AMPK激活剂在绵羊精液冷冻保存中的作用研究

旨在研究AMPK激活剂二甲双胍（metformin，Met）和阿卡地新（acadesine，AICAR）对绵羊精液冷冻保存效果的影响。本研究首先在冷冻基础稀释液中分别添加不同浓度（0、100、200、300、400、500 μmol·L^-1）的Met和AICAR，冷冻解冻后根据精子活力、运动性能和结构完整性指标筛选出最佳的添加浓度（400 μmol·L^-1 Met、200 μmol·L^-1 AICAR）；然后分别使用不同的冷冻稀释液（对照组：稀释液；Met组：含400 μmol·L^-1 Met的稀释液；AICAR组：含200 μmol·L^-1 AICAR的稀释液）冷冻精液，解冻后检测精子中AMPK蛋白表达、顶体酶活性、代谢指标、线粒体功能以及抗氧化酶活性。结果表明，稀释液中添加400 μmol·L^-1 Met和200 μmol·L^-1AICAR均可显著提高解冻后精子活力、运动性能及精子结构完整性（P<0.05），其中400 μmol·L^-1 Met组精子总活力达43.20%，顶体完整率为91%，质膜完整率为46%。与对照组相比，Met组和AICAR组解冻后精子中AMPK磷酸化水平显著升高（P<0.05）；顶体酶活性显著提高（P<0.05）；丙酮酸水平显著下降（P<0.05），乳酸脱氢酶活性、乳酸以及ATP含量均显著升高（P<0.05）；与对照组相比，Met和AICAR组稀释液更有利于维持线粒体膜电位（P<0.05），提高ATP酶（P<0.05）以及抗氧化酶的活性（P<0.05）。添加适当浓度的AMPK激活剂可以提高绵羊精液冷冻保存的效果。     

番茄红素对秦川牛精液冷冻保存及鲜精品质影响

旨在探究番茄红素对秦川牛精液冷冻保存和新鲜精液品质的影响,为番茄红素作为新型精液稀释液添加剂和种公畜日粮添加剂提供依据。本研究采集3头年龄3~5岁健康状况良好秦川种公牛的新鲜精液混合,用0、1、2、3、4 μmol·L^-1浓度的番茄红素稀释液冷冻保存;利用计算机辅助分析仪、低渗肿胀检测法、花生凝集素荧光标记检测法、罗丹明荧光检测法等检测精子的运动性能、顶体完整率、质膜完整性、线粒体活性和抗氧化性能;在秦川种公牛日粮中添加15 mg·kg^-1 BW番茄红素,检测饲喂前后秦川种公牛的新鲜精液品质和血清抗氧化指标。结果表明,在秦川牛精液冷冻保存过程中添加番茄红素可以显著提高冷冻-解冻后精子的活力、顶体完整率、质膜完整性和线粒体活性以及抗氧化酶CAT和GSH-Px酶活性,显著降低精子中MDA含量,且番茄红素的最适添加浓度为2 μmol·L^-1(P<0.05);饲喂15 mg·kg^-1 BW番茄红素后,与饲喂之前相比,秦川种公牛的精子活力显著提高(P<0.05),精子畸形率显著降低(P<0.05),血清中抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px酶活性显著增加(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05)。综上所述,一定浓度的番茄红素对精子在冷冻过程中造成的精子损伤和秦川牛机体应激造成的繁殖性能降低具有良好的保护作用,这可能与番茄红素通过抗氧化作用减少精子在冷冻-解冻过程中的氧化损伤和提高动物机体的抗氧化能力有关。     

