光照周期对褪黑激素受体在母兔下丘脑-垂体-卵巢轴中分布与表达的影响

旨在观察不同光照周期对新西兰白色母兔褪黑激素受体在下丘脑-垂体-性腺轴中的分布和表达模式,从而进一步分析褪黑激素在不同光照周期下调控母兔发情的机制。选用5月龄未经产新西兰母兔48只,随机分成3组,每组16只,前10 d各试验组采用12 h光照∶12 h黑暗的光照制度,后6 d分别采用长光照(16 h光照∶8 h黑暗)、短光照(8 h光照∶16 h黑暗)和正常光照(12 h光照∶12 h黑暗,对照组)的光照制度,光照强度80 lx,试验期为16 d。试验结束后剖杀动物,取下丘脑、垂体和卵巢,用qPCR、免疫印迹、免疫组织化学方法,研究不同光照周期对母兔的下丘脑、垂体、卵巢中褪黑激素受体亚型分布与表达的影响。结果表明:在下丘脑,短光照组的MT1 mRNA表达量较长光照组高88.8%(P0.05),较对照组高54.9%(P0.05),长光照组与对照组间无显著差异;MT2 mRNA表达量在不同光周期组间差异不显著(P0.05)。免疫组织化学染色结果显示,长光照组下丘脑室周核的MT1阳性细胞数明显较短光照组少69.4%(P0.05),较对照组少37.3%(P0.05),短光照组比对照组显著多104.8%(P0.05);同样,长光照组室旁核的MT1阳性细胞数明显较短光照组少52.9%(P0.05),对照组明显较短光照组少55.8%(P0.05),而长光照组与对照组间差异不显著(P0.05)。在垂体,短光照组的MT1 mRNA表达量比长光照组显著高164%(P0.05),比对照组显著高49.5%(P0.05),而长光照组比对照组显著低43.5%(P0.05);但不同光周期下MT2 mRNA表达量差异不显著(P0.05);长光照组的卵巢MT1 mRNA表达量较对照组低33.3%(P0.05),较短光照组低53.6%(P0.05),短光照组与对照组间差异不显著(P0.05);卵巢中短光照组MT2的mRNA相对表达量比对照组显著高90.0%(P0.05),比长光照组显著高100%(P0.05),长光照组与对照组差异不显著(P0.05)。短光照周期显著提高了下丘脑、垂体和卵巢中褪黑激素受体亚型MT1表达,而不是MT2受体亚型。光照周期调控母兔发情的作用机制可能是褪黑激素通过MT1受体途径实现的。     

哺乳动物下丘脑-垂体-卵巢轴的研究进展

哺乳动物的下丘脑、垂体和卵巢分泌的激素在功能上相互作用,构成一个完整的神经内分泌生殖调节体系,即下丘脑垂体卵巢轴,它在生殖活动中起着主要的调节作用。下丘脑中分布的GnRH神经元可以分泌GnRH,GnRH调节垂体中促性腺激素细胞分泌促性腺激素FSH和LH,促性腺激素作用于卵巢受体,引起雌激素和孕酮分泌并影响生殖活动。从组织学角度上研究,下丘脑垂体卵巢轴中的结构,如GnRH神经元、促性腺激素细胞、卵泡随周期性变化而呈现出不同的形态结构和分泌特点。因此,对以上各种细胞的研究是探讨其所分泌激素的基础,而下丘脑垂体卵巢轴中的各种激素的研究则是了解和控制动物繁殖机能的关键。     

