添加咖啡因、亚牛磺酸对牛精子功能的影响

为研究获能液中添加咖啡因和亚牛磺酸对牛精子功能的影响,本研究将荷斯坦牛冻精解冻后分别添加在含不同浓度咖啡因(0、2.5、5.0、7.5mmol/L)或亚牛磺酸(0、5、10、20、40μmol/L)的获能处理液中,且每个处理组加入约200μL的精液,在CO_2培养箱里经上游处理45min,以评估咖啡因和亚牛磺酸对牛精子活力、顶体及质膜完整性的影响,进而探讨在获能液中亚牛磺酸替代咖啡因的效果。结果显示,添加2.5、5.0mmol/L咖啡因组经上游法获能处理后的牛精子活力和顶体完整率均显著高于对照组(P0.05),且2.5mmol/L咖啡因组精子活力最高;添加10、20μmol/L亚牛磺酸组经上游法获能处理后的牛精子活力、顶体完整率和质膜完整率均显著高于对照组(P0.05),且20μmol/L亚牛磺酸组的精子功能参数值最高;将筛选的最佳浓度2.5 mmol/L咖啡因和20μmol/L亚牛磺酸采用同样的方法处理,发现20μmol/L亚牛磺酸组的精子顶体完整率和质膜完整率均显著高于2.5mmol/L咖啡因组和对照组(P0.05)。因此,20μmol/L亚牛磺酸可以替代2.5mmol/L咖啡因用于体外受精体系中的精子获能处理,有助于提高精子功能参数。     

添加咖啡因对解冻后牛精液品质的影响

<正> 为了提高冻精的使用效果,有人研究在精液、稀释液、解冻液中加入不同的添加物。日本的宫元、西川(1979)报道了牛冷冻精液解冻后添加不同浓度的咖啡因所得到的不同的生存指数表明咖啡因可以改善解冻后精子的某些性状。为了进一步探讨咖啡因对解冻后精子的作用和影响,我们在解冻液中加入不同浓度的咖啡因以观察精子某些生理生化指标的变化。 1.材料与方法 试验共分为4组,以2.9％柠檬酸钠为基础液分别配制成含有不同浓度咖啡因的解冻液,1组为对照,含量为0,2、3、4为试验组,含量分别为5、10和20mm,(咖啡因系用20％安那加,     

不同抗氧化剂对牛精子体外获能效果的影响

为探讨褪黑素、亚牛磺酸、左旋肉毒碱三种抗氧化剂对牛精子体外获能效果的影响,将荷斯坦牛细管冻精解冻后,各取200μL精液分别添加在含10~(-4) M褪黑素(MLT)、20μM亚牛磺酸(HT)、10 mM左旋肉毒碱(LC)的获能液中,经上游处理45 min,采用目测法、金霉素(CTC)染色法评估三种抗氧化剂对牛精子活力、精子获能状态的影响。结果表明:添加10~(-4) M MLT、20μM HT、10 mM LC经上游法获能处理后的牛精子活力(83.67%、80.65%、75.00%vs 66.67%)均显著高于对照组(P0.05),而顶体反应率(9.87%、10.09%、14.30%vs 18.73%)均显著低于对照组(P0.05)。另外,添加10 mM LC、10~(-4) M MLT组获能处理后B型精子所占比率(37.26%、29.84%vs 16.26%)均显著高于对照组(P0.05),且10 mM LC组精子获能率最高;而20μM HT组与对照组无明显差异(22.80%vs 16.26%,P0.05)。因此,添加10 mM LC、10~(-4) M MLT可改善精子体外获能效果,有助于提高体外受精的受精率及早期胚胎的质量。     

添加牛磺酸和黄芪多糖对羊精子低温保存的影响

为了研究羊精子低温保存时牛磺酸和黄芪多糖对精子质量的影响,本试验在BTS(Beltsville thawing solution)精液稀释液的基础上添加牛磺酸和黄芪多糖,随后对4℃低温保存条件下羊精子的精子活率、质膜完整率和顶体完整率进行考察,采用两因素五水平的中心设计法优化精子稀释液添加牛磺酸和黄芪多糖的浓度,并进一步验证经优化缓冲液的保护效果。结果显示,牛磺酸和黄芪多糖的最优添加浓度分别为27.83 mmol/L和346.91 mg/mL;采用该添加浓度能显著提高低温保存后羊精子的精子活率、质膜完整率和顶体完整率(P<0.05)。结果表明,牛磺酸和黄芪多糖对低温保存羊精子具有显著的保护作用。     