线粒体靶向抗氧化剂Mitoquinone对湖羊冻精损伤的保护作用

旨在研究线粒体靶向抗氧化剂Mitoquinone (MitoQ)对湖羊冷冻精子的保护作用。本研究选择健康的成年种公羊精液,将其分成6等份。不含MitoQ者设为对照组(M0),M1、M2、M3、M4和M5组分别为含50、100、150、200和400 nmol·L~(-1)MitoQ的添加组。精子经冷冻解冻后检测活率、活力、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性等精子质量指标,同时进行超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)等抗氧化指标检测。结果表明,当MitoQ添加的浓度为150 nmol·L~(-1)(M3组)时,其解冻后精子的活率、活力、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性最高,分别达55.00%、52.34%、48.32%、54.51%和51.28%,其线粒体活性显著高于其他组(P0.05)。M3组解冻后精子的SOD和GSH-Px值分别为203.90 U·mL~(-1)和123.62 U·L~(-1),两者均显著高于M0、M1、M4和M5组(P0.05);M3组解冻后精子的ROS和MDA值分别为298.34 U·mL~(-1)和4.99 nmol·L~(-1),显著低于其他组(P0.05)。当MitoQ的添加浓度提高至200(M4组)和400 nmol·L~(-1)(M5组)时,冻精质量开始下降,并表现为对精子的氧化损伤。在湖羊冷冻精液中,添加150 nmol·L~(-1)的MitoQ可显著降低精子氧化损伤,提高冻精品质,当MitoQ的添加浓度超过200 nmol·L~(-1)时对冷冻精子没有保护作用。     

KDM1A对牦牛卵母细胞减数分裂成熟及其发育潜能的影响

旨在探讨KDM1A对牦牛卵母细胞减数分裂成熟及其发育潜能的影响。本研究在体外成熟液中添加不同浓度的KDM1A特异性抑制剂GSK-KDM1A,牦牛卵丘-卵母细胞复合体（COCs）体外培养24 h后,观察卵丘细胞的扩展和第一极体的排出情况;利用免疫荧光检测体外培养过程中卵母细胞内KDM1A的表达模式;采用实时荧光定量PCR检测体外培养卵母细胞内Kdm1a、Oct-4、Sox-2以及Nanog的表达水平;体外培养成熟后的牦牛卵母细胞进行体外受精,观察其卵裂率与囊胚形成率。结果显示,体外培养24 h后,GSK-KDM1A组的卵丘细胞扩展程度显著低于对照组（P<0.05）,而320 nmol·L^-1组的卵丘细胞扩展程度和第一极体排出率均显著低于160 nmol·L^-1组（P<0.05）。在卵母细胞体外成熟过程中,Kdm1a呈现动态表达模式,MⅠ期的表达水平显著低于GV和MⅡ期（P<0.05）;添加GSK-KDM1A能显著抑制卵母细胞中KDM1A蛋白的表达（P<0.05）,320 nmol·L^-1组各时间点KDM1A的表达量均显著低于160 nmol·L^-1组（P<0.05）。GSK-KDM1A组卵母细胞内Oct-4与Sox-2的表达水平显著高于对照组（P<0.05）,但Nanog的表达水平无显著差异（P>0.05）。牦牛卵母细胞体外成熟后,GSK-KDM1A组的卵裂率显著低于对照组（P<0.05）,但囊胚形成率无显著变化（P>0.05）。综上表明,KDM1A参与调控牦牛卵母细胞减数分裂成熟过程,GSK-KDM1A能有效抑制KDM1A的表达,影响卵母细胞减数分裂成熟及其发育潜能,揭示KDM1A在此过程中扮演重要角色。     

