河南省猪链球菌的分离鉴定及耐药性分析

为探讨河南省猪链球菌的血清型分布和耐药性情况,本试验对2016年5月~2017年5月从河南省猪场采集的各种组织病料进行猪链球菌的分离培养、生化鉴定及PCR鉴定,并进行了血清群的分群鉴定和血清型的分型鉴定,对其中的2型猪链球菌进行了药敏试验。结果显示,试验共鉴定出189株猪链球菌,流行的猪链球菌的血清群主要以D群为主,其次是G群和C群;优势的血清型是2型、7型、9型和1型。其中87株为2型猪链球菌,超过90%的2型菌株对β-内酰胺类(青霉素G、阿莫西林和头孢菌素类)、氯霉素、万古霉素、环丙沙星敏感,超过40%的2型菌株对多西环素、四环素、红霉素、复方新诺明、丁胺卡那霉素、克林霉素、链霉素、米诺环素产生耐药性。以上结果为指导猪场使用敏感药物及时控制疫情、选择血清型相符的疫苗进行预防及减少损失提供参考依据。     

河南一起2型猪链球菌病的诊断与治疗

从河南省豫东某规模化猪场保育猪群发生疫情的病死猪脑组织分离得到一株细菌,通过对该株细菌纯化鉴定、血清型分型鉴定、致病性试验及毒力基因检测、药敏试验和耐药基因检测等研究。结果表明:该株细菌为2型猪链球菌;该菌株对头孢他啶、阿莫西林、氨苄西林、青霉素、复方新诺明、左氟沙星、氧氟沙星等β内酰胺类、磺胺类和喹诺酮类药物敏感,对氨基糖苷类、四环素类和大环内酯类药物高度耐药。该研究对临床防控猪链球菌病提供参考依据。     

一株猪链球菌2型的分离与鉴定

对四川某猪场仔猪病料进行细菌分离纯化、16S rRNA基因扩增、血清分型检测,分离鉴定出一株猪链球菌2型。将分离株菌液接种小白鼠24 h后出现转圈、发抖、精神萎靡等神经症状,从接种菌液的小白鼠大脑、肝脏、肺脏等组织中分离出链球菌。表明导致该猪场仔猪发病的病原可能是本试验所分离鉴定的2型猪链球菌。对该分离菌株进行药敏试验,结果表明,该菌株对β-内酰胺类和喹诺酮类药物高度敏感;对氨基糖苷类和林可胺类药物不敏感;对四环素类和磺胺类药物中度敏感。本研究为猪链球菌2型的诊断和防治提供参考。     

2型猪链球菌河南株的生物学特性研究

从河南省豫东某规模化猪场保育猪群发生疫情的病死猪脑组织分离得到一株细菌,通过对该株细菌纯化鉴定、血清型分型鉴定、致病性试验及毒力基因检测、药敏试验和耐药基因检测等一系列研究,结果表明,该株细菌鉴定为2型猪链球菌,毒力较强,为携带胞外因子epf基因、溶血素sly基因、溶菌酶释放蛋白mrp基因的3个毒力基因的强毒力菌株;该菌株对头孢他啶、阿莫西林、氨苄西林、青霉素、复方新诺明、左氟沙星、氧氟沙星等β-内酰胺类、磺胺类和喹诺酮类药物敏感;对氨基糖苷类、四环素类和大环内酯类药物高度耐药,携带有β-内酰胺类耐药基因blaTEM和氨基糖苷类耐药基因strB。该研究对临床防控猪链球菌病具有重要意义。     