牛磺酸对牛体外受精早期胚胎发育的影响

研究了牛体外受精后早期胚胎体外发育时向其基础培养液中加入牛磺酸对胚胎桑椹胚率、囊胚率和孵化囊胚率的影响.试验1:以TCM-199 10?S为基础培养液(对照组),再加入7、14 mmol/L的牛磺酸(试验组),试验组与对照组的桑椹胚率分别为48.1%、47.4%和43.2%;囊胚率分别为26.4%、22.3%和21.0%;孵化囊胚率分别为21.8%、18.7%和0.试验2:IVF后2细胞、4～8细胞及8～16细胞期,在基础培养液中分别添加7 mmol/L的牛磺酸时,桑椹胚率分别为48.7%、57.1%和52.0%,囊胚率分别为25.1%、30.7%和27.9%,孵化囊胚率分别为25.9%、28.6%和25.0%;而添加14 mmol/L牛磺酸时,桑椹胚率分别为50.4%、56.4%和55.4%,囊胚率分别为26.5%、31.3%和27.7%,孵化囊胚率分别为27.5%、31.1%和29.9%.结果表明,体外发育培养液中添加7 mmol/L牛磺酸可显著提高桑椹胚率和囊胚率(P＜0.05),并且在4～8细胞期添加14 mmol/L牛磺酸最为合适.     

诱导牛精子体外获能的培养基及方法

用去透明带金黄地鼠异种精子体外穿透试验,检测冻精复苏经各种处理后的精子穿卵率。发现在４种基本培养基（ＢＯ、ｍＢＷＷ、ＴＹＨ、ＨａｍＦ１０＋ＲＰＭＩ－１６４０）中不加亚牛磺酸时,牛精子不能耐受较高浓度（４μｍｏｌ／Ｌ）钙离子载体（ＩＡ）的刺激（以１０ｍｉｎ计）;而低浓度ＩＡ（低于４μｍｏｌ／Ｌ）处理精子不能诱导获能。生物活性物质,如肝素、咖啡因、亚牛磺酸、肾上腺素单独或联合低浓度ＩＡ处理精子,短期（６ｈ）内也不能诱导获能。当基本培养基中含有亚牛磺酸时,牛精子能耐受高浓度ＩＡ（１０μｍｏｌ／Ｌ）的刺激,并使牛精子获能;亚牛磺酸与肾上腺素、咖啡因联合使用,并在获能液中添加透明质酸酶时,穿卵率进一步提高,获能效果显著改善。以ＨａｍＦ１０＋ＲＰＭＩ１６４０为主的混合培养基,在牛精子的存活时间、穿卵率等方面优于ＢＯ、ｍＢＷＷ、ＴＹＨ培养基。结果表明,用Ｆ１０和１６４０的混合培养基,添加亚牛磺酸、肾上腺素、咖啡因、透明质酸酶,经１０μｍｏｌ／ＬＩＡ处理牛精子１０～１５ｍｉｎ,是快速诱导牛精子体外获能的有效方法     

咖啡因对马鹿精子体外获能作用的研究

为研究不同浓度咖啡因对马鹿精子体外获能的作用,取健康马鹿冻精,分别以0、1.0、2.5、5.0、10.0 mmol/L咖啡因处理液作用精子,在孵育0、15、30、60、120、240 min的各个时间点取样,观察精子活力,并用考马斯亮蓝染色法检测各组精子的顶体反应(AR)。结果表明:咖啡因浓度为5.0 mmol/L时精子活力最高(80.19±0.52%),马鹿精子顶体反应率最高(61.94±1.50%),与对照组相比差异极显著(P<0.01),咖啡因作用30 min时各组的顶体反应率达到最高值。     