不同浓度芦丁和冷冻速率对猪精子冷冻保存效果的研究

【目的】 探讨冷冻稀释液中添加不同浓度芦丁和不同冷冻速率对杜洛克公猪精子冷冻保存效果的影响及其二者的互作关系,以期为指导生产实践和提高优良种猪利用率提供依据。【方法】 试验分为6组,分别为空白对照组（冷冻稀释液Ⅰ液）和试验组（分别在冷冻稀释液Ⅰ液中添加0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 mmol/L芦丁）,在距离液氮面上1 cm （快冷冻）和3 cm （慢冷冻）处分别进行冷冻。在液氮中保存30 d后,检测冷冻-解冻精子的运动参数、质膜完整率（MI）、顶体完整率（AI）、DNA完整率、线粒体膜电位（MMP）、活性氧（ROS）水平、丙二醛（MDA）和ATP含量,以及超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活性来评价解冻后的精液品质。【结果】 冷冻速率方面,在相同浓度芦丁冷冻液中,慢冷冻效果均好于快冷冻效果,差异显著（P<0.05）。芦丁浓度方面,快冷冻和慢冷冻组均以添加0.6 mmol/L芦丁的效果最好（P<0.05）,添加0.8 mmol/L芦丁的效果次之。二者互作方面,冷冻速率与芦丁浓度间存在交互作用,其中慢冷冻×0.6 mmol/L芦丁组合的精子的运动参数、质膜完整率、顶体完整率、DNA完整率、线粒体膜电位、ATP含量均显著高于其他组合试验组（P<0.05）,ROS水平显著低于其他组合试验组（P<0.05）,SOD、CAT和GSH-Px的活性较其他组合试验组均显著提高（P<0.05）。【结论】 不同芦丁浓度与不同冷冻速率间存在互作效应,其中在冷冻稀释液中添加0.6 mmol/L芦丁慢冷冻猪精子效果最好。     

白藜芦醇对山羊冷冻精子质膜、DNA完整性和温度耐受性的影响

试验旨在研究白藜芦醇对山羊冷冻精子质膜、DNA完整性和温度耐受性的影响。采用假阴道法采集8只云上黑山羊精液,用含不同浓度（0、0.1、1、10和20 μmol//L）白藜芦醇的Optidyl稀释液稀释后进行细管分装,对照组不添加白藜芦醇。在5 ℃平衡4 h后,将细管于液氮蒸气中预冻10 min,最后在液氮中保存30 d。37 ℃水浴解冻后,采用低渗耐受性试验检测质膜完整性和温度耐受性,精子染色质扩散法检测DNA碎片率等指标。结果显示,10 μmol/L白藜芦醇冷冻组精子弯尾率显著高于其他各处理组（P<0.05）,而其他各冷冻组之间无显著性差异（P>0.05）;10 μmol/L白藜芦醇冷冻组精子DNA碎片率极显著高于鲜精组（P<0.01）,极显著低于未添加白藜芦醇冷冻组（P<0.01）。温度耐受性试验结果表明,不同浓度白藜芦醇冷冻组精子37 ℃水浴1 h后的精子弯尾率以10 μmol/L冷冻组最高,与其他各冷冻组间差异极显著（P<0.01）;精子弯尾率随着孵育时间的延长而呈逐步下降的趋势,当孵育4 h时,10 μmol/L白藜芦醇冷冻组精子弯尾率与对照组无显著差异（P>0.05）。透射电镜结果表明,10 μmol/L白藜芦醇组精子质膜完整率显著高于不添加白藜芦醇对照组（P<0.05）。上述结果表明,在冷冻稀释液中添加白藜芦醇可显著改善山羊冻精质膜状态、DNA完整率和温度耐受性,其最佳作用浓度为10 μmol/L,但白藜芦醇是否能改善山羊冻精的人工授精效果还有待进一步研究。     

