策勒黑羊多胎性的血液生化遗传标记

采用垂直板高pH不连续SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,研究了策勒黑羊成年母羊(单胎与多胎)血清乳酸脱氢酶(IDH)同工酶谱、血清转铁蛋白(Tf)、血清白蛋白(Alb)的遗传多态性.电泳后的图谱应用Bio-Rad QuantityOne中的电泳条带分析(band analysis)软件进行条带标记.研究表明:策勒黑羊血清转铁蛋白(Tf)的C基因、血清白蛋白(Alb)W基因、血清乳酸脱氢酶(LDH)同工酶的LDH4酶带和LDHy酶带与多胎性有关.     

小尾寒羊GnRH基因组织表达、多态性及其与产羔性状关联分析

为揭示GnRH基因在小尾寒羊下丘脑-垂体-卵巢轴(Hypothalamic-pituitary-ovarian axis,HPOA)中的表达规律、多态性及其与产羔数的关系,深入了解其对小尾寒羊多羔的作用,采用实时荧光定量PCR技术对6只小尾寒羊(FecB++型单、多羔母羊各3只)的生殖组织及脑组织中GnRH基因的表达谱进行分析,同时采用Sequenom MassARRAY~?SNP技术对380只小尾寒羊和共380只的小尾寒羊、滩羊、苏尼特羊、策勒黑羊、湖羊和草原型藏羊GnRH基因2个单核苷酸多态性位点(Single nucleotide polymorphisms,SNPs)的进行多态性检测,并与小尾寒羊产羔数进行关联分析。结果显示,GnRH基因在下丘脑、卵巢和子宫组织均有表达,其中在下丘脑高表达。在小尾寒羊多羔群体中,GnRH基因在卵巢、大脑、下丘脑、垂体的表达均极显著高于单羔群体(P0.01),暗示其可能参与了小尾寒羊多羔性状调控。分型发现GnRH基因2个位点基因型频率和等位基因频率在单、多羔品种间差异均不显著(P0.05)。关联分析表明,GnRH基因的2个SNPs位点的多态性与小尾寒羊各胎产羔数差异均不显著(P0.05);2个SNPs在所有绵羊品种中均表现为低度多态(PIC0.25);卡方适合性检验表明,2个SNPs在各个绵羊品种中均处于Hardy-Weinberg平衡状态(P0.05)。     

湖羊BMP2、BMP4、BMP6和BMP7基因mRNA表达水平与排卵数关系的研究

 【目的】研究湖羊卵巢组织BMP2、BMP4、BMP6和BMP7基因mRNA表达水平与排卵数的相关性,筛选影响湖羊多胎性状的候选基因,为揭示湖羊高繁多胎分子遗传机理提供参考。【方法】选取16只经产湖羊母羊,分为产单羔组和多羔组,发情后24～36 h屠宰,取卵巢,计数排卵点,记录排卵数;应用RT-PCR技术检测BMP2、BMP4、BMP6和BMP7基因的组织表达特征,进一步利用实时荧光定量PCR技术分析各基因mRNA在单羔组和多羔组卵巢组织中的表达差异。【结果】BMP2、BMP4和BMP7基因在湖羊母羊卵巢组织内表达,而且在垂体及下丘脑、子宫、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、输卵管组织中均有表达;BMP6基因仅在湖羊母羊卵巢、肾脏、肌肉和输卵管组织中表达。在卵巢组织,多羔组排卵数极显著高于单羔组（P＜0.01）,且多羔组BMP4基因mRNA表达极显著高于单羔组（P＜0.01）,而BMP2、BMP6和BMP7基因mRNA表达在单羔组和多羔组间无显著差异（P＞0.05）;相关分析表明在卵巢组织中,只有BMP4基因mRNA表达与排卵数呈正相关(r = 0.741,P ＜0.05)。【结论】BMP4基因mRNA表达在单羔组和多羔组间差异显著,可能对湖羊排卵数起关键作用,是影响湖羊排卵数的候选基因。     

