不同部位皮下注射DNA疫苗对小鼠体液免疫的影响

主要探讨在小鼠不同部位皮下注射DNA疫苗对体液免疫应答的影响,为DNA疫苗在体内获得高滴度抗体提供优化条件.用RT-PCR从人肺癌细胞株A459中克隆VEGF片段,并插入pVAX1质粒构建pVAX1-VEGF真核表达质粒;在耳廓、胸部、腹部、尾跟部、背部及足垫的皮下注射1μg/μL pVAX1-VEGF疫苗DNA 100μL,ELISA法检测血清中VEGF抗原表达及其IgG抗体分布,测定血清中IgG2a和IgG1两亚型水平.实验结果发现：耳廓、胸部、腹部免疫产生的VEGF抗原较快,其中耳廓免疫产生的体液免疫最快最强,与胸部、腹部、背部、尾根及足垫免疫产生的体液免疫反应相比,具有统计学意义,同时pVAX1-VEGF疫苗组与pVAX1对照组的体液免疫差异显著,但pVAX1-VEGF疫苗组主要产生IgG2a型抗体.上述结果表明：所构建人VEGF的DNA疫苗能在小鼠体内有效表达,不同部位皮下免疫后均能产生抗VEGF的IgG抗体,以IgG2a抗体为主;但就抗原表达、抗体及IgG2a而言,以耳廓皮下接种最佳.     

不同类型猪蓝耳病疫苗的体液免疫效果比较

本试验分别使用不同类型疫苗对仔猪进行免疫,并对免疫抗体进行检测,观察并记录相应的数据,结果发现仔猪使用弱毒疫苗的抗体阳性率要高于灭活疫苗,但这并不意味着弱毒疫苗一定要比灭活疫苗的免疫效果好。     

不同类型猪蓝耳病疫苗的体液免疫效果比较

本试验分别使用不同类型疫苗对仔猪进行免疫,并对免疫抗体进行检测,观察并记录相应的数据,结果发现仔猪使用弱毒疫苗的抗体阳性率要高于灭活疫苗,但这并不意味着弱毒疫苗一定要比灭活疫苗的免疫效果好。     

壳聚糖对口蹄疫DNA疫苗黏膜免疫的影响

以寻求有效DNA疫苗黏膜免疫途径为目的，利用带有负电荷的具有黏膜粘附性多糖-壳聚糖来包裹口蹄疫DNA疫苗pcD～VP1形成纳米级颗粒，用此颗粒经滴鼻、口服、直肠和生殖道4种黏膜免疫小鼠，检测小鼠的针对口蹄疫的体液和细胞免疫水平。结果显示：壳聚糖／pcD-VP1滴鼻免疫小鼠，抗体的高峰来临比只免疫pcD-VP1提前2周。直肠免疫处理中也呈现如此效果；经口服和生殖道途径的免疫，均没有呈现比pcD-VP1免疫组更好的抗体水平。但壳聚糖／pcD-VP1在生殖道和直肠免疫途径里均比pcD-VP1免疫组P．P．结的T细胞增殖水平高。所以。除口服途径以外，在滴鼻、直肠和生殖道免疫中，壳聚糖对质粒的包裹均一定程度上提高了DNA疫苗黏膜免疫的效果。     

丙型肝炎病毒囊膜蛋白基因疫苗的构建及其诱导小鼠体液免疫应答

将丙型肝炎病毒（HCV）H77株全长囊膜蛋白基因克隆到真核表达载体pcDNA4.0的CMV启动子下游，采用磷酸钙转染法将重组质粒转入293T细胞，用流式细胞仪检测细胞瞬时表达的目的蛋白。将构建的重组质粒肌注BALB/c小鼠，用表达HCV囊膜蛋白的SP2/0细胞作为抗原，用流式细胞仪检测小鼠血清HCV囊膜蛋白抗体。再用原核系统表达的E2蛋白作为抗原,Western Blot检测免疫小鼠血清抗体。试验结果显示,囊膜蛋白E1E2在293T细胞膜上进行了瞬时表达，基因疫苗免疫小鼠后产生了抗HCV囊膜蛋白的抗体，该抗体能与表达HCV囊膜蛋白的SP2/0细胞特异性结合，Western Blot表明该抗体也能与原核系统表达的E2蛋白结合。     

抗肿瘤DNA疫苗

抗肿瘤DNA疫苗是一种调解免疫功能的基因治疗苗,它包括含有免疫刺激序列的质粒载体,肿瘤特异性抗原和肿瘤相关抗原表位。DC细胞将同时以抗原表位与MHC-I类分子形成复合物和与MHC-II分子形成复合物途径加工,提呈。活化CD4+和CD8+T细胞,同时产生抗肿瘤免疫和治疗作用。     

DNA疫苗研究进展

DNA疫苗的研究已成为疫苗研究领域的热点,被称为疫苗的第3次革命.分析了DNA疫苗的优缺点、免疫机制、优化策略等.     

