重组猪生长激素对猪脂肪组织GH-R、IGF-1、IGF-R和Leptin基因表达的影响

选用体质量 5 0 kg左右的去势长白×大约克公猪 16头 ,随机分为试验组和对照组 ,试验组猪每日肌肉注射重组猪生长激素 (rp GH) 4 m g/头 ,2 8d后屠宰采集背部皮下脂肪 ,用 RT- PCR方法 ,以 18S r RNA作内标 ,定量分析脂肪组织中生长激素受体 (GH- R)、胰岛素样生长因子 - 1(IGF- 1)、胰岛素样生长因子 型受体 (IGF- R)和瘦蛋白(L eptin)的 m RNA丰度。结果显示 ,试验猪脂肪细胞 GH- R m RNA丰度比对照猪增加了 5 0 .9% (P<0 .0 5 ) ,IGF- 1m RNA丰度增加 2 7.8% (P<0 .0 5 ) ,IGF- R m RNA丰度增加 4 8.1% (P<0 .0 1) ,而 L eptin m RNA丰度则比对照猪减少 2 8.2 % (P<0 .0 5 )。结果提示 ,生长激素不仅可以直接调节脂肪组织 ,还可能通过脂肪 GH- R介导产生 IGF- 以旁 (自 )分泌形式调节脂肪组织的代谢     

转pGH IGF-1基因对猪生长和繁殖性能的影响

为了解转双基因在猪生长发育中作用及意义,选取23头健康仔猪,其中转p GH、IGF-1双基因猪4头,转p GH基因猪12头,非转基因猪7头,研究p GH、IGF-1基因对猪生长和繁殖性能的影响。结果表明,转p GH、IGF-1双基因猪个体均重比转p GH单基因猪高2.83%,差异显著(P0.05);转双基因猪比非转基因猪高7.37%,差异显著(P0.05)。转双基因猪体重达100 kg的日龄比转单基因猪少8.93 d,差异显著(P0.05),转双基因猪比非转基因猪少12.23 d,差异显著(P0.05),转单基因猪比非转基因猪少3.30 d,差异不显著(P0.05);转双基因公猪的精液量,分别比转p GH单基因公猪与非转基因公猪提高27.61%、18.31%,差异均显著(P0.05);精子密度,三者之间差异均不显著(P0.05);转双基因公猪与非转基因猪的精子活力之间差异不显著(P0.05);转单基因公猪畸形率分别比转双基因公猪、非转基因猪高23%、18%,差异均显著(P0.05)。为进一步分析p GH-IGF-1生长轴对家猪生产性能的具体影响提供参考依据,也为转基因技术的推广与应用提供有力依据。     

摘除卵巢对布尔山羊杂种母羊组织IGF-I和IGF-1R基因表达的影响

为了研究卵巢摘除对布尔山羊杂种母羊类胰岛素样生长因子1(ginsulin-like growth factor 1,IGF-1)和类胰岛素样生长因子1受体(ginsulin-like growth factor 1receptor,IGF-1R)基因表达的影响。本试验将体质量相近的5月龄布尔山羊杂种母羊作为研究对象,随机分为处理组和对照组,每组20只。试验开始时摘除处理组母羊的卵巢,对照组不摘除。饲养50d后,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)相对定量方法检测肝脏、背最长肌、股二头肌和肾周脂肪中IGF-1和IGF-1R基因mRNA的相对表达量。卵巢摘除后母羊背最长肌和肝脏组织中IGF-1基因mRNA的相对表达量分别是对照组的6.19倍和6.01倍(P<0.01);IGF-1R基因表达量分别是对照组的11.86倍和9.96倍(P<0.01)。处理组母羊股二头肌中IGF-1基因mRNA的相对表达量与对照组差异不显著(P>0.05);IGF-1R基因是对照组的4.86倍,且差异显著(P<0.05)。在肾周脂肪组织中,处理组母羊IGF-1基因和IGF-1R基因mRNA的相对表达量较对照组增加,但差异均不显著(P>0.05)。由此可见,卵巢摘除可以上调背最长肌和肝脏中IGF-I和IGF-IR基因的表达以及股二头肌中IGF-IR基因的表达。     