利用血液蛋白多态性分析策勒黑羊与和田羊、卡拉库尔羊遗传距离

本实验采用垂直板高pH不连续SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,研究了策勒黑羊、和田羊、卡拉库尔羊血清转铁蛋白(Tf)、前白蛋白(Pr)、血清白蛋白(A lb)三个基因座的遗传多态性。研究表明:策勒黑羊与和田羊、卡拉库尔羊的血清转铁蛋白(Tf)、血清白蛋白(A lb)位点基因型有差别,前白蛋白(Pr)位点基因型相同。计算了三种绵羊的基因型频率、基因频率,策勒黑羊与和田羊、卡拉库尔羊之间的遗传距离,并进行了分析。结果表明:策勒黑羊与和田羊遗传距离最近,其次为卡拉库尔羊。     

绵羊BMPR2基因组织表达及其多态性与产羔数的相关性分析

[目的]为探讨骨形态发生蛋白2型受体(bone morphogenetic protein receptor 2,BMPR2)基因在卵泡期和黄体期及单羔和多羔小尾寒羊组织表达特征及其多态性与小尾寒羊产羔数之间的关系.[方法]采用qPCR技术检测BMPR2基因在小尾寒羊14种组织中的表达模式.同时,使用Sequenom MassARRAY?SNP技术对BMPR2基因3个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点在6个绵羊品种中的多态性进行检测,并与小尾寒羊产羔数进行关联.[结果]BMPR2在14种组织中呈广谱表达,其中在肺脏、大脑、肝脏以及下丘脑组织高表达;BMPR2在卵泡期多羔组下丘脑-垂体-卵巢组织中的表达量均高于单羔组.BMPR2基因g.203707935A>G和g.203708072T>C位点在单、多羔绵羊品种间的等位基因频率差异显著(P<0.05).通过相关分析发现,g.203708352A>G位点与小尾寒羊三胎产羔数显著相关(P<0.05),野生型产羔数显著高于杂合型.通过对该位点不同基因型与小尾寒羊FecB基因型复合分析发现,3种复合基因型与小尾寒羊三胎产羔数显著关联(P<0.05),AA-GG基因型产羔数显著高于AA-AG和AA-AA基因型,推测该位点突变可能削弱了FecB基因信号强度,导致产羔数下降.[结论]BMPR2基因g.203708352A>G位点与小尾寒羊产羔数呈显著负相关,为小尾寒羊产羔性状选育提供了参考依据.     

6个绵羊品种（系）不同血液蛋白基因型母羊间多羔性状差异性的研究

采用非连续性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测了34只小尾寒羊、37只无角陶赛特、35只萨福克和中国美利奴（新疆型）多胎品系（29只）、肉用品系（30只）、体大品系（29只）6个品种（系）共194只母羊的血红蛋白（Hb）、血清酯酶（ES）和血清转铁蛋白（Tf）3个血液蛋白（酶）位点的多态性,并对不同基因型母羊间的多羔性状进行差异分析。结果表明,萨福克HbBB基因型产羔数高于HbAB基因型（P〈0．01）,分别为1．81±0．40和1．00±0．00只;无角陶赛特HbAA、HbAB基因型均产双羔,因而HbA等位基因与双羔性状有关;而在其余4个品种（系）不同Hb基因型母羊间的多羔性无显著差异。小尾寒羊TfBB基因型平均产羔数最高,达到3．5只;中国美利奴肉用TfAC基因型和中国美利奴体大TfAA、TfCC基因型具有多羔的趋势;而在其余3个品种（系）Tf基因型母羊间的多羔性无显著差异。中国美利奴多胎和小尾寒羊的ESa表型均具有多羔的趋势;而在其他4个品种（系）ES表型母羊间的多羔性无显著差异间。本研究表明,绵羊血液蛋白位点的多羔基因型存在着品种（系）差异性,应根据不同品种（系）各自的多羔基因型进行绵羊多羔性状的选育。     

山东青山羊血清乳酸脱氢酶同工酶谱型的研究

用琼脂糖凝胶电泳技术,测定山东特有的羔皮青山羊血清 LDH 同工酶谱型。结果表明,青山羊血清 LDH 同工酶谱的基本特点是LDH-1>LDH 3>LDH 2>LDH-5>LDH-4。这与其它山羊相比,表现一定差异。部分青山羊的母羊除表现正常的5条谱带外,还表现1条新的酶带,暂称为 y 带,其电泳迁移率介于 LDH-3与 LDH-4,近乎 LDH-3。     