硅对镉胁迫下不同狼尾草属牧草生理代谢的影响

采用盆栽试验法,研究外源硅添加（1.0,2.0,4.0 mmol·L^-1）对镉（20,40,80 mg·L^-1）胁迫下2种狼尾草生理代谢的影响。结果表明：外源添加4.0 mmol·L^-1的硅能显著降低高镉（80 mg·L^-1）胁迫下美洲狼尾草（Pennisetum americanum）和杂交狼尾草（Pennisetum americanum×P.purpureum）叶片中的丙二醛（MDA）和脯氨酸含量（P<0.05）,显著降低美洲狼尾草在所有镉处理下叶片的相对电导率（P<0.05）,能显著降低杂交狼尾草在镉浓度40、80 mg·L^-1下叶片的相对电导率（P<0.05）;加外源硅2.0 mmol·L^-1处理组显著降低高镉（80 mg·L^-1）胁迫下美洲狼尾草丙二醛（MDA）含量以及2种狼尾草脯氨酸含量;2种狼尾草随着镉浓度的增加,其SOD、POD活性呈现先增后减趋势,外源硅4.0 mmol·L^-1处理组提高了美洲狼尾草和杂家狼尾草在镉浓度80 mg·L^-1下超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）活性（P<0.05）,显著提高了杂交狼尾草在镉浓度40 mg·L^-1下POD活性（P<0.05）。表明硅可以增强2种狼尾草属牧草适应镉胁迫的能力,对2种狼尾草的生理代谢有缓解作用。     

丁酸钠通过AMPK通路调控LPS造成牛乳腺上皮细胞脂代谢紊乱的作用机制

通过向脂多糖（LPS）诱导牛乳腺上皮细胞系（MAC-T）脂代谢紊乱模型中添加不同浓度（2、8、16 μmol·L^-1）的丁酸钠,探讨其对细胞脂代谢的调控机理及炎症损伤的修复作用。分别用1 000 ng·mL^-1 LPS刺激MAC-T细胞9 h后,检测细胞脂滴面积及三酰甘油（TG）含量;用不同浓度的丁酸钠刺激MAC-T细胞12 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率;试验共分为5组：对照组、LPS处理组、2 μmol·L^-1丁酸钠+LPS处理组、8 μmol·L^-1丁酸钠+LPS处理组和16 μmol·L^-1丁酸钠+LPS处理组,分别对细胞TG含量、AMPK信号通路蛋白、脂代谢关键基因以及相关炎症因子进行检测。结果显示：LPS会造成MAC-T细胞总脂滴面积显著下降（P<0.05）,TG含量极显著下降（P<0.01）;不同浓度的丁酸钠对MAC-T细胞凋亡率没有影响;与对照组相比,LPS处理组TG含量极显著下降（P<0.01）、P-AMPK表达水平显著上升（P<0.05）、脂合成代谢相关基因ACC、SCD-1以及FAS mRNA表达水平均显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）下降、脂分解代谢相关基因CPT-1、CPT-2以及ACO mRNA表达水平均显著上升（P<0.05）、炎症因子TNF-α和IL-6含量显著上升（P<0.05）;与LPS处理组相比,（2、8、16 μmol·L^-1）丁酸钠+LPS处理组TG含量有一定程度上升,P-AMPK表达水平下降,脂合成代谢相关基因表达水平上升,脂分解代谢相关基因表达水平有一定程度下降,炎症因子TNF-α和IL-6含量下降。本研究表明丁酸钠会通过AMPK通路激活脂合成代谢,调控TG的合成,并且对MAC-T细胞的炎症损伤具有一定的缓解作用。     

冷冻保存对公猪精子功能的影响

试验旨在探究公猪精液冷冻保存对其精子功能的影响。取长白猪的鲜精和优质冻精,用精子分析仪检测精子的运动能力,台盼蓝染色检测精子活率,体外受精（IVF）试验检测卵裂率与囊胚率,采用不同功能检测试剂盒检测冻精和鲜精的顶体完整率、线粒体膜通道孔（MPTP）活性、线粒体膜电位（MMP）、线粒体活性、线粒体氧化应激活性氧（ROS）以及精子DNA完整性,实时荧光定量PCR检测弱精子症相关蛋白基因SMCP、TEKT3、DNAH1、TCTE3的表达。结果表明,与猪鲜精相比,猪冻精的活率及活力均显著降低（P<0.05）,冻精的顶体完整率也明显下降（P<0.05）;冻精的卵裂率和囊胚率显著低于鲜精（P<0.05）;精子线粒体功能分析结果显示,冻精的MPTP相对荧光单位值（RFU）、线粒体膜电位荧光比率以及线粒体活性光密度（OD）值均显著低于鲜精（P<0.05）;精子线粒体ROS检测发现,冻精的RFU值显著高于鲜精（P<0.05）;精子DNA完整性检测结果显示,冻精拖尾率显著高于鲜精（P<0.05）;而弱精子症相关蛋白基因的表达与鲜精相比,差异不显著（P>0.05）。综上所述,冷冻导致猪精子活率、活力、线粒体功能、DNA完整性下降,最终使得冷冻精液精子的受精能力降低。     