日粮铜对猪生长性能及血清GH、INS、IGF-I、IGFBP3水平的影响

选用60头断乳"军牧1号"白猪,分成6组,每组10头,分别饲以添加0、100、150、200、250、300 mg/kg铜(硫酸铜)的日粮,进行为期80 d的饲养试验,定期称重、采血,观测铜对仔猪生长性能及血液GH、INS、IGF-I、IGFBP3的影响.结果表明基础日粮中添加100～300mg/kg铜均能促进仔猪的生长,降低饲料消耗,其中以250mg/kg铜和第40～60天最为显著(P＜0.01).高剂量铜能显著提高循环血液中GH、INS、IGF-I、IGFBP3的水平,其中以添加250mg/kg铜水平,于试验期第20～40天最为明显(P＜0.01).高铜促生长作用显然是通过促进GH、INS、IGF-I的合成和分泌而实现的.     

基因重组猪生长激素对不同杂交肥育猪组织中IGF-ImRNA和IGF-I影响的研究

选用长雅和长约去势公猪各12头 ,按2×2因子设计 ,每头每天分别注射基因重组猪生长激素4mg或0mg28天 ,测定生长激素对组织中IGF -ImRNA和IGF -I的影响。结果表明 ,基因重组猪生长激素分别提高长雅和长约去势公猪血浆和半腱肌中IGF -ImRNA含量53.38 %～97.50 %和40.47 %～106.79 % ;分别提高血浆和半腱肌中IGF -I含量44.21 %～72.04 %和56.03 %～58.32 %。血浆与肌肉中IGF -ImRNA、IGF -I具有显著的正相关关系。外源生长激素对肌肉中IGF -ImRNA和IGF -I的影响 ,具有显著的杂交类型效应     

五指山猪8种组织IGF2和IGFBP3基因表达的发育性变化研究

采用Q-PCR 技术检测了胰岛素样生长因子2(IGF2)和胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)基因在30、60、90、120 和150 日龄五指山猪心脏、肝脏、肺脏、脾脏、肾脏、肌肉、胃脏和小肠等8种组织中的mRNA表达水平.结果表明:(1)IGF2基因在8种组织中的表达呈相似的变化规律:各组织mRNA表达量随着日龄的增加而降低,30日龄时表达量最高,150龄时表达量最低,差异显著(P<0.01);(2)IGFBP3基因在心脏、肺、脾脏、肾脏、肠、胃等组织中的mRNA表达规律相似:即从30～150日龄,依次递减;而肝脏和肌肉mRNA表达从30日龄开始上升,肝脏在90日龄达最高,肌肉在60日龄时达最高,随后二者开始下降,在150日龄时达最低水平.以上结果初步揭示了五指山猪IGF2和IGFBP3基因表达的发育性变化模式,为深入研究五指山猪生长发育及矮小性状形成机理提供了基础数据.     

铜对体外仔猪软骨细胞增殖和自分泌IGF-、IGFBP_3的影响

体外分离、培养仔猪关节软骨细胞 ,然后在细胞培养液中分别添加 0、7.8、15 .6、31.2、6 2 .5 μm ol/ L 铜。结果表明 ,软骨细胞在 4种浓度的铜中可存活并增殖 ,而且能增加胰岛素样生长因子 (IGF- )、胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP3 )的分泌量。但随铜浓度的增加 ,其存活率、增殖率、3 H- Td R掺入率及 IGF- 、IGFBP3 的分泌量有明显的差异。且以培养液中添加 31.2μmol/ L铜对软骨细胞的增殖作用最强 ,增殖率、3 H- Td R掺入数、IGF- 、IGFBP3 的分泌量显著高于对照组 (P <0 .0 1)。表明 31.2 μmol/ L 铜浓度是促进体外软骨细胞增殖和自分泌 IGF- 、IGFBP3 的最适浓度。     