发情周期中奶山羊下丘脑-垂体-卵巢轴催产素的免疫组化定位

用免疫组化ABC法,对发情周期中奶山羊下丘脑-垂体-卵巢轴催产素(OT)分布进行了观察研究.结果表明,下丘脑中分泌OT的神经元主要分布在室旁核和视上核,在穹窿周核、腹内侧核、腹外侧核、交叉上核、背内侧核、乳头体、下丘脑外侧区、下丘脑前核等核团也有一定数量的阳性神经元;阳性神经纤维仅见于室旁核、下丘脑前核、视上核等少数核团,在正中隆起和第3脑室室周可见到一定数量的阳性神经纤维.在垂体前叶未见到OT免疫反应阳性产物,自垂体柄和正中隆起的一侧可见到平行排列的OT阳性神经纤维断续地延伸至神经部.卵巢的卵泡及间质未见OT免疫阳性反应,,在黄体组织中存在数量较多的免疫反应阳性细胞,阳性细胞主要呈圆形、卵圆形,小梁两侧及黄体中央近腔区域的阳性细胞呈长梭形,有相当数量的阳性细胞具有突起.连续切片HE染色对照观察显示,黄体中OT主要由大黄体细胞产生,但小黄体细胞也存在OT免疫阳性反应.     

发情周期中奶山羊下丘脑—垂体—卵巢轴催产素的免疫组化定位

用免疫组化ABC法，对发情周期中奶山羊下丘脑—全体—卵巢轴催产素(OT)分布进行了观察研究。结果表明，下丘脑中分泌OT的神经元主要分布在室旁核和视上核，在穿窿周核、腹内侧核、腹外侧核、交叉上核、背内侧核、乳头体、下丘脑外侧区、下丘脑前核等核团也有一定数量的阳性神经元；阳性神经纤维仅见于室旁核、下丘脑前核、视上核等少数核团，在正中隆起和第3脑室室周可见到一定数量的阳性神经纤维。在全体前叶未见到OT免疫反应阳性产物，自垂体柄和正中隆起的一例可见到平行排列的OT阳性神经纤维断续地延伸至神经部。卵巢的卵泡及间质未见OT免疫阳性反应，在黄体组织中存在数量较多的免疫反应阳性细胞，阳性细胞主要呈圆形、卵圆形，小梁两侧及黄体中央近腔区域的阳性细胞呈长梭形，有相当数量的阳性细胞具有突起。连续切片HE染色对照观察显示，黄体中OT主要由大黄体细胞产生，但小黄体细胞也存在OT免疫阳性反应。     

光照周期影响家禽卵巢机能的研究进展

光照周期是禽类繁殖性能的重要影响因素之一,研究光照周期对家禽造成的氧化损伤及对卵巢机能的影响,阐明光照周期调控卵巢机能的机制,是目前家禽养殖行业亟需解决的问题之一。文章综述了光照周期影响禽类卵巢机能的研究现状,为开展禽类繁殖过程中光照周期的影响调控机制研究奠定了理论基础。     

GnRH在妊娠期黄牛下丘脑—垂体—卵巢轴中的表达

旨在研究促性腺激素释放激素(GnRH)在妊娠期黄牛下丘脑—垂体—卵巢轴中的表达,探索其与妊娠的关系。运用免疫组化ABC法和图像分析软件Image-ProPlus6.0对妊娠期黄牛下丘脑、垂体和卵巢组织中GnRH的表达情况进行研究。结果表明:(1)在下丘脑中,GnRH阳性神经元主要分布于下丘脑前核(AH)、乳头体内侧核(MMN)、腹内侧核(VMN)、弓状核(ARC)及室旁核(PVN),其中AH和MMN阳性产物分布面积(S)和累计光密度(IOD)值均较大(SAHSMMNSVMNSARCSPVN和IODAHIODMMNIODVMNIODARCIODPVN;P0.001);(2)在腺垂体中,存在大量GnRH阳性细胞,而神经垂体中仅有GnRH阳性纤维;(3)在卵巢中,GnRH阳性产物分布在妊娠黄体、卵泡颗粒细胞及间质中。结果提示,在下丘脑各核团中,AH和MMN的GnRH可能对维持黄牛妊娠起主导作用,而垂体和卵巢中GnRH可能是通过自分泌和旁分泌方式与相关激素协同作用来维持妊娠黄牛的激素平衡及内环境稳态等。     

初情期前后GPR54 mRNA在猪下丘脑-垂体-卵巢轴内的定位

研究应用原位杂交技术检测GPR54 mRNA在苏姜猪下丘脑-垂体-卵巢轴中的分布定位.在60日龄和初情期(160日龄)2个不同发育阶段的下丘脑-垂体-卵巢轴中均检测到GPR54 mRNA阳性杂交信号,结果表明:苏姜猪2个不同发育阶段的3种组织中均有GPR54 mRNA表达.其中下丘脑以弓状核、腹内侧核的阳性杂交信号最强,尤其是在初情期更明显;各级卵泡中以初情期时成熟卵泡的阳性杂交信号最强.     