屠宰场猪链球菌分离菌株分型及其致病性和耐药性分析

为了解吉林省猪链球菌的流行情况,从屠宰场采集的猪咽拭子和鼻拭子样品中分离鉴定猪链球菌,并进行菌株血清型、基因型和毒力表型的鉴定,以及致病性和耐药性的分析。结果表明,从100份样品中共分离鉴定猪链球菌104株,其中29株鉴定为血清2型、9型和1型等几种常见的致病性血清型,其他75株不属于常见的致病性血清型。血清2型的菌株中,2株经鉴定为ST1基因型和mrp+epf+sly+毒力型,并经动物试验鉴定为强毒菌株;其他菌株均为ST28基因型和mrp+epf-sly-毒力型,具有中等毒力。血清9型的菌株,均为mrp-epf-sly-毒力型,动物试验鉴定均为强毒菌株。根据Kirby-Bauer纸片扩散法的药敏试验结果,98%的猪链球菌分离株对四环素耐药;对大环内酯类、克林霉素和链霉素的耐药率都在50%以上;对β-内酰胺类、氯霉素和喹诺酮类抗生素的耐药率小于20%。总体分析,从屠宰场分离的猪链球菌强毒菌株所占的比例并不高,但是菌株多重耐药的情况非常严重。     

副猪嗜血杆菌分离株耐药性、血清型及RAPD基因型分析

为弄清某规模化养猪场感染和流行的副猪嗜血杆菌(HPS)菌株的耐药性、血清型及基因型,本试验自该猪场发生浆膜炎和关节炎病猪的不同组织样品中分离到6株HPS菌株,通过细菌培养特性、生化试验和PCR扩增细菌16S rRNA基因片段并测序对分离株进行鉴定;进而鉴定分离株对不同类别抗生素的耐药性;最后对分离株进行血清分型和RAPD基因分型并分析两者的相关性。结果显示,自病猪不同组织脏器中分离鉴定了6株HPS菌株,体外培养具有典型"卫星生长"现象;生化试验结果符合HPS反应特性;PCR均可扩增出821 bp的HPS 16S rRNA基因片段,且序列与HPS一致。药敏试验结果显示分离株对头孢菌素类、青霉素类、氨基糖苷类、大环内酯类和四环素类抗生素敏感,而对喹诺酮类、磺胺类、林可霉素类和氯霉素类抗生素产生耐药性。琼脂扩散试验结果显示HPS分离株均为血清5型;RAPD分析显示HPS分离株与15个血清型参考菌株可分为4个基因型。本试验结果为HPS的流行病学调查及防控具有一定的借鉴价值。     

猪链球菌的分离鉴定及16S rDNA序列分析

为明确导致新疆某猪场猪急性死亡的病原菌,试验对采集的猪病变淋巴结、肺脏进行病原菌分离培养、形态观察、16S rDNA测定、生化鉴定、药敏试验以及PCR血清型鉴定。将该分离株与国内外13株分离株构建系统进化树进行比对分析。结果显示:分离菌株镜检观察为革兰氏阳性长链状球菌,具有β溶血性,可发酵大多数糖类,符合猪链球菌的生化特性;分离菌株16S rDNA序列与猪链球菌标准菌株ATCC 43765 (GenBank登录号:NR_115737.1)同源性为100%;采用PCR方法对分离菌株进行血清型鉴定扩增出约390 bp的荚膜血清9型特异性条带。分离菌株对林可霉素、多西环素、青霉素钠、环丙沙星、头孢噻呋、氟苯尼考、替米考星、氧氟沙星、磺胺嘧啶钠、硫酸黏菌素、氨苄西林钠11种药物敏感,对四环素、庆大霉素、阿莫西林表现耐药。研究表明,分离株为猪链球菌,荚膜血清9型,命名为XJS9。     