铜对体外仔猪软骨细胞增殖和自分泌IGF-Ⅰ、IGFBP3的影响

体外分离、培养仔猪关节软骨细胞,然后在细胞培养液中分别添加0、7.8、15.6、31.2、62.5μmol/L铜.结果表明,软骨细胞在4种浓度的铜中可存活并增殖,而且能增加胰岛素样生长因子(IGF-Ⅰ)、胰岛素样生长因子结合蛋白(IGFBP3)的分泌量.但随铜浓度的增加,其存活率、增殖率、3H-TdR掺入率及IGF-Ⅰ、IGFBP3的分泌量有明显的差异.且以培养液中添加31.2μmol/L铜对软骨细胞的增殖作用最强,增殖率、3H-TdR掺入数、IGF-Ⅰ、IGFBP3的分泌量显著高于对照组(P＜0.01).表明31.2μmol/L铜浓度是促进体外软骨细胞增殖和自分泌IGF-Ⅰ、IGFBP3的最适浓度.     

日粮铜对猪生长性能及血清GH、INS、IGF-Ⅰ、IGFBP_3水平的影响

选用 6 0头断乳“军牧 1号”白猪 ,分成 6组 ,每组 10头 ,分别饲以添加 0、10 0、15 0、2 0 0、2 5 0、30 0 mg/ kg铜 (硫酸铜 )的日粮 ,进行为期 80 d的饲养试验 ,定期称重、采血 ,观测铜对仔猪生长性能及血液 GH、INS、IGF- 、IGFBP3 的影响。结果表明 :基础日粮中添加 10 0～ 30 0 m g/ kg铜均能促进仔猪的生长 ,降低饲料消耗 ,其中以 2 5 0 m g/ kg铜和第40～ 6 0天最为显著 (P<0 .0 1)。高剂量铜能显著提高循环血液中 GH、INS、IGF- 、IGFBP3 的水平 ,其中以添加 2 5 0mg/ kg铜水平 ,于试验期第 2 0～ 40天最为明显 (P<0 .0 1)。高铜促生长作用显然是通过促进 GH、INS、IGF- 的合成和分泌而实现的。     

IGF1R和IGF2R基因在鸭脂肪组织中的发育表达模式比较

为比较胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)和胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)在鸭脂肪组织发育中的作用,利用RT-PCR技术,扩增出鸭IGF1R、IGF2R部分编码区序列,并采用荧光定量PCR检测IGF1R、IGF2R基因mRNA丰度在1～8周龄鸭腹脂、背皮和肝脏中的表达变化。成功获得了鸭IGF1R和IGF2R部分序列,长度分别为798 bp和716bp。腹脂中IGF1R和IGF2R基因的表达都呈先上升后下降的变化规律,4周龄时表达量最高;皮下脂肪中IGF1RmRNA的表达规律是在1周龄时极显著高于其他各时间点(P<0.01),2周龄时显著下降,随后缓慢上升到4周龄时达到最高,之后又逐渐下降。IGF2R mRNA的表达水平呈先上升后波动下降的趋势,以4周龄时表达量为最高,5～8周龄时波动下降;肝脏中IGF1R和IGF2R基因的表达规律相似,表达量总体都呈现1周龄后急剧下降而后平稳的趋势。综合上述结果可知,IGF1R和IGF2R基因对肝脏的脂肪合成以及肝外脂肪组织增殖、分化的调控具有差异性。     

饲粮能量水平对乌金猪脂肪组织脂类分解代谢相关基因表达的影响

本试验旨在研究饲粮不同能量水平对乌金猪脂肪组织脂类分解代谢相关基因表达的影响.选取体重约15 kg的乌金猪54头,随机分为3组,每组3个重复,每个重复6头猪,分别饲喂消化能为11.74(低能组)、12.89(中能组)和14.22 MJ/kg(高能组)的饲粮,在体重30、60和100 kg时屠宰取皮下脂肪组织,提取总RN...     