诱导牛精子体外获能方法的研究

用去透明带的金黄地鼠卵异种精子体外穿透试验,检测冻精复苏,经各种处理后的精子穿卵率,结果表明,B0培养基,经咖啡因2mmol/L,肝素50μg/ml处理,并添加亚牛磺酸70μmol/L和透明质酸酶1g/L,是诱导牛精子体外获能的有效方法。     

钙离子载体及咖啡因对绵羊精子获能的影响

通过添加不同浓度(0.05、0.1、0.2、0.5、1、5、10μmol/L)的钙离子载体(A23187,IA)及2 mmol/L咖啡因,探讨不同作用时间其对绵羊精子体外获能的影响。结果发现,IA浓度越高,精子的体外获能率越高,顶体反应率越低,活力越低,死精子就越多;而延长作用时间对获能、顶体反应的影响不明显。IA和咖啡因共同作用后,咖啡因能够促进IA诱导顶体反应的发生。建议用IA诱导绵羊精子获能时,其浓度以0.05~0.2μmol/L为宜,作用时间1 min。     

稀释液中添加不同浓度的维生素B12对牛精子活力的影响

为了阐明维生素B12对牛细管冷冻精液活力的影响，在常规稀释液中分别添加0．00％，0．25％，0．50％，0．75％，1．00％的VB12进行试验，比较结果：（1）平衡活力，0．50％组平衡活力高于对照组，差异显著（P＜0．05），0．75％组略高于对照组，差异不显著（P＞0．05），0．25％组与对照组相似，差异不显著（P＞0．05），1．00％组低于对照组，差异不显著（P＞0．05），（2）对解冻后的精子活力观察表明：添加0．50％VB12组的精子活力高于对照组，差异极显著（P＜0．01），0．75％组高于对照组，差异显著（P＜0．05），1．00％组低于对照组，差异不显著（P＞0．05），0．25％组的精子活力与对照组相似，差异不显著（P＞0．05）。     

不同温度对牛精子相关抗原11D基因的影响

为探讨高温对精子膜蛋白牛精子相关抗原11D （sperm associated antigen 11,SPAG11D）表达水平的影响,试验采用了实时荧光定量PCR和Western boltting方法检测了牛睾丸原代细胞和娟姗牛、槟榔江牛、西门塔尔牛的正常精子及低活力精子中SPAG11D的表达。结果显示,牛睾丸原代细胞在不同温度（32、34、36、38和40℃）下培养24 h,SPAG11D的mRNA及蛋白在36℃时表达水平最高,且高温时表达水平比低温时要高;培养48 h时,SPAG11D的mRNA表达基本和24 h相一致,但蛋白表达水平在高温时明显下降。此外,槟榔江牛和娟姗牛低活力精子中SPAG11D的蛋白表达量比正常精子明显降低,而在西门塔尔牛的精液中变化不明显。     

Effect of Temperature on Bovine Sperm Associated Antigen 11D Gene

To explore the influence of heat stress on the expression level of bovine sperm associated antigen 11D (SPAG11D),which was sperm membrane protein,the mRNA and protein expression levels of SPAG11D were tested in primary bovine testicular cells and sperm. The normal sperm and low activity sperm were collected from Jersey cattle, Bos bubalus and Simmental cattle. The results showed that mRNA and protein expression levels of SPAG11D were highest at 36℃ than others (32, 34, 38 and 40℃) after primary bovine testicular cells cultured for 24 h. And the mRNA and protein expression levels were higher in high temperature groups than low temperature groups. The mRNA expression of SPAG11D in 48 h was consistent with 24 h, but the protein expression levels decreased at high temperature (38 and 40℃). In addition, the protein expression of SPAG11D was lower in low activity sperm than in normal sperm (Jersey cattle and Bos bubalus), and there was no significant change in Simmental cattle sperm.     

牛精子体外获能的研究进展

文章从精子体外获能的分子机制和体外获能的影响因素等两个方面对牛精子体外获能的发展现状作了比较全面的概括.同时指出了各种处理精子方法的优缺点.并指出了牛精子体外获能的研究价值和意义.     