NKB及其受体NK3R基因在发情周期不同阶段小鼠下丘脑-垂体-卵巢中的表达研究

为了揭示NKB/NK3R调控雌性哺乳动物生殖激素分泌的作用机制,试验将40只6～8周龄雌性小鼠按照发情周期不同阶段分类,处死后采集丘脑、垂体和卵巢组织,提取RNA,采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测发情周期各阶段小鼠下丘脑、垂体和卵巢中NKB、NK3R基因的相对表达量并进行比较分析。结果表明：在发情前期和发情期,小鼠NKB基因的相对表达量均为垂体最高,卵巢居中,下丘脑最低;在发情后期,小鼠NKB基因的相对表达量为下丘脑最高,垂体居中和卵巢最低;在发情间期,小鼠NKB基因的相对表达量为下丘脑最高,卵巢居中,垂体最低。NK3R基因的相对表达量在发情前期、发情期、发情后期和发情间期的趋势一致,均为下丘脑最高,垂体居中,卵巢最低。各组织中,NK3基因的相对表达量均为发情前期最高,发情期居中,发情后期和发情间期较低。在下丘脑中,发情周期不同阶段NK3R基因的相对表达量差异不大;在垂体和卵巢中,NK3R基因的相对表达量均为发情后期最高,发情间期居中,发情前期和发情期较低。提示NKB/NK3R可能参与了雌性哺乳动物发情周期各阶段生殖激素的合成与分泌。     

初情期母牛下丘脑-垂体-卵巢转录组分析

通过对3头18月龄安格斯牛下丘脑-垂体-卵巢组织进行转录组测序和生物信息学比较分析,筛选和挖掘与肉牛繁殖活动相关候选基因和信号通路。通过转录组测序,进行表达基因分析、GO和KEGG富集分析以及信号通路筛选。结果显示,共获得61.92 Gb Clean Data,各样品Clean Data均达到6.88 Gb,Q30碱基百分比在92.42%及以上。有15154个基因在所有组织中都有表达,有4780个基因只在2种组织器官中共同表达,有5809个基因只在其中的一个组织器官中表达。下丘脑-垂体-卵巢各组织所表达的基因中,在GO数据库得到注释的分别为2168,2101,13777个,在KEGG数据库中得到注释分别有12477,12446,12176个。在所有KEGG通路中,Notch信号通路(notch signaling pathway)、神经营养因子信号通路(neurotrophin signaling pathway)和血管内皮生长因子信号通路(VEGF signaling pathway)的表达频率最高,说明这些信号通路可能也参与下丘脑-垂体-卵巢轴对母牛繁殖活动的调节。     

鹅下丘脑-垂体-卵巢轴上ghrelin的免疫组化定位

生长激素促分泌素受体的配体(ghrelin)是Ko-jima等人于1999年发现的,目前为止第1个天然的内源性的生长激素促分泌素受体(GHS-R)的配体[1].哺乳动物ghrelin为28个氨基酸残基的多肽,禽类的ghrelin则由26个氨基酸残基组成[2].     