高压均质鸡蛋卵黄对猪冷冻精子凋亡的影响

为探究高压均质鸡蛋卵黄对猪冷冻精子凋亡的影响，本试验采集5头健康状态良好的杜洛克公猪精液，以普通鸡蛋卵黄+Tris-柠檬酸-葡萄糖（TCG）冷冻基础稀释液为对照组，以添加高压均质处理的鸡蛋卵黄+Tris-柠檬酸-葡萄糖（TCG）冷冻基础稀释液为试验组；精液冷冻-解冻后观察精子活力、DNA完整性、线粒体膜电位变化、细胞凋亡率、多种Caspase活性；同时利用qRT-PCR检测相关凋亡功能基因的mRNA表达水平，并进行数据统计。结果表明，经高压均质处理后，猪精子冻后活力、活率和顶体完整率显著高于对照组（P<0.05），为87.64%、87.14%和66.61%，较对照组分别提高了12.58%、5.82%和12.48%；线粒体膜电位和DNA完整率显著高于对照组（P<0.05），为0.74和61.76%；精子凋亡水平显著减少（P<0.05），为37.74%；试验组的Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9活性为17.15、11.19和15.18，较对照组分别减少了6.17、2.18和3.51（P<0.05）；对照组的Bax、TNF-α、Caspase-9基因表达均明显高于试验组（P<0.05），Bcl-2基因表达量较试验组降低（P>0.05）。综上，高压均质鸡蛋卵黄能提高猪精子冻后质量，促进线粒体功能完整性、降低精子细胞早期凋亡水平和细胞内Caspase活性，同时降低凋亡相关基因mRNA表达量。     

Study on the Role of AMPK Activator in Cryopreservation of Sheep Semen

This study aimed to investigate the effects of AMPK activators metformin (Met) and acadesine (AICAR) on sheep semen cryopreservation. Firstly, Met and AICAR with different concentrations (0, 100, 200, 300, 400, 500 μmol·L^-1) were added into the frozen diluent. After freezing and thawing, the optimal concentration (400 μmol·L^-1 Met, 200 μmol·L^-1 AICAR) were selected based on sperm motility, motion performance and membrane integrity; Secondly, the collected semen was froze using different frozen diluents (control group:diluent; Met group:diluent + 400 μmol·L^-1 Met; AICAR group:diluent + 200 μmol·L^-1 AICAR). After thawing, the sperm AMPK protein expression, acrosomal enzyme activity, metabolic index, mitochondrial function and antioxidant enzyme activity were examined. The results showed that the addition of 400 μmol·L^-1 Met and 200 μmol·L^-1 AICAR could significantly improve sperm motility, motion performance and membrane integrity(P<0.05) after thawing. In 400 μmol·L^-1 Met group, the total sperm motility, acrosome integrity rate and plasma membrane integrity rate were 43.20%, 91% and 46%, respectively. Compared with the control group, the level of AMPK phosphorylation in the sperm of the Met and AICAR groups was significantly increased after thawing (P<0.05), the acrosome enzyme activity of sperm was significantly increased(P<0.05); the pyruvate level was significantly decreased (P<0.05), the lactate dehydrogenase activity, lactic acid content, and ATP content were significantly increased(P<0.05). Compared with the control group, the dilution of Met group and AICAR group was more conducive to maintain mitochondrial membrane potential (P<0.05), increase ATPase and antioxidant enzyme activity (P<0.05). The addition of appropriate concentrations of Met and AICAR could improve semen quality of cryopreservation in sheep.     