UCP3基因在巴马猪和藏猪脂肪组织中的表达和甲基化分析

为探究解偶联蛋白3（uncoupling protein 3,UCP3）基因在巴马猪和藏猪皮下脂肪组织中的表达和甲基化水平,试验采用实时荧光定量PCR技术检测UCP3基因在巴马猪和藏猪皮下脂肪组织中的mRNA表达水平;针对猪UCP3基因启动子区域（-3 580~+920 bp）,利用在线软件MethPrimer对该区域进行CpG岛预测,并采用亚硫酸氢盐测序法（bisulfite sequencing PCR,BSP）检测其甲基化水平,探究UCP3基因甲基化水平在巴马猪和藏猪中的差异。结果显示,巴马猪皮下脂肪组织UCP3基因表达量显著高于藏猪（P<0.05）;在UCP3基因启动子区预测到3个CpG甲基化岛,分别是CpG island1（-3 171~-2 928 bp）、CpG island2（-154~-2 bp）和CpG island3（+648~+806 bp）,其中CpG island1和CpG island3的甲基化水平在巴马猪和藏猪中差异较小,而藏猪CpG island2的甲基化水平（42.61%）高于巴马猪（24.49%）。本研究绘制了2个猪种CpG island2甲基化水平的黑白点图,其中CpG位点为4、8、9、10、11、12、15,藏猪甲基化频率分别比巴马猪高28.26%、17.39%、26.09%、26.09%、26.09%、23.91%和34.78%。在CpG island2处预测到3个转录因子结合位点（SP2、PPARγ和EGR1）。结果表明,巴马猪和藏猪皮下脂肪组织中UCP3基因mRNA水平的表达差异可能是由于CpG island2的甲基化水平不同所导致,藏猪DNA甲基化水平在一定程度上阻碍了转录因子与启动子调控区域的结合,从而抑制了UCP3基因的表达。     

金华猪生长激素基因的多态性及其对经济性状的影响

采用PCR-RFLP-ApaⅠ方法检测金华猪Ⅰ系(154头)、Ⅱ系(41头)和Ⅲ系(53头)GH基因-119～+486bp片段的多态性,发现2个等位基因:A(449bp)和B(316+133bp)。其中A基因频率在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ系中分别为0.60、0.14和0.44;B分别为0.40、0.86和0.56。用线性模型分析各基因型对金华猪部分经济性状的影响。结果表明:GH基因ApaⅠ酶切位点多态性对金华猪经产胎次的总产仔数、产活仔数和初生窝重影响极显著(P<0.01)。     

早期饲喂沙棘提取物对猪生长性能、肉品质和血清Leptin水平及脂肪Leptin mRNA表达的影响

本试验旨在研究早期饲喂沙棘提取物对猪生长性能、肉质、血清leptin水平及脂肪组织leptin表达的影响.选用(28±2)日龄断奶的长白×大白二元杂交仔猪24头,随机分成试验组和对照组,每组3个重复,每重复4头猪(公母各1/2).第一阶段对照组饲喂基础日粮,试验组日粮在其基础上添加0.1%沙棘提取物,于57日龄起第二阶段全部饲喂基础日粮,至180日龄结束试验.运用荧光相对定量PCR测定脂肪中leptin mRNA表达量,以及沙棘提取物对肉质和血清leptin水平的影响.结果表明,早期饲喂沙棘提取物可显著提高试验组肥育猪眼肌面积(P<0.05),降低背膘厚和肌内脂含量(P<0.05);试验组仔猪血清leptin水平显著高于对照组(P<0.05),而肥育猪的试验组与对照组尤显著差异(P>0.05);试验组肥育猪背部皮下脂肪和肠系膜脂肪leptin mRNA表达量显著低于对照组(P<0.05),腹部皮下脂肪leptin mRNA表达量高于对照组,差异极显著(P<0.01).脂肪leptin mRNA表达量与血清leptin水平呈极显著负相关(P<0.1);对照组脂肪leptin mRNA表达量与背膘厚、眼肌面积和肌内脂呈显著相关(P<0.05).综合分析认为,在断奶仔猪口粮中添加0.1%沙棘提取物町通过影响脂肪leptin mRNA表达量及血清leptin水平,改变与肉质的相关系数,米改善肥育猪肉质特性.     