褪黑素对水牛卵母细胞体外成熟的影响及其受体介导机制的探究

旨在研究外源性褪黑素(melatonin,MT)对水牛卵母细胞体外成熟的影响及其受体介导机制。进行以下试验:1)通过免疫荧光技术检测了水牛卵丘细胞和卵母细胞上褪黑素的两种受体MT1和MT2的表达情况。2)在体外成熟培养液中添加不同浓度褪黑素(0、10^-9、10^-8、10^(-7 )mol·L^-1),观察褪黑素对水牛卵母细胞体外成熟及其随后体外受精胚胎发育的影响。3)根据褪黑素最优浓度,成熟液中添加不同处理组合:未处理组、褪黑素(10^(-8 )mol·L^(-1 )MT)、褪黑素受体拮抗剂(10^(-8 )mol·L^(-1 )LZU)、褪黑素受体激动剂(10^(-8 )mol·L^(-1 )IIK7)、同时添加褪黑素受体拮抗剂和褪黑素(10^(-8 )mol·L^(-1 )LZU+10^(-8 )mol·L^(-1 )MT),处理卵母细胞24h后,统计卵母细胞第一极体排出率,并对第一极体的卵母细胞进行ELISA Kit检测,同时,成熟后的卵母细胞分别进行体外受精,并统计其分裂率和囊胚率。结果显示:1)在水牛卵丘细胞和卵母细胞上均发现有褪黑素受体MT1和MT2;2)褪黑素处理的各组卵母细胞成熟率均显著高于0 mol·L^-1组(P<0.05)。随后,各组受精后的分裂率也显著高于0mol·L^(-1 )MT组(P<0.05),而且10^-8和10^(-7 )mol·L^(-1 )MT组的囊胚率显著高于0mol·L^(-1 )MT组(P<0.05);3)褪黑素受体拮抗剂(10^(-8 )mol·L^(-1 )LZU)组的卵母细胞成熟率、体外受精胚胎分裂率和囊胚率与未添加组相比,差异均不显著(P>0.05);褪黑素受体激动剂(10^(-8 )mol·L^(-1 )IIK7)组的水牛卵母细胞成熟率、体外受精胚胎分裂率和囊胚率均显著高于未添加组(P<0.05),但与褪黑素组(10^(-8 )mol·L^(-1 )MT)相比差异不显著(P>0.05);同时添加褪黑素受体拮抗剂和褪黑素(10^(-8 )mol·L^(-1 )LZU+10^(-8 )mol·L^(-1 )MT)组的水牛卵母细胞成熟率、体外受精后胚胎的分裂率和囊胚率与未添加组相比,差异不显著(P>0.05)。4)褪黑素处理组的卵母细胞内cAMP的含量显著低于未处理组,而cGMP含量显著高于未处理组(P<0.05)。综上表明,褪黑素通过与细胞膜G蛋白偶联受体MT1和MT2结合,从而抑制了cAMP合成,提高cGMP含量,进而促进卵母细胞成熟及早期胚胎发育。     

母兔超数排卵影响因素的研究

采用国产促性腺激素对新西兰白兔进行超数排卵试验,研究激素、季节及兔龄对超排效果的影响。结果发现:①FSH组(30.05±8.97个/只)平均排卵数显著高于PMSG组(22.46±5.18个/只)(P＜0.05)。②母兔在春季、夏季、秋季、冬季的平均排卵数为32.34±5.58、15.96±4.11、24.18±4.95和22.61±3.75个/只,春季的处理效果显著优于其他3个季节(P＜0.05),而秋季和冬季处理组之间没有显著差异(P＞0.05),但都显著高于夏季(P＜0.05)。③经产母兔超排处理后的平均排卵数(30.56 ± 6.79个/只)显著高于青年母兔平均排卵数(21.60 ± 3.66个/只)(P＜0.05)。以上结果表明,SH超排效果优于PMSG,且在春季对母兔进行超排处理比较合适,经产母兔比青年母兔超排效果更好。     