泌乳阶段和处理温度对驴乳中溶菌酶活性的影响

旨在研究驴乳中溶菌酶活性与母驴泌乳阶段和处理温度之间的关系.本研究首先取新鲜牛、羊和驴乳进行乳中溶菌酶活性的比较.为了探究泌乳阶段和泌乳水平对乳中溶菌酶活性的影响,将4～9岁母驴根据日均产奶量水平分为低(400 g以下)、中(400～1 000 g)、高(1 000 g以上)3组,每组随机挑选3头共9头试验动物,连续观...     

Effects of KDM1A on the Meiotic Maturation and Developmental Potential of Yak Oocytes

The purpose of this study was to explore the effects of KDM1A on the meiotic maturation and developmental potential of yak oocytes. The specific inhibitor GSK-KDM1A of KDM1A was added into in vitro maturation medium of yak oocytes. After 24 h in vitro culture of yak cumulus oocyte complexes (COCs), the expansion of cumulus cells and the extrusion of the first polar body were observed. The expression level of KDM1A in oocyte was measured by immunofluorescence during in vitro culture. The expression levels of Kdm1a, Oct-4, Sox-2 and Nanog in oocytes were detected by RT-qPCR. Then, yak oocytes were fertilized after in vitro culture, and the cleavage rate and blastocyst formation rate were observed, respectively. The results showed that the cumulus cells expansion in GSK-KDM1A groups were significant lower than those in control group (P<0.05) after 24 h culture, and the cumulus cells expansion and the first polar body extrusion rate in 320 nmol·L^-1 group were significantly lower than those in 160 nmol·L^-1 group (P<0.05). During oocyte in vitro maturation, Kdm1a showed dynamic expression profile, and the expression level of Kdm1a in MⅠ-stage was significantly lower than that in GV-stage and MⅡ-stage (P<0.05). The GSK-KDM1A could significantly inhibit the expression of KDM1A protein in oocytes (P<0.05), and the expression of KDM1A in 320 nmol·L^-1 group was significantly lower than that in 160 nmol·L^-1 group (P<0.05). The expression levels of Oct-4 and Sox-2 in GSK-KDM1A group were significantly higher than that in control group (P<0.05), but there was no significant difference in the expression of Nanog (P>0.05). After 24 h culture, the cleavage rates of oocytes in GSK-KDM1A groups were significantly lower than those in control group (P<0.05), while the blastocyst formation rate was not significantly different (P<0.05). In conclusion, KDM1A is involved in regulating the meiotic maturation process of yak oocytes. GSK-KDM1A can effectively inhibit the expression of KDM1A, affect the meiotic maturation and developmental potential of oocytes, which reveal that KDM1A plays an important role in this process.     

