录号：XM＿005683183.3)相似性达99.85%。系统进化树分析得出,多浪羊NPTX1基因与绵羊的遗传距离最近,与鸡的遗传距离最远。生物信息学分析发现,NPTX1蛋白为不稳定的亲水性酸性蛋白,具有1个信号肽,属于分泌蛋白;二级结构中α-螺旋和无规则卷曲占比分别为41.90%和40.73%,与三级结构预测结果一致。...     

多浪羊MHC-DRB1基因巢式PCR-RFLP多态性分析

应用巢式PCR-RFLP方法,对200只多浪羊的MHC-DRB1外显子2的遗传多态性进行检测,并对基因型频率和等位基因频率进行统计。结果表明:多浪羊的MHC-DRB1基因外显子2在SacII和MvaⅠ的酶切位点存在多态性,分别检测出了2、2种等位基因,出现了3、3种基因型。由于MHC-DRB 1为多碱基突变的基因位点,综合2种限制性内切酶的酶切结果,在多浪羊中共发现6种基因型;平均杂合度和多态信息含量处于中等多态程度,χ2适合性检验结果表明,多浪羊的MHC-DRB 1外显子2在MvaⅠ酶切位点达到Hardy-Weinberg平衡(P0.05),但Sac II酶切位点未达到Hardy-Weinberg平衡(P0.01)。     

多浪羊MHC-DRB1基因多态性与包虫病抗性分析

通过PCR扩增122只包虫病(细粒棘球蚴病)阴性和70只包虫病阳性多浪羊的MHC -DRB1第2外显子,产物经SacⅠ、Hin1Ⅰ和HaeⅢ3种限制性内切酶酶切后进行RFLP多态性分析.结果表明,多浪羊MHC-DRB1基因第2外显子在SacⅠ、Hin1Ⅰ和HaeⅢ酶切位点存在丰富的多态性,分别检测出了2、2和6种等位基因,出现了3、3和18种基因型.将包虫病阴性和阳性多浪羊的等位基因频率和基因型频率分别进行比较分析,发现等位基因HaeⅢ a对包虫病感染具有一定的易感性(P＜0.05),SacⅠab和Hin1Ⅰaa 2个基因型对包虫病具有一定的抗性(P＜0.05), HaeⅢbe和HaeⅢef这2个基因型对包虫病具有较强的易感性(P＜0.01).     

BMPR-IB基因作为新疆多浪羊多胎性能候选基因的研究

以控制Booroola Merino羊多胎性能的BMPR-IB基因作为候选基因。从分子水平上研究新疆多浪羊是否存在该基因的突变。实验结果表明：BMPR-IB基因在多浪羊上存在B＋型（突变杂合子），但没有检测到BB型（突变纯合子），多浪羊主要以＋＋型（正常个体）为主，B＋型频率为0．35，＋＋型频率为0．65，初步推断可能多浪羊的遗传机制和Booroola Merino羊相同。     

萨福克羊与多浪羊杂交效果研究

为评价多浪羊的杂交改良效果,试验采用人工授精技术,选择多胎萨福克公羊与多浪羊母羊进行杂交(萨多一代),以多浪羊纯繁为对照组,测定母羊的产羔率,0～8月龄羔羊体重和日增重,8月龄羔羊的体尺、屠宰性能和肉品质指标。结果表明,杂交组母羊的产羔率略高于多浪羊。萨多F₁羔羊的初生重、6月龄体重和8月龄体重均显著高于多浪羊(P<0.05),3月龄体重极显著高于多浪羊(P<0.01),0～8月龄羔羊的平均日增重比多浪羊高37.60 g(P<0.05)。8月龄萨多F₁羔羊的胸围、胸宽均显著高于多浪羊(P<0.05),屠宰率、胴体重和净肉重比多浪羊分别高2.38个百分点(P<0.05)、6.44 kg(P<0.01)、5.77 kg(P<0.01),尾脂率比多浪羊低7.01个百分点(P<0.01),羊肉脂肪含量极显著低于多浪羊(P<0.01),羊肉辛酸、α-亚麻酸、r-亚麻酸和花生四烯酸的含量均显著高于多浪羊(P<0.05)。结果提示多胎萨福克羊与多浪羊杂交改良效果显著。     