广西某猪场猪链球菌分离鉴定及其生物学特性研究

2019年12月广西玉林某猪场猪连续发生多起保育猪突然死亡病例,为确诊该猪场猪发病死亡原因并调查分离菌株的致病性与耐药情况,对发病猪场进行采样和细菌分离培养,并对分离菌株进行形态学观察、生化鉴定、gdh基因PCR扩增、血清型和7个毒力基因的鉴定、耐药性检测以及耐药基因的鉴定。结果显示,从两头病死猪中各分离出1株细菌,在TSB固体培养基表面培养为灰白色、表面光滑、边缘整齐且大小一致的圆形菌落,初步鉴定为革兰阳性链球菌,分别命名为GXYL-F1、GXYL-N2。经猪链球菌特异性基因gdh及血清型引物鉴定,两分离株均为9型猪链球菌。生化鉴定结果显示,两分离菌株均可发酵水杨素、麦芽糖、M.R.和七叶苷。PCR检测菌株的毒力基因结果显示,gdh、fbps、sao、sbp2'和orf2均为阳性,mrp、epf、sly基因均为阴性。药敏试验结果显示,两分离株均对新霉素、链霉素、替米考星、泰乐菌素、红霉素、四环素、左氧氟沙星、青霉素和磺胺嘧啶这9种药物呈耐药性,此外分离菌株GXYL-F1还对恩诺沙星耐药。两分离菌株均扩增出耐药基因aadA1、qnrB、qnrS。表明该猪场保育猪突然死亡是由9型猪链球菌引起。上述研究结果为该猪场制定9型猪链球菌防治措施提供参考依据,并为了解猪链球菌流行血清型多样性与防控技术研究提供了新的数据。     

豫南地区副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药敏试验

2014年5月至2015年12月对河南省信阳、驻马店等地部分猪场出现疑似副猪嗜血杆菌感染的病猪进行病理剖检、细菌分离培养、PCR鉴定、血清型鉴定和药敏试验。结果表明,14株副猪嗜血杆菌分属3个血清型,其中血清4型7株,5型4株,12型2株,未定型1株;药敏试验结果显示,14株副猪嗜血杆菌对环丙沙星、恩诺沙星、头孢噻肟高度敏感,对替米考星、磺胺间甲氧嘧啶、红霉素和氟苯尼考中度敏感,对林可霉素、庆大霉素、链霉素均耐药。     

猪链球菌的分离鉴定及耐药性分析

为了鉴定青岛地区3个猪场病死猪的致病菌,试验采用形态学观察、生化试验、16S rRNA PCR鉴定、血清型鉴定、毒力因子基因表型检测及药敏试验等方法对分离得到的3株细菌进行研究。结果表明:这3株细菌均为革兰氏阳性链状球菌,生化特性与猪链球菌的生化特征大致相符;16S rRNA PCR产物测序结果证实3株细菌均为猪链球菌;用猪链球菌1,2,7,9型特异性引物进行PCR扩增,3株细菌均为猪2型链球菌,其中有2株细菌的毒力因子基因表型为Mrp+Epf+Sly+,1株细菌毒力因子基因表型为Mrp-Epf+Sly+;3株细菌对大部分β内酰胺类、氟喹诺酮类抗生素敏感,对多肽类、林可胺类抗生素耐药。说明猪场分离得到的3株细菌均为2型猪链球菌,可选用β内酰胺类、氟喹诺酮类抗生素进行治疗。     

东北地区猪群链球菌分离鉴定及流行病学调查分析

为了解猪链球菌在东北地区正常猪群中的流行情况,对黑龙江、吉林、辽宁省等地无菌采集的2 204份鼻拭子接入含有1‰抗生素的链球菌液体选择培养基中,37℃静止培养24 h,挑取细菌培养物涂片,革兰氏染色后镜检,将镜检为革兰氏阳性的链球菌利用PCR方法进行猪链球菌种的鉴定,在此基础上再利用PCR方法进行猪链球菌1、2、7、9血清型的分型鉴定.结果显示,黑龙江、吉林、辽宁3省猪群链球菌的携带率分别为29%、27%、34%,东北地区分离得到猪链球菌共155株,其中1型猪链球菌7株,2型猪链球菌39株,7型猪链球菌4株,9型猪链球菌11株,其他型猪链球菌94株.     

湖南省猪链球菌的分离与鉴定

从病猪脏器病料中通过细菌培养、生化试验分离鉴定出了121株猪链球菌.经PCR技术鉴定马链球菌兽疫亚种28株,占23.1%,猪链球菌24株,占19.8% ,其中猪链球菌2型4株,占3.3%,猪链球菌9型2株,占1.7%,猪链球菌1型和7型都没检测到,证实省内除了猪链球菌2型外,也存在其他血清型的猪链球菌.     