绵羊附睾褪黑素受体1的表达与定位

为研究褪黑素受体1（MT1）在不同年龄绵羊附睾中的表达模式,选用幼龄绵羊（2~3月龄）、青年绵羊（6~8月龄）和成年绵羊（2~3岁）的附睾,采用实时荧光定量PCR和免疫组化技术检测不同年龄绵羊附睾各部位MT1基因mRNA的表达量和MT1的分布情况。结果表明：幼龄绵羊附睾尾MT1基因的转录水平极显著高于附睾头和附睾体（P<0.01）;青年绵羊附睾体和附睾尾MT1基因的转录水平显著高于附睾头（P<0.05）;成年绵羊附睾尾MT1基因的转录水平显著高于附睾头和附睾体（P<0.05）,附睾各部位MT1基因的转录水平随年龄增长呈明显降低趋势;定位结果显示,MT1在各年龄组绵羊附睾的各个部位均有分布,且主要分布在附睾上皮细胞中。综合上述结果,不同年龄绵羊附睾的不同部位均有MT1表达和分布,并随年龄增长各部位的表达量降低,相同年龄绵羊附睾尾MT1的表达水平较高。     

促黄体素受体在母畜生殖道的分布与表达

在多种动物包括灵长类动物、猪、牛、火鸡和人,子宫内都发现有促黄体素(LH)或人绒毛膜促性腺激素(hCG)及其mRNA的结合位点.牛、猪在整个发情周期子宫内都存在LH受体(LHR)蛋白及其mRNA,并在黄体期表达最高.LH通过激活腺苷酸环化酶和磷脂酶C信号途径,增加前列腺素合成酶(PGSH),也称环加氧酶(COX)的活性,从而促进前列腺素(PG)的合成.牛、猪、羊在发情周期的15 d左右PGF2α升高,这与子宫内LHR的活化有关.在不同种动物的输卵管、子宫内膜、子宫肌层和子宫颈,LHR的释放呈现出动态特征,表明LH在发情周期和胚胎附植的分子自分泌-旁分泌调节中可能具有重要的作用.     

母兔妊娠期饲粮蛋氨酸水平对仔兔毛囊发育的影响

本文旨在研究母兔妊娠期饲粮蛋氨酸水平对仔兔毛囊发育的影响.选择体重、胎次和历史产毛量相近的健康长毛兔母兔54只,随机分为3组,每组18个重复,每个重复1只.妊娠期各组分别饲喂蛋氨酸水平为0.51％、0.71％和0.91％的饲粮.测定18胎龄、26胎龄、初生和2月龄时仔兔背部皮肤毛囊密度、直径以及2月龄时毛纤维直径.结果...     

妊娠后期母兔注射甲状腺素T4对仔兔的影响

为探讨妊娠后期母兔注射甲状腺素T4对仔兔的影响,将9只妊娠16日皖系长毛兔随机分成2组,试验组5只,对照组4只.试验组皖系长毛兔母兔每只肌肉注射0.3 mg甲状腺素(T4),发现T4处理未能显著影响仔兔初生重、4周龄和6周龄体重,但显著提高了7～14 d、21～28 d和35～42 d仔兔的增重,并且其他期间的增重试验...     

ER免疫反应产物在幼龄公山羊下丘脑-垂体-性腺轴的表达

应用免疫组化SP法时雌激素受体(ER)免疫反应产物在幼龄公山羊下丘脑、垂体、性腺中的分布特点进行了研究。结果显示，下丘脑中ER免疫反应阳性神经元主要分布在视上核、室旁核、室周核等9个核团，在视前区、下丘脑外侧区等核团也有一定数量的阳性神经元；阳性细胞呈圆形、卵圆形、三角形不等，阳性物质大多位于细胞质和胞核，阳性纤维散布于各阳性核团中；在正中隆起和第三脑室室管膜可见大量小而密集排列的深染的阳性神经元。神经垂体中可见大小不等、排列较均匀且染色较深的纤维，腺垂体中腺细胞呈强阳性着色。睾丸曲细精管中的初级精母细胞和支持细胞以及睾丸间质细胞中的ER阳性产物均为微弱表达。由此表明，幼龄公山羊雌激素除作用于性腺外，还主要作用于中枢神经系统的广泛区域，推测其参与了脑中生殖、内分泌、认知等多种功能的调控。     