多浪羊PROKR2基因克隆、生物信息学及组织差异表达分析

【目的】克隆多浪羊促动力素受体2(prokineticin receptor 2,PROKR2)基因,并检测初情期启动过程中PROKR2基因在多浪羊不同组织中的表达水平,为探究PROKR2基因在绵羊初情期启动过程中的作用提供依据。【方法】以初情期后多浪羊下丘脑cDNA为模板,PCR扩增PROKR2基因并克隆测序。利用DNAMAN软件对测序结果进行拼接,采用MegAlign软件进行物种间相似性比对并构建系统进化树,并利用生物信息学软件预测多浪羊PROKR2蛋白理化性质和结构功能。使用实时荧光定量PCR技术检测PROKR2基因在多浪羊下丘脑、垂体、卵巢、输卵管及子宫中初情期前、初情期及初情期后的表达水平。【结果】克隆获得PROKR2基因序列大小为2 641 bp,包括5′-UTR 143 bp、3′-UTR 1 343 bp和CDS区1 155 bp,编码384个氨基酸,与GenBank中绵羊预测mRNA序列(登录号：XM＿004014342.5)相似性为99.83%。系统进化树表明,多浪羊PROKR2基因的遗传距离与山羊最近,与鸡最远。生物信息学分析表明,PROKR2蛋白为疏水稳定碱性蛋...     

萨福克羊与本地卡拉库尔羊、多浪羊杂交试验研究

通过国外优良肉用羊品种萨福克羊作为杂交父本,分别与本地卡拉库尔羊和多浪羊的母羊进行二元杂交,生产杂交一代商品肉羊.以本地绵羊作为对照组,观察各组合杂交一代羔羊初生重、4月龄、6月龄的体重和4月龄的体尺.试验结果表明,杂交一代羊初生重大、生长发育显著快于本地卡拉库尔和多浪羊,肉用经济效益有明显的提高.     

新疆多浪羊的研究进展及产业发展思考

新疆多浪羊是新疆喀什地区的特色品种,是新疆乡村振兴重点发展的优势产业。多浪羊及其产品深受新疆地区农牧民和消费者的喜爱。文章主要对新疆多浪羊的生长特性、生产特性、杂交利用和多胎基因的研究等方面进行综述,通过分析新疆多浪羊目前的研究情况与进展,提出多浪羊进一步的研究方向,旨在更好地促进地区多浪羊的产业发展。     

多浪羊GnRHR基因克隆、初情期组织表达研究及生物信息学分析

本研究旨在克隆多浪羊GnRHR(Gonadotropin Releasing Hormone Receptor,GnRHR)基因编码区,并用得到的CDS序列进行生物信息学分析,同时测定与繁殖相关组织中GnRHR基因的表达情况。利用RT-PCR和TA克隆的方法获得多浪羊GnRHR基因的编码区域,采用实时荧光定量PCR方法检测GnRHR基因在多浪羊初情期前、初情期和初情期后下丘脑、垂体、子宫、卵巢和输卵管5种组织的表达情况。本研究成功克隆获得多浪羊GnRHR基因编码区域。多浪羊GnRHR基因CDS序列长987 bp,编码328个氨基酸,与绵羊的同源性最高;对该序列进行生物信息学分析显示该蛋白分子式为C₁₇₆₂H₂₆₉₆N₄₃₂O₄₄₆S₂₀;理论等电点(pI)为9.39;不稳定指数为32.51,为稳定疏水性蛋白;具有7个跨膜区域;二级结构主要为α-螺旋及无规则卷曲。荧光定量PCR检测到多浪羊GnRHR基因在初情期及初情期前后3个时期5种组织均有表达,垂体和卵巢高表达;初情期时垂体相...     

多浪羊与塔什库尔干羊杂交效果研究

在喀什地区以地方优良肉羊品种多浪羊为父本,塔什库尔干羊(下面简称塔羊)为母本,进行杂交试验。结果表明:半舍饲的粗放饲养管理的条件下,杂交一代早期生长发育、产肉性能均高于塔羊,在当地的放牧适应性、耐粗饲、抗病力优于多浪羔羊。初步认为多浪羊是开展肉羊生产品种中较理想的父本品种。     

多浪羊细管冷冻精液制作技术的研究

为保存和利用优秀地方品种多浪羊的遗传资源,试验在多浪羊原产地进行了细管冻精制作试验.用采集的多浪羊种公羊精液,比较5种冻精保存液配方的细管冻精冷冻效果,测定解冻后精子活力.结果表明:4.83%乳糖保存液解冻后精液的活率平均为36% ,优于其它4种保存液,且差异极显著(P<0.01),解冻后精子的畸形率也均低于其它4种稀释液,差异极显著(P<0.01).表明4.83%的乳糖保存液配方是理想的绵羊细管冻精稀释液.     