长时间现地保存解冻牛细管冻精检测研究

[目的]本文为了对条件差的养牛场(现地)解冻的细管冻精能长时间保存。[方法]做了2方面的实验研究:实验1:建立对解冻后的精子活力和细菌数2个关键检测指标方法的建立研究;实验2:设计冰水混合物及室温2种保存环境在不同时间对解冻后精子活力和菌落数的影响。[结果]表明:在室温保存2h精子活力差异不显著,2h后差异显著;解冻后精子在冰水混合物里保存4h活力和细菌数差异不显著,4h后细菌数增多,活力下降,差异显著。[结论]牛场要将解冻后精液保存在放到有冰袋的水里效果更好。     

牛精子冷冻损伤及其改善方法

牛精液冷冻与人工授精技术相结合,在牛品种改良、保护优良种质资源中发挥着重要作用。尽管冷冻后部分牛精子活力高达60%以上,但是冷冻后精子受损现象却普遍存在,尤其是受精能力与鲜精相比显著降低。作者详细介绍了冷冻-解冻过程对牛精子造成的主要损伤,包括精子的形态完整性、活力及遗传物质的改变等;阐述了冷冻造成精子损伤的主要原因,即细胞内冰晶形成和氧化应激反应及其产生的可能机制;并且对目前常用的提高冷冻精子质量的方法,如添加冷冻保护剂、优化冷冻程序以及添加抗氧化剂等进行了详细地综述;提出了在冷冻精液研究方面值得探索的问题,以期为家畜精液冷冻保存技术的进一步优化提供理论依据。     

牛卵母细胞浆内单精子注射的研究进展

卵母细胞浆内单精子注射（ICSI）技术是20世纪80年代发展起来的一种人工辅助生殖技术。目前，ICSI技术已经成功的用于生产试管婴儿，治疗人类的男性不育。在牛上，ICSI技术主要用于生产性控胚胎以及受精机理和转基因的研究。作者综述了牛ICSI技术的研究现状和研究进展，重点讨论了牛ICSI技术的各种影响因素，阐述了ICSI技术目前存在的问题，并展望了ICSI技术的应用前景。     

甲基黄嘌呤类生物碱在精子体外处理中的应用

在人工授精及体外受精过程中,需要对精子进行活化处理.甲基黄嘌呤类生物碱是目前日益受到重视的精子体外处理剂.本文主要阐述了茶碱、己酮可可碱和咖啡因三种甲基黄嘌呤类生物碱的理化性质和在精液处理过程中对精子的受精力影响及其作用机理.     

冷冻保存对公猪精子功能的影响

试验旨在探究公猪精液冷冻保存对其精子功能的影响。取长白猪的鲜精和优质冻精,用精子分析仪检测精子的运动能力,台盼蓝染色检测精子活率,体外受精（IVF）试验检测卵裂率与囊胚率,采用不同功能检测试剂盒检测冻精和鲜精的顶体完整率、线粒体膜通道孔（MPTP）活性、线粒体膜电位（MMP）、线粒体活性、线粒体氧化应激活性氧（ROS）以及精子DNA完整性,实时荧光定量PCR检测弱精子症相关蛋白基因SMCP、TEKT3、DNAH1、TCTE3的表达。结果表明,与猪鲜精相比,猪冻精的活率及活力均显著降低（P<0.05）,冻精的顶体完整率也明显下降（P<0.05）;冻精的卵裂率和囊胚率显著低于鲜精（P<0.05）;精子线粒体功能分析结果显示,冻精的MPTP相对荧光单位值（RFU）、线粒体膜电位荧光比率以及线粒体活性光密度（OD）值均显著低于鲜精（P<0.05）;精子线粒体ROS检测发现,冻精的RFU值显著高于鲜精（P<0.05）;精子DNA完整性检测结果显示,冻精拖尾率显著高于鲜精（P<0.05）;而弱精子症相关蛋白基因的表达与鲜精相比,差异不显著（P>0.05）。综上所述,冷冻导致猪精子活率、活力、线粒体功能、DNA完整性下降,最终使得冷冻精液精子的受精能力降低。