绵羊STAT5a基因intron10和exon12遗传特征分析

【目的】研究绵羊STAT5a基因第10内含子和第12外显子的遗传多态性和群体遗传特征。【方法以2个多羔绵羊品种湖羊(140只)和多浪羊(144只)及单羔羊藏绵羊(217只)为研究对象,应用PCR-SSCP方法分析其STAT5a基因第10内含子和第12外显子的遗传多态性和群体遗传特征。【结果】绵羊STAT5a基因第10内含子发现13 210AG突变,检测到3种基因型(AA、AG和GG)和2个等位基因(A和G);第12外显子上发现14 827AG突变,该突变属于同义突变,检测到3种基因型(MM、MN和NN)和2个等位基因(M和N)。在绵羊STAT5a基因第10内含子和第12外显子中,杂合子AG和MN分别为优势基因型,基因型频率在多羔绵羊和单羔绵羊品种间差异极显著(P0.01)。3个绵羊品种的多态信息含量均处于中度多态,藏绵羊的卡方值处于Hardy-Weinberg平衡状态,而湖羊和多浪羊偏离了Hardy-Weinberg平衡状态。【结论】绵羊STAT5a基因具有多态性,且基因型频率在不同产羔数品种间差异极显著(P0.01)。     

绵羊STAT5a基因intron10和exon12遗传特征分析

【目的】研究绵羊STAT5a基因第10内含子和第12外显子的遗传多态性和群体遗传特征。【方法】以2个多羔绵羊品种湖羊（140只）和多浪羊（144只）及单羔羊藏绵羊（217只）为研究对象,应用PCR-SSCP方法分析其STAT5a基因第10内含子和第12外显子的遗传多态性和群体遗传特征。【结果】绵羊STAT5a基因第10内含子发现13 210 Agt;G突变,检测到3种基因型（AA、AG和GG）和2个等位基因（A和G）;第12外显子上发现14 827 Agt;G突变,该突变属于同义突变,检测到3种基因型（MM、MN和NN）和2个等位基因（M和N）。在绵羊STAT5a基因第10内含子和第12外显子中,杂合子AG和MN分别为优势基因型,基因型频率在多羔绵羊和单羔绵羊品种间差异极显著（Plt;0.01）。3个绵羊品种的多态信息含量均处于中度多态,藏绵羊的卡方值处于Hardy-Weinberg平衡状态,而湖羊和多浪羊偏离了Hardy-Weinberg平衡状态。【结论】绵羊STAT5a基因具有多态性,且基因型频率在不同产羔数品种间差异极显著（Plt;0.01）。     

绵羊STAT5a基因intron10和exon12遗传特征分析

【目的】研究绵羊STAT5a基因第10内含子和第12外显子的遗传多态性和群体遗传特征。【方法】以2个多羔绵羊品种湖羊（140只）和多浪羊（144只）及单羔羊藏绵羊（217只）为研究对象,应用PCR-SSCP方法分析其STAT5a基因第10内含子和第12外显子的遗传多态性和群体遗传特征。【结果】绵羊STAT5a基因第10内含子发现13 210 Agt;G突变,检测到3种基因型（AA、AG和GG）和2个等位基因（A和G）;第12外显子上发现14 827 Agt;G突变,该突变属于同义突变,检测到3种基因型（MM、MN和NN）和2个等位基因（M和N）。在绵羊STAT5a基因第10内含子和第12外显子中,杂合子AG和MN分别为优势基因型,基因型频率在多羔绵羊和单羔绵羊品种间差异极显著（Plt;0.01）。3个绵羊品种的多态信息含量均处于中度多态,藏绵羊的卡方值处于Hardy-Weinberg平衡状态,而湖羊和多浪羊偏离了Hardy-Weinberg平衡状态。【结论】绵羊STAT5a基因具有多态性,且基因型频率在不同产羔数品种间差异极显著（Plt;0.01）。     

德州驴血清LDH同工酶特性的研究

应用中心产区简单随机抽样方法采集73头山东省沾化县德州驴的血液,用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)技术检测了LDH同工酶多型。结果表明,大部分个体都显示4条带,少数个体表现为5条活力带,个体间的差异很大。但整个群体LDH的变化特点为LDH3>LDH4>LDH1>LDH2>LDH5。     