肌间脂肪沉积能力相关基因在前脂肪细胞分化前后的差异表达

研究表明,HBA、HBB、MB、HSPB1、MSRA、TCAP、TXN、PSMA1、GSTM1、COX6B1、VDAC1等基因在具有不同脂肪沉积程度的牛肉中存在差异表达,并对肌肉中脂肪的沉积情况具有潜在的影响。本研究以牛前体脂肪细胞为研究对象,诱导其分化为成熟脂肪细胞,通过实时荧光定量PCR检测上述基因在前体脂肪细胞分化前后的表达情况,通过油红O检测脂类沉积情况。结果表明,PSMA1、HBB、COX6B1、TCAP、MB、HBA、TXN、GSTM1、MSRA、HSPB1在前体脂肪细胞分化后表达量上升,而VDAC1表达量下降,前体脂肪细胞分化后脂质沉积明显加大,说明这些基因可能在调节前体脂肪细胞分化、脂质沉积中具有潜在作用。     

多浪羊BMP7基因克隆、生物信息学分析及其在不同初情期阶段组织表达分析

【目的】对多浪羊骨形态发生蛋白-7(bone morphogenetic protein-7,BMP7)基因序列进行克隆和生物信息学分析,并检测多浪羊在初情期3个阶段5个组织中的表达规律,为探究BMP7基因在多浪羊初情期中的生物学功能提供参考。【方法】采用PCR扩增多浪羊BMP7基因序列并克隆测序,利用Mega 7.0软件构建系统发育树,利用生物信息学软件分析BMP7蛋白的理化性质和结构功能;采用实时荧光定量PCR检测BMP7基因在初情期前、初情期、初情期后多浪羊下丘脑、垂体、卵巢、输卵管、子宫5个组织中的表达量。【结果】试验成功获得多浪羊BMP7基因序列长1 334 bp,其中编码区长1 296 bp,编码431个氨基酸,与绵羊和牛的亲缘关系最近,其次是人、猴、马,与小鼠和犬的亲缘关系最远。生物信息学分析显示,BMP7蛋白分子式为C₂₂₀₀H₃₃₇₄N₆₃₂O₆₂₈S₁₇,理论等电点(pI)为8.17,原子总数为6 851个,不稳定指数为53.18,脂溶性系数76.96,总平...     

新疆多浪羊品种资源的保护与开发利用

多浪羊是新疆地方优良肉用羊品种之一。多年来，由于人为选择的削弱，混养串配，缺乏应有的本品种选育和保种措施，多浪羊存栏数量增长缓慢。另外，从国内外引进的肉用羊品种越来越多，杂交串配愈采愈严重，致使多浪羊的品种特征、特性混杂和退化。因此，必须建立和完善多浪羊遗传资源保护体系，把保种与开发有机结合起来，开创多浪羊品种资源保护可持续发展的新途径。     

多浪羊一年两产繁育技术的初步研究

采用孕酮阴道栓和孕马血清促性腺激素相结合的方法对秋季空怀和春季早期断奶的多浪羊母羊进行同期发情处理,探讨综合性频密繁育技术。结果表明:在一年两产的频密繁育过程中,秋季空怀母羊与春季早期断奶母羊同期发情率无显著性差异(97.2%vs 96.0%)(P>0.05);分别对上述同期发情的母羊实施人工授精,受胎率有显著性差异(82.9%vs 54.0%)(P<0.05);平均产羔数(1.4 vs1.3)及产双羔母羊比率(37.9%vs 26.7%)均无显著性差异(P>0.05)。试验证明,对多浪羊母羊实施频密繁育技术处理,可以实现一年两次产羔,提高母羊的生产性能。     