DNA疫苗及其应用

DNA疫苗是90年代初发展起来的新的免疫学技术，被誉为第三次疫苗革命。DNA疫苗是指直接把带有目的抗原基因的重组质粒转染或注射到动物细胞中，使之在细胞内持续表达出天然的抗原物质。这些目的蛋白质经正确的糖基化修饰等加工处理后，与主要组织相容性复合物抗原形成复合物并被提到细胞表面，诱导特异性体液免疫应答和细胞免疫应答，使动物获得保护。DNA疫苗的免疫机制已被多数学者所接受，其应用潜力也得到世界各国的重视。美国已批准流感、结核、疟疾、乙肝等数种DNA疫苗做临床实验，其中结核和疟疾DNA疫苗已获准生产。我国也有10…     

CpG DNA对鸡传染性喉气管炎病毒DNA疫苗免疫效果的影响

 将分别构建的含有鸡传染性喉气管炎病毒（ＩＬＴＶ）王岗株ｇＢｇＣ和ｇＤ基因的重组真核表达质粒及ＣＰＧＤＮＡ佐剂分组肌肉注射 ＳＰＦ鸡，检测了免疫后的抗体水平，并观测了攻毒后的免疫保护效果。实验结果显示，ＣｐＧＤＮＡ佐剂和ＤＮＡ疫苗联合免疫后的抗体水平比单一使用ＤＮＡ疫苗的要高，而佐剂组的发病率、死亡率均低于非佐剂组，保护率则高于非佐剂组。这表明 ＣｐＧ ＤＮＡ佐剂增强了 ＩＬＴＶ ＤＮＡ疫苗的免疫效果。     

槲皮素对免疫低下小鼠体液免疫功能的影响

本试验探讨了不同剂量槲皮素对免疫低下小鼠体液免疫功能的影响。通过氢化可的松或环磷酰胺建立免疫抑制小鼠模型,灌胃不同剂量的槲皮素。10d后测定免疫器官指数、脾脏抗体形成细胞和血清溶血素含量。结果表明,槲皮素高、中剂量组小鼠免疫器官指数、抗体形成细胞OD值及血清溶血素HC50明显高于模型组(P<0.05)。     

小鼠对pGM-CSF/SS生长抑素基因疫苗的免疫应答

通过研究细胞因子GM-CSF与生长抑素pcS/2SS融合表达质粒pGM-CSF/SS诱导小鼠免疫应答的影响,探求生长抑素基因免疫新策略。将60只20日龄雄性昆明小白鼠均分为6组,分别用PBS(C0)、pGM-CSF质粒(C1)、pGM-CSF/SS质粒(T1、T2、T3)、pcS/2SS(T4)质粒口服免疫,T1~T4组的免疫剂量分别为2×106cfu/mL、2×108cfu/mL、2×1010cfu/mL、2×108cfu/mL,以上质粒均以减毒沙门氏菌为传导载体。结果显示:pGM-CSF/SS组的抗生长抑素抗体AP/AN值显著高于pcS/2SS组,阳性鼠体增重亦高于pcS/2SS组,抗体阳性率分别是71.4%和40.0%。另外,高剂量组的AP/AN值极显著高于低剂量组,显著高于中剂量组;中剂量组的AP/AN值显著高于低剂量组,高剂量组的抗体阳性率也明显高于中剂量组和低剂量组,分别为100%、71.4%和20.0%。可见,pGM-CSF/SS疫苗的免疫效果优于pcS/2SS疫苗,且pGM-CSF/SS疫苗呈剂量依赖关系。这些结果显示出细胞因子GM-CSF可以增强生长抑素DNA疫苗的免疫效果。     

玉蕈生物制剂对小鼠体液免疫功能的影响

[目的]探讨玉蕈生物制剂对小鼠体液免疫功能的影响。[方法]分别以1、2、4 g/(kg.bw)3个剂量组的玉蕈生物制剂灌胃小鼠30 d,测定抗体生成细胞和血清溶血素。[结果]玉蕈生物制剂能提高小鼠抗体的生成细胞数和血清溶血素水平。[结论]玉蕈生物制剂具有增强小鼠体液免疫功能的作用。     