藏猪生长激素基因核苷酸多态性分析

本文应用PC R方法,体外扩增了藏猪5个个体的生长激素(GH)基因64～2022位之间1959 bp的片段(包含完整的5个外显子和4个内含子),并进行了序列测定。结合网上下载的猪GH基因同源区段序列进行比较分析,结果表明:藏猪GH基因有较丰富的核苷酸多态性;检出的24个核苷酸突变位点中有6个发生在外显子区,外显子2内有4个突变位点,导致2个氨基酸变异,外显子3和外显子4内各有一个突变位点,特别是外显子4内这个突变位点引起了1个氨基酸变异;单核苷酸转换(21个位点)大于颠换(5个位点)。     

Recombinant Porcine Leptin Reduces Feed Intake and Stimulates Growth Hormone Secretion in Swine

Two experiments (EXP) were conducted to test the hypothesis that porcine leptin affects GH, insulin-like growth factor-I (IGF-I), insulin, thyroxine (T₄) secretion, and feed intake. In EXP I, prepuberal gilts received intracerebroventricular (ICV) leptin injections. Blood was collected every 15 min for 4 hr before and 3 hr after ICV injections of 0.9% saline (S; n = 3), 10 μg (n = 4), 50 μg (n = 4), or 100 μg (n = 4) of leptin in S. Pigs were fed each day at 0800 and 1700 hr over a 2-wk period before the EXP. On the day of the EXP, pigs were fed at 0800 hr and blood sampling started at 0900 h. After the last sample was collected, feeders were placed in all pens. Feed intake was monitored at 4, 20, and 44 hr after feed presentation. In EXP II, pituitary cells from prepuberal gilts were studied in primary culture to determine if leptin affects GH secretion at the level of the pituitary. On Day 4 of culture, 10⁵ cells/well were challenged with 10⁻¹², 10⁻¹⁰, 10⁻⁸, or 10⁻⁶ M [Ala¹⁵]-h growth hormone-releasing factor-(1-29)NH₂ (GRF), 10⁻¹⁴, 10⁻¹³, 10⁻¹², 10⁻¹¹, 10⁻¹⁰, 10⁻⁹, 10⁻⁸, 10⁻⁷, or 10⁻⁶ M leptin individually or in combinations with 10⁻⁸ and 10⁻⁶ M GRF. Secreted GH was measured at 4 hr after treatment. In EXP I, before injection, serum GH concentrations were similar. Serum GH concentrations increased (P < 0.01) after injection of 10 μg (21 ± 1 ng/ml), 50 μg (9 ± 1 ng/ml), and 100 μg (13 ± 1 ng/ml) of leptin compared with S (1 ± 2 ng/ml) treated pigs. The GH response to leptin was greater (P < 0.001) in 10 μg than 50 or 100 μg leptin-treated pigs. By 20 hr the 10, 50, and 100 μg doses of leptin reduced feed intake by 53% (P < 0.08), 76%, and 90% (P < 0.05), respectively, compared with S pigs. Serum IGF-I, insulin, T₄, glucose, and free fatty acids were unaffected by leptin treatment. In EXP II, relative to control (31 ± 2 ng/well), 10⁻¹⁰, 10⁻⁸, and 10⁻⁶ M GRF increased (P < 0.01) GH secretion by 131%, 156%, and 170%, respectively. Only 10⁻⁶ M and 10⁻⁷ M leptin increased (P < 0.01) GH secretion. Addition of 10⁻¹¹ and 10⁻⁹ M leptin in combination with 10⁻⁶ M GRF or 10⁻¹¹ M leptin in combination with 10⁻⁸ M GRF-suppressed (P < 0.05) GH secretion. These results indicate that leptin modulates GH secretion and, as shown in other species, leptin suppressed feed intake in the pig.     