临床健康猪群猪链球菌2型带菌率流行情况调查

为了解钦州市临床健康猪群中猪链球菌2型的流行情况,采用PCR方法对采集的病料进行检测分析。374份样品的PCR检测结果显示,链球菌、猪链球菌、猪链球菌2型的带菌率分别为81.8%、48.9%、2.9%,表明钦州市健康猪中猪链球菌带菌率高,但猪链球菌2型带菌率较低。     

天津地区2型猪链球菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解天津地区2型猪链球菌的流行及耐药情况,本研究收集该地区部分规模化养猪场疑似猪链球菌病病料317份,通过病原分离培养、染色特性观察、生化试验、PCR扩增等方法进行鉴定,并对分离菌进行致病性及药敏试验。结果从样品中分离鉴定出11株2型猪链球菌。对小鼠的致病力试验结果显示,应用0.5×10⁸ CFU/mL的细菌攻击小鼠,11株2型猪链球菌分离株中有6株具有致死性,其中1株致死率较强,5株致死率较弱。药敏试验结果表明,11株分离菌对9种临床常见药物均表现出很强的耐药性,其中对阿米卡星、四环素和强力霉素耐药性最强,耐药率达到100.00%;且所有分离株均呈多重耐药,其中4个分离株为9重耐药,占36.36%（4/11）。本试验结果表明,天津地区存在2型猪链球菌感染情况,且对多种抗菌药均产生了耐药性,应引起养殖户的高度重视,在防制猪链球菌病时,应有针对性地合理、科学、规范用药和交替用药。     

猪源链球菌的分离鉴定及生物学特性研究

通过生化试验、药敏试验、PCR分型、毒力基因的PCR检测及动物试验对分离的猪源链球菌进行药物敏感性、血清型和分子流行病学初步研究。从不同省份猪链球菌病疑似病例猪的心血、肝、淋巴结、脑和关节液组织分离出97株链球菌,药敏试验结果表明各菌株对13种抗菌素的耐药谱不同,但对先锋霉素V和环丙沙星的耐药率均低于5%。通过对分离菌株进行PCR鉴定和分型,确认26株为猪链球菌,其中1株为1型,16株为2型,4株为7型,没有9型,另5株为其它型。进一步对1型、2型和7型猪链球菌mrp、epf和sly3种毒力基因的分布情况进行了PCR检测。动物试验表明能100%致死小白鼠的猪链球菌基因型均为epf^＋mrp^＋sly^＋2型猪链球菌,1株2型和1株7型猪链球菌均能复制出典型的猪链球菌病例。     

猪链球菌2型的分离鉴定及致病性试验

从全国部分猪场采集疑似猪链球菌感染病例脑样品20份进行细菌分离,成功分离到10株细菌,通过猪链球菌及血清类型鉴定,最终确定其中一株为2型猪链球菌。应用猪链球菌7种主要毒力因子特异性基因扩增检测方法检测所分离到的2型猪链球菌的毒力因子分布情况,并应用小鼠攻毒试验对其致病性进行观察研究。结果表明:分离的2型猪链球菌具备7种毒力因子;动物试验表明SS2能引起小鼠的急性败血症及脑膜炎;细菌回归试验结果表明,试验组死亡小鼠的脑、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏均有细菌定植,且能分离出攻毒菌。此分离菌株的研究为研制2型猪链球菌病疫苗奠定了基础。     

9型猪链球菌广东株的分离鉴定和基因序列分析

为了解9型猪链球菌广东分离株毒力因子基因型、基因变异和进化情况，本试验采集发病猪脑脊液、关节液、脾脏、肝脏、淋巴结进行细菌分离培养和生化鉴定，采用PCR方法鉴定其血清型及部分毒力基因，对cps9D、gdh、gapdh与orf2基因进行序列测定和分析，并构建系统发育树。结果显示，分离菌镜检为革兰氏阳性链状球菌，在鲜血琼脂平板中呈β溶血，可发酵大多数糖类，能成功扩增cps9D基因，含重要的保守基因gdh及毒力基因gapdh和orf2，表明分离菌株为9型猪链球菌。分离菌株cps9D、gdh、gapdh、orf2基因核苷酸序列与GenBank上国内外参考菌株的同源性分别为95.9%~100.0%、98.6%~99.8%、98.7%~99.6%和95.5%~99.9%，说明分离菌株与国内外其他9型猪链球菌毒株核苷酸同源性都较高，且与国内外的流行毒株基本一致，未发生太大的变异。系统发育树表明，分离株与国内外来源不同的猪链球菌分离株同源性高，亲缘关系密切。     