湖羊能量与蛋白质需要量的研究

通过应用饲养试验、消化代谢试验与比较屠宰试验,获得大量数据,经过统计分析,求得湖羊妊娠母羊、吮乳羔羊、育成羔羊、哺乳母羊及配种公羊的能量与蛋白质的需要量。同时还测定出几项与制定湖羊饲养标准有关的重要参数,如每一公斤代谢体重的维持代谢能需要量[MEM/W#+（0.75）千克]及KG与KL,后二者分别为生长代谢能（MEG）与产乳代谢能（MEL）转化为生长净能（NEG）与产乳净能（NEL）的利用系数。本研究测得湖羊的MEM/W#+（0.75）千克,哺乳单羔和双羔母羊分别为109与119千卡、体重5、10与15千克的吮乳羔羊分别为99.5、109.6与102.6千卡,育成羔羊为93千卡、妊娠母羊为100.3千卡（2岁）和90.8千卡（3岁）;吮乳羔羊、育成羔羊与哺乳单羔母羊的KG值分别为0.68、0.31与0.70;哺乳单羔与双羔母羊的KL值分别为0.647与0.635。上述参数与国外报道的同类数值均很接近。     

基于ovine SNP 50K芯片对策勒黑羊繁殖和抗逆性状的遗传性分析

为筛选出策勒黑羊种质资源繁殖和抗逆性状分子标记和相关基因，本研究以100只无亲缘关系的策勒黑羊为研究对象，基于Illumina ovine SNP 50 K bead chip进行基因分型；用Plink1.90对基因组数据进行质量控制；对有效SNPs计算哈代-温伯格值，选择从小到大排列后前1%的分子标记，参考绵羊基因组(Oar＿v4.0)进行注释，对注释到的基因进行GO和KEGG分析。结果表明：1)共获得480个SNPs, 417个候选基因，其中，繁殖性状基因13个、抗逆性状相关基因30个；2)繁殖性状相关的基因有SOX9、GTF2A1、GNAQ等，抗逆性相关的基因有TMEM154、ZNF70、CREB3L2等。综上，本研究解析了策勒黑羊繁殖和抗逆性状基因的遗传规律，特别是对抗逆性相关候选基因研究，发现策勒黑羊群体携带抗肺炎相关的分子标记，为策勒黑羊保种和改良提供了分子水平的参考。     

添加圆葱寡糖对肉鸡代谢功能调控的研究

在肉鸡饲粮中添加圆葱寡糖(1.5％),对山东地方特色保种白羽鸡进行饲养试验,用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS)PAGE技术,分析血液中酯酶(EST)、乳酸脱氢酶(LDH)、蛋白质的多态。结果表明,试验组蛋白结构新出现>100Ku亚基组分,存在多态变化。EST同工酶快区Es-1位点,由多等位基因控制,酶带着色程度显著减弱,其活性下降45.8％,LDH同工酶出现4条酶谱带,酶带着色的程度明显增强,其活性增加2.5倍。提示圆葱寡糖直接或间接影响基因表达水平,调控生化生理代谢功能。     

策勒黑羊GDF9和BMP15基因多态性与产羔数关联分析

为了鉴定策勒黑羊BMP15和GDF9中的多态位点,并与产羔数性状进行关联分析,对相同饲养条件下81只具有产羔记录的策勒黑羊BMP15和GDF9基因完整ORF区进行测序。结果显示,在两个重要候选基因中共存在16个多态位点。GDF9基因有7个SNPs（分别为g.41769976G＞A、g.41769833G＞A、g.41769898G＞A、g.41769246A＞G、g.41769008T＞C、g.41769002A＞G）和g.41769723 TCAA缺失,其中：g.41769833G＞A 位点AA型比GG型平均多0.22只（P＜0.05）,其余6个突变位点均与产羔数不存在显著相关（P＞0.05）。BMP15基因存在9个突变位点：g.50986052C＞A、g.50985229A＞G、g.50985162T＞C、g.50985071C＞T、g.50983056C＞G、g.50982538T＞C、g.50981129A＞G、g.50980656T＞C和g.50981170T＞A,且这9个SNP位点与产羔数均不存在显著相关（P＞0.05）。结果可为策勒黑羊种群的保种育种提供理论参考。     

青海半细毛羊血红蛋白多态性及其与血清生化指标的相关性分析

[目的]探讨青海半细毛羊的血红蛋白多态性及其与7项血清生化指标间的相关性.[方法]采用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳法对29只青海半细毛羊的血红蛋白多态性及其与7项血清生化指标间的相关性进行分析.[结果]青海半细毛羊血红蛋白多态性存在HBA和HBB2种变异体,以HBB为优势基因.构成HBAA、HBAB和HBBB3种基因型,其基因型率分别为0.1379、0.5862和0.2759.HBA和HBB基因频率为0.431 0和0.5690,基因杂合度为0.4904.青海半细毛羊血液蛋白多态性与7项血清生化指标间均无显著相关性（P＞0.05）.[结论]该研究可为青海半细毛羊种质资源、亲缘关系以及品种选育和改良等方面的研究提供基础试验资料.     