金华猪PPARGC1A基因克隆、生物信息学分析及组织表达研究

试验旨在研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子1α（PPARGC1A）在金华猪和大白猪中的遗传特征和表达情况,探究PPARGC1A基因在mRNA水平和蛋白质水平的表达模式。以金华猪和大白猪为试验动物,分别提取背脂组织的总RNA,根据GenBank中公布的猪PPARGC1A基因序列（登录号：NM_213963.2）设计编码区和实时定量PCR引物,以猪GAPDH基因和β-actin蛋白作为内参,应用多种生物信息学方法对PPARGC1A基因编码蛋白进行功能分析,并通过实时荧光定量PCR及Western blotting检测其在金华猪背脂中的表达水平。结果表明,金华猪PPARGC1A基因CDS区全长2 361 bp,编码786个氨基酸,该蛋白分子大小90 336.01 u,其中丝氨酸（ser）所占比例最高（13.7%）,色氨酸（Trp）所占比例最低（0.8%）。同源性比对结果显示,金华猪PPARGC1A基因与山羊、牛和绵羊的同源性较高,分别为95.0%、94.9%和94.9%,在物种进化中具有较强的保守性;金华猪PPARGC1A蛋白不稳定指数为74.88,属于不稳定亲水蛋白,无跨膜结构,其二级结构由α-螺旋、延伸链、β-转角及无规则卷曲4种结构组成,所占比例分别为26.59%、5.73%、5.73%和61.96%,PPARGC1A蛋白同源建模经折叠、弯曲等一系列复杂的过程获得三级结构模型;实时荧光定量PCR试验和Western blotting试验结果一致,显示PPARGC1A基因在背脂较厚的金华猪中表达量显著低于瘦肉型的大白猪（P<0.05）。本研究为探明PPARGC1A基因对猪脂肪沉积的分子生物学功能提供了理论基础。     

重组人生长激素对幼麝鼠性腺发育影响的研究

本文探索了重组人生长激素（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｈｕｍａｎｇｒｏｗｔｈｈｏｒｍｏｎｅ,ｒｅｈＧＨ）对幼麝鼠生殖系统发育的影响。结果表明,ｒｅｈＧＨ使试验组麝鼠睾丸间质细胞和精原细胞数量明显增加,曲细精管内的初级精母细胞数量（５６７５,５８５０和１０５０个／标准口径曲细精管,Ｐ＜００１）显著增加;试验组卵巢中生长卵泡数量较多,而且有发育后期的卵泡,对照组卵巢中则没有这种卵泡。     

昆明犬IGF-1基因CDS区克隆、生物信息学分析及组织表达研究

试验旨在系统研究昆明犬胰岛素样生长因子1（insulin-like growth factor-1,IGF-1）基因的结构和功能,揭示该基因的组织表达规律,为探讨工作犬体型及生长发育性状提供基本数据。以昆明犬为试验材料,运用分子克隆技术扩增IGF-1基因CDS区,应用生物信息学方法进行序列同源性比对并构建系统进化树;获得对应的氨基酸序列并分析蛋白理化特性及蛋白亚细胞结构、亲疏水性和磷酸化位点,利用SOPMA和SWISS-MODEL软件预测蛋白二级结构并构建蛋白质三级结构模型;同时利用实时荧光定量方法检测该基因在昆明犬各组织的表达情况。结果显示,昆明犬IGF-1基因CDS区长462 bp,编码153个氨基酸,其核苷酸序列与家犬的同源性较高（100%）,与小鼠和鸡的同源性较低（82.6%和81.2%）。IGF-1蛋白分子质量和理论等电点分别为16.97 ku和9.36,属亲水性分泌型蛋白,无跨膜结构,存在信号肽区域（第1-48位氨基酸）;亚细胞定位分析表明,IGF-1蛋白主要分布于细胞核（56.5%）及线粒体（17.4%）中;磷酸化位点分析发现,IGF-1蛋白存在15个磷酸化位点;该蛋白的二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主。组织表达显示,IGF-1基因在昆明犬不同组织中均有表达,尤其在脾脏、肝脏及肾脏中呈现高表达。本试验结果为今后深入研究IGF-1基因功能提供了理论参考,并为深入探讨IGF-1基因对昆明犬生长发育性状研究提供一定的基础资料。