双氢睾酮通过调控孕酮、雌二醇和细胞凋亡参与绵羊子宫功能

旨在探究双氢睾酮（dihydrotestosterone,DHT）是否通过调节孕酮（progesterone,P₄）、雌二醇（oestrogen,E₂）和细胞凋亡参与影响绵羊子宫功能,以揭示其在绵羊生殖生理中的潜在作用。本试验以1.5岁左右的雌性小尾寒羊为试验动物,检测卵泡期、黄体期和妊娠期子宫中DHT合成酶和雄激素受体（androgen receptor,AR）的表达变化。随后,体外培养绵羊子宫内膜上皮细胞,并用DHT （10^-10~10^-7 mol·L^-1）和AR拮抗剂氟他胺（Flu,10^-8 mol·L^-1）处理（n=3）。通过酶联免疫吸附试验、细胞免疫荧光、蛋白质印迹法和实时荧光定量PCR检测P₄和E₂水平、合成酶和受体表达。此外,还检测经DHT和Flu处理后,绵羊子宫内膜上皮细胞中凋亡因子Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2-associated X protein,Bax）、B细胞淋巴瘤蛋白2（B cell lymphoma protein 2,Bcl-2）、半胱天冬酶3（caspase 3,CASP3）和活化半胱天冬酶3（active-caspase 3,Act-CASP3）的表达变化。结果表明,绵羊子宫不同时期DHT的合成和AR的表达存在差异,妊娠期子宫DHT合成及AR表达显著低于卵泡期和黄体期（P<0.05）。10^-10~10^-7 mol·L^-1DHT处理后,P₄合成酶表达显著上调（P<0.05）,在10^-8~10^-7 mol·L^-1 DHT时P₄合成显著增加（P<0.05）,在10^-10~10^-8 mol·L^-1 DHT时孕酮受体蛋白表达显著增加（P<0.05）,但10^-7mol·L^-1 DHT时孕酮受体蛋白表达显著下降（P<0.05）;在10^-8~10^-7 mol·L^-1 DHT时E₂相关合成酶显著减少,并且E₂水平显著下降（P<0.05）,在10^-9和10^-7 mol L^-1 DHT时E₂受体ERα蛋白显著下调（P<0.05）,在10^-10~10^-7 mol·L^-1 DHT时ERβ和GPER显著增加（P<0.05）。经Flu处理后部分解除DHT对P₄和E₂的调控。此外,10^-10~10^-7 mol·L^-1 DHT显著促进子宫内膜上皮细胞凋亡（P<0.05）。本研究证实DHT至少部分通过AR调节P₄和E₂合成及受体表达,影响细胞凋亡,参与调节子宫功能,这为进一步阐明雄激素参与调节子宫功能提供了新的基础和相关数据。     

P7C3-A20对创伤性脑损伤的PC12细胞凋亡和氧化的影响

旨在研究3,6-二溴-beta-氟-N-(3-甲氧基苯基)-9H-咔唑-9-丙胺(P7C3-A20)对大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株(PC12细胞)创伤性脑损伤(TBI)的修复作用。将细胞分为对照组(A组)、模型组(B组)、0.03 μmol·L^-1药物治疗组(C组)、0.3 μmol·L^-1药物治疗组(D组)、3 μmol·L^-1药物治疗组(E组)和药物空白组(F组),TBI细胞模型通过使用10 μL枪头划出横竖相间4 mm的直线来制备。使用CCK8试剂盒检测细胞活力,荧光显微镜观察细胞凋亡、活性氧(ROS)情况,荧光定量PCR仪检测半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)、血红素氧合酶1(HO-1)、NAD (P) H:醌氧化还原酶1(NQO1)和谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)的mRNA相对表达量。结果显示：TBI造模后细胞活力极显著降低(P<0.01),0.03 μmol·L^-1浓度的P7C3-A20能显著提高TBI后的细胞活力(P<0.05),0.3 μmol·L^-1浓度的P7C3-A20能极显著提高TBI后的细胞活力(P<0.01)。TBI造模后细胞早晚期凋亡细胞比例极显著增加(P<0.01),0.03 μmol·L^-1浓度的P7C3-A20能显著减少TBI后的早期凋亡细胞比例(P<0.05),极显著减少TBI后的晚期凋亡细胞比例(P<0.01),0.3和3 μmol·L^-1浓度的P7C3-A20能极显著减少TBI后的早晚期凋亡细胞比例(P<0.01)。TBI造模后活性氧细胞比例极显著增加(P<0.01),0.03和3 μmol·L^-1浓度的P7C3-A20能显著减少TBI后的活性氧细胞比例(P<0.05),0.3 μmol·L^-1浓度的P7C3-A20能极显著减少TBI后的活性氧细胞比例(P<0.01)。0.3 μmol·L^-1浓度的P7C3-A20能极显著减少TBI后Caspase-3的mRNA相对表达量(P<0.01),显著提升TBI后Bcl-2、HO-1、NQO1和GCLC的mRNA相对表达量(P<0.05)。P7C3-A20对TBI后的PC12细胞有抗凋亡、减轻氧化应激的修复作用。