玉米赤霉烯酮对断奶小母猪卵巢指数及孕激素受体分布和表达的影响

本试验旨在研究不同水平玉米赤霉烯酮(ZEA)污染饲粮对断奶小母猪卵巢指数及孕激素受体的阳性分布和mRNA相对表达量的影响。选择40头35~38日龄健康三元杂交(杜×长×大)断奶小母猪,按平均体重[(14.01±0.86)kg]随机分为4个组,采用单笼饲养。对照组饲喂基础饲粮,试验组分别在基础饲粮中添加0.5、1.0和1.5 mg/kg的ZEA,4个组ZEA的测定值分别为0、(0.52±0.07)mg/kg、(1.04±0.03)mg/kg和(1.51±0.13)mg/kg。试验期35 d。结果表明:随着饲粮ZEA水平的升高,断奶小母猪卵巢指数呈一次线性升高(P0.01);1.0 mg/kg ZEA组的卵巢指数显著高于1.5 mg/kg ZEA组(P0.05),1.5 mg/kg ZEA组的卵巢指数显著高于0.5 mg/kg ZEA组和对照组(P0.05)。随着饲粮ZEA水平的升高,断奶小母猪卵巢孕激素受体累积光密度(IOD)和mRNA相对表达量均呈一次线性升高(P0.01);1.5 mg/kg ZEA组的孕激素受体IOD和mRNA相对表达量显著高于1.0 mg/kg ZEA组(P0.05),1.0 mg/kg ZEA组又显著高于0.5 mg/kg ZEA组和对照组(P0.05)。免疫组化结果显示断奶小母猪卵巢中孕激素受体免疫阳性物质主要分布于原始卵泡和生长卵泡的卵母细胞及颗粒细胞、卵泡膜细胞及血管壁细胞。随着饲粮ZEA水平的升高和卵泡闭锁程度的增加,免疫阳性反应明显增强,但卵巢内孕激素受体免疫阳性物质的分布位置没有因ZEA的水平发生明显改变。由此可见,ZEA(1.0~1.5 mg/kg)可以通过调控断奶小母猪卵巢中孕激素受体的高水平表达,使孕激素受体的水平超出正向调节卵泡生长的限值,从而促使卵泡闭锁,降低卵巢指数,改变卵巢发育,进而影响断奶小母猪生殖系统的健康。     

水杨酸钠对兔体内青霉素G钠药动学及组织分布的影响

给兔体肌注青霉素Ｇ钠，同时静注水杨酸钠，给药后不同时间采样，用微生物管碟法测定血药浓度及组织中的浓度，观察了水杨酸钠对兔体内青霉素Ｇ钠药动学及组织分布的影响。实验兔的药时数据符合有吸收因素二室开放模型。与对照组比较，实验组的动力学参数β、Ｋ２１、Ｋｅｌ的值显著减小，而参数Ｋ１２、ｔ１／２β、ＡＵＣ、ＴＣＰ的值显著增加。对照组与实验组的青霉素Ｇ钠在血液与肝、肾、肺或肌肉间的分布没有显著差异。     

电脉冲刺激肾旁穴对兔丘脑雌激素受体蛋白表达的影响

采用电脉冲刺激穴位法及免疫组织化学SP法，研究了电脉冲刺激肾旁穴对丘脑内雌激素受体免疫反应阳性产物的影响。结果发现雌激素受体免疫反应阳性产物在丘脑内广泛分布，可见电针组丘脑室旁核、丘脑腹外侧核、丘脑腹内侧核、丘脑腹主核、丘脑中央中核、丘脑网状核、丘脑室周核等核区有大量阳性产物，且多分布于神经元的胞浆、胞核和突起中、有少部分分布于胞膜上，染色较深，突起明显，细胞形态多样，轮廓清晰；而对照组相应神经核团中阳性细胞数量较少且淡染，突起也不明显，形态单一或轮廓不清。两组阳性产物的染色强度和细胞数目均差异显著。以上结果表明电脉冲刺激肾旁穴可使家兔上述核团内雌激素受体的表达增强。