The Streptococcus suis Epidemiological Analysis of Healthy and Infected Swine in Guangdong Province

To investigate the epidemics of Streptococcus suis in Guangdong province, 228 samples from infected pigs,and 698 samples from healthy pigs including 243 samples from tonsils of slaughtered pigs and 455 nasal swabs of healthy pigs were analyzed.The results showed that the positive rate of Streptococcus suis of infected,healthy and slaughtered pigs were 82.02%(187/228),42.20%(192/455) and 32.10%(78/243),respectively.187 strains of Streptococcus suis were isolated from infected pigs and serotyped in 11 serotypes,including serotype SS1,SS2,SS3,SS4,SS7,SS8,SS9,SS16,SS19,SS29 and SS31, in which serotype SS2(16.58%),SS3(9.63%) and SS19 (7.49%) were dominant,flowed by SS7(6.95%)and SS9(5.34%),and 48.66% strains were non-typabled.Meanwhile,154 strains of Streptococcus suis from healthy swine(including farms and slaughter houses) were classified into 17 serotypes,including serotype SS2,SS3,SS4,SS5,SS7,SS8,SS9,SS10,SS12,SS15,SS16,SS17,SS19,SS21,SS23,SS29 and SS30,in which SS2(18.83%) and SS29(14.94%)were dominant,flowed by SS16(6.50%) and 31.82% strains were non-typabled.     

猪链球菌2型分离株精氨酸脱亚氨酸酶遗传变异分析

为了分析猪链球菌2型(SS2)发病原因、流行趋势,为预防和控制猪链球菌2型提供理论依据,根据GenBank发表的猪链球菌精氨酸脱亚氨酸酶(arginine deiminase,ADS)基因序列,设计并合成引物,采用RT-PCR技术,对阳性病料进行扩增,回收扩增产物并将其克隆入pMD18-T载体中,提取质粒测序。应用DNAStar软件分析核苷酸序列的同源性,并绘制系统进化树。结果显示,分离株HN1－HN8核苷酸的同源性为94.9%~100%,来自同一地区的分离株HN5和HN6同源性为100%,而河南分离株与GenBank发表的SX332同源性为95.9%~99.2%。因此,同一地域分离株间ADS基因序列同源性较高且亲缘关系较近,不同地域则较远。     

Antimicrobial susceptibility of clinical strains of Streptococcus suis isolated from pigs in Spain

The antimicrobial susceptibility of 151 clinical Streptococcus suis strains isolated from diseased pigs in Spain was determined by a microdilution method. Isolates were mostly susceptible to beta-lactam antimicrobials, aminoglycosides, enrofloxacin, novobiocin and spectinomycin. More than 87% of the S. suis isolates were resistant to tetracyclines, sulphonamides, macrolides and clindamycin. Strains of serotype 9 were significantly more resistant than strains of serotype 2 (P<0.05) to tylosin (94% versus 77%) and clindamycin (94% versus 64%). Eighty-seven percent of the S. suis isolates were resistant to at least four antimicrobials and nine isolates (6%) were resistant to at least six antimicrobials. The most frequently identified multidrug pattern involved resistance against tetracyclines, sulphonamides, macrolides and lincosamides, with 69% of the isolates exhibiting this resistotype. Fifteen out of the 22 strains of serotype 2 (68.2%), and 84 out of the 98 of the strains of serotype 9 (85.7%) exhibited this resistotype, indicating its widespread distribution among the strains of the two most frequently isolated serotypes.