TOLLIP基因3′侧翼区的群体遗传多态分析

为了寻找TOLLIP基因的突变位点,揭示中国荷斯坦牛的群体遗传特征。以中国荷斯坦牛群体66头个体为研究对象,用PCR方法扩增了牛TOLLIP基因3′侧翼区的部分片段,通过直接电泳与测序相结合的方法检测该片段的多态性,计算基因型频率,基因频率和多态信息含量,分析该多态位点在中国荷斯坦牛群体中的遗传特征。结果表明,该扩增片段的第43 bp处存在5个碱基(TCGGG)的缺失,致使多态性产生。其AA,AB和BB的基因型频率分别为0.3485,0.5152和0.1364;A等位基因(243 bp)和B等位基因(238 bp)的频率分别为0.6061和0.3939;多态信息含量和杂合度分别为0.3635和0.4775,表明该缺失突变在中国荷斯坦奶牛群体中处于中度多态;χ2适合性检验结果表明,中国荷斯坦牛群体在该位点的缺失突变未达到Hardy-Weinberg平衡状态(P>0.05)。     

猪Dlx5基因多态性及其与猪体尺和胸椎数的关系

为探讨猪远端缺失基因5(distal-less homeobox 5,Dlx5)的多态性、群体分布特性及其与体尺和胸椎数的关系,采用PCR-RFLP方法检测了猪Dlx5基因g.394C>T位点在6个中外猪品种中的多态性分布,并分析了该位点与猪体尺和胸椎数的关系。检测结果表明,经HhaⅠ酶切后在6个猪品种群体均发现了CC、CT和TT 3种基因型,其中C等位基因在莱芜黑猪中为优势等位基因,而T等位基因在里岔黑猪、鲁莱黑猪、杜洛克猪、大约克猪和长白猪中占优势。在该多态性位点,莱芜黑猪、里岔黑猪、鲁莱黑猪、杜洛克和长白猪群体均处于哈代—温伯格平衡(P>0.05),而大约克猪群体偏离平衡状态(P<0.05);基因型在群体间的分布差异极显著(P<0.01)。群体遗传特性分析表明,有效等位基因数在1.254～1.991之间;杜洛克猪的多态信息含量为0.182,属于低度多态,其余品种均在0.254～0.374之间,属于中度多态。关联分析结果表明,该多态性位点对莱芜黑猪体长、体高、屠前活重、腹围、胸围、腿臀围和胸椎数以及里岔黑猪胸椎数的影响均不显著(P>0.05)。Dlx5基因g.394C>T位点在猪群中存在多态,基因型分布在莱芜黑猪与其他猪种间不同,与猪体尺和胸椎数无显著关联。     

微卫星标记BMSS2508在4个山羊品种中的DNA多态性

为寻找山羊繁殖性能的多胎性分子标记,根据比较基因组学方法,选用位于绵羊6号染色体上与多胎基因(FEC^B)紧密连锁的微卫星标记BMS2508,分别检测了湘东黑山羊、南江黄羊、贵州黑山羊、波尔山羊该微卫星位点的等位基因频率、多态信息含量、有效等位基因数和杂合度．研究结果表明：BMS2508位点的多态信息含量／有效等位基因数／平均杂合度在湘东黑山羊、南江黄羊、贵州黑山羊、波尔山羊中分别为0．5927／2．6822／0．6272,0．7002／3．5366／0．7172,0．5765／2．3653／0．5772,0．7506／4．3295／0．7690．故该微卫星位点在4个山羊品种中具有比较丰富的遗传多态性,可用于山羊遗传多态性评估,也为研究该微卫星位点的DNA多态性与山羊繁殖性能的相关打下了基础．