营养及外源激素对多浪羊繁殖性能影响的研究

试验于2010年7月-2011年2月在阿克苏地区阿依库勒镇多浪羊养殖户羊舍进行.研究日粮不同营养水平和外源激素对多浪羊繁殖性能及血液生化指标的影响.将78只多浪羊母羊按年龄、体质量、胎次和断奶时间相近的原则随机分成3组,即对照组为自然发情组,按当地常规饲养方式饲养,不做任何激素处理;试验1组为营养调控组,饲喂含高能中蛋白、维生素和微量矿物元素的日粮;试验2组为外源激素处理组,使用孕酮海绵阴道栓( PRID),撤栓同时注射孕马血清促性腺激素(PMSG)和人绒毛膜促性腺激素(HCG)500 IU/只.同时于试验开始第20天和配种后第10天,分别从各组随机抽取10只母羊进行空腹采血,测定9项血清生化指标的含量.试验结果表明:(1)对照组和试验1组的发情率为96％,低于试验2组;对照组的受胎率为92％,高于试验1组,低于试验2组;对照组产羔率为121.7％,低于试验1组和2组;试验1组和2组的多羔率显著高于对照组;(2)在高能中蛋白日粮的基础上,添加维生素和矿物元素,可以提高母羊的受胎率、产羔率和多羔率;在高能中蛋白日粮的基础上,使用外源激素PRID+PMSG+HCG处理,可以提高母羊发情率和产羔率,并达到产3羔的效果.     

PPP1CB基因多态性与西门塔尔牛肉质性状相关性分析

选用134头西门塔尔牛为试验材料,采用PCR-RFLP的方法对PPP1CB基因的第一内含子进行检测,利用SPSS软件对该基因内含子1的多态性与肉质性状进行相关性分析。分析结果表明:PPP1CB基因的第一内含子第14 434bp碱基处存在C/T基因突变,该基因多态性与屠宰率呈显著相关,对其他性状的影响差异不显著。本文首次揭示了PPP1CB基因与牛肉质性状的相关性,为西门塔尔牛利用该基因的多态性进行分子育种提供了试验依据。     

hMG与FSH配合孕激素对多浪羊同期发情比较研究

采用孕激素分别与hMG和FSH配合对多浪羊进行同期发情处理,研究不同激素组合的同期发情效果。将181只多浪羊随机分为3组,第1组64只采用孕激素+50 U FSH处理;第2组59只采用孕激素+15 U hMG处理;第3组58只采用孕激素+20 U hMG处理。结果表明:3组羊的发情率分别为93.75%、94.92%和98.28%;发情同期率分别为89.1%、91.5%和93.1%;撤栓到发情的间隔时间分别为49.60、44.79 h和44.79 h;发情持续期分别为30.6、33.43 h和29.57 h。各指标在3组间均无显著差异(P>0.05)。试验结果表明,用hMG可以代替FSH进行多浪羊的同期发情处理。     

巴什拜羊SPLUNC1基因的克隆与真核表达

为了克隆巴什拜羊SPLUNC1基因并表达该蛋白,本试验从巴什拜羊肺脏组织中提取总RNA,利用RT-PCR方法扩增出SPLUNC1基因开放阅读框序列,将该基因片段插入到真核表达质粒pPIC9K中构建pPIC9K-SPLUNC1重组质粒,然后将pPIC9K-SPLUNC1重组质粒线性化并电击转化入毕赤酵母GS115中,经甲醇诱导蛋白表达后用SDS-PAGE和Western blotting分析鉴定目的蛋白。结果表明,经RT-PCR扩增成功获得大小为748 bp的SPLUNC1基因;构建的pPIC9K-SPLUNC1重组质粒经PCR、酶切及测序鉴定与预期结果一致;SDS-PAGE及Western blotting检测鉴定结果表明获得大小为25.53 ku的SPLUNC1蛋白。本试验结果为进一步研究巴什拜羊SPLUNC1蛋白的生物学活性奠定基础。     

补饲矿物元素和维生素对多浪羊母羊繁殖性能影响的研究

2009年3月至10月,在新疆喀什地区麦盖提县多浪羊繁育基地,研究补饲矿物元素和维生素对多浪羊母羊繁殖性能的影响.将试验羊按年龄和体重配对分成3组:对照组(自然发情组),不做任何处理;试验Ⅰ组,在催情补饲阶段,每天每只羊补饲铜50 mg、碘50 mg、锌600 mg、硒2 mg,妊娠阶段每天每只羊补饲铜20 mg、碘2.5 mg、锌100 mg、硒0.5 mg;试验Ⅱ组,在催情补饲阶段,每天每只羊补饲维生素A 50万u、维生素E 800u,妊娠阶段每天每只羊补饲维生素A 5万u、维生素E 500 u.结果表明:①气温升高会降低多浪羊的发情率和受胎率;②补饲VA和VE或矿物元素铜、锌、硒、碘会提高多浪羊的产双羔率,特别是补饲VA和VE对提高双羔率效果明显.