鸡大肠杆菌(O50)菌毛抗原气雾免疫和菌毛油乳苗皮下免疫效果比较研究

比较了鸡大肠杆菌（Ｏ５０）菌毛抗原液气雾免疫与菌毛油乳苗皮下免疫的效果。油乳剂疫苗皮下免疫与菌毛液气雾免疫攻毒后的发病率分别是１３．３３％和２０％,病变差异不显著（Ｐ〉０．０５）,而阳性对照组攻麦发病率为８０％,病变差异显著。结果,鸡大肠杆菌菌毛液气雾免疫与菌毛油乳剂疫苗皮下注射免疫效果接近。     

结核分枝杆菌三价DNA疫苗在奶牛体内诱导的免疫应答

[目的]研究结核分枝杆菌Ag85B、MPB64和MPT83抗原DNA疫苗在奶牛体内诱导的免疫应答.[方法]以PJW4303为载体,构建上述3种抗原基因的三价DNA疫苗,免疫6月龄荷斯坦奶牛3次.ELISA法检测免疫奶牛的特异性抗体滴度.利用双抗夹心ELISA定量测定免疫奶牛各月IFN-γ浓度.[结果]免疫前奶牛体内特异性抗体为阴性,1免、2免后抗体效价上升较缓,3免后抗体效价上升快.MPT83特异性抗体上升最快,抗体效价1:3200持续6个月;Ag85B特异性抗体效价1:3200持续2个月;MPT64特异性抗体效价较低.免疫奶牛中MPT83、Ag85B、MPT64三种蛋白诱导产生IFN-γ在3免后6个月到达最高,浓度分别为(1 098.95±16.5.03)、(711.45士110.43)、(355.06±72.76) pg/mL,阴性对照组PBS刺激IFN -γ浓度为(114.5±27.46)pg/mL.阴性对照与三种抗原相比,差异均极显著(P＜0.01).[结论]多价核酸疫苗能同时诱导机体产生细胞免疫应答和体液免疫应答,可能有利于增强疫苗对抗结核病的抗性.     

Enhancement Effect of CpG DNA on the Somatostatin DNA Vaccine in Mice

To study the immune effect of CpGDNA on somatostatin （SS） DNA vaccine, the 20-day-old experimental mice were immunized with 20 lag SS eukaryotic expression plasmid pES/2SS with different adjuvants in equal dose, such as the synthetic CpG-ODN, the pE-CpG plasmid, E. coli DNA and the crude liposome. A booster was given two weeks later. The results showed that the body weight gain of female mice in the SS immunized group was higher than that of the control （P 〈0.05）. The levels of antibodies against SS, IgG2a/IgG1, spleen lymphocyte proliferation activity and the concentrations of GH and IGF-Ⅰ in the DNA vaccine groups combined with CpGDNA were significantly increased compared to that of the group immunized with DNA vaccine alone. All these suggested the recombinant SS expression plasmid can stimulate animals to produce antibodies against SS, and CpGDNA adjuvant can enhance the immune effect of DNA vaccine against SS and influence the concentration of GH and IGF-Ⅰ .     

云芝多糖对鸡新城疫体液免疫效果的影响

[目的]探究云芝多糖对鸡新城疫体液免疫抗体水平的影响。[方法]云芝多糖以肌肉注射、口服和稀释疫苗滴鼻点眼3种方式配合鸡新城疫克隆30疫苗免疫7日龄雏鸡,首免10 d后进行第2次免疫,并分别于首免后第5、10、18、25、30、40、70天测定其血凝抑制(HI)抗体效价。[结果]3种作用方式下的云芝多糖均具有明显增强体液免疫效果的作用。其中,以口服免疫组的抗体水平上升得最高,持续时间最长,但其用量较大;注射组抗体产生最快,但持续时间比口服组略短。滴鼻点眼组的抗体效价与对照组差异显著(P<0.05)。[结论]云芝多糖能大大提高机体的体液免疫水平。     

基因佐剂CpGDNA对生长抑素DNA疫苗pES/2SS的作用

 【目的】探讨CpGDNA对生长抑素DNA疫苗免疫小鼠免疫效果的影响。【方法】生长抑素质粒pES/2SS分别与CpG-ODN、pE-CpG、细菌DNA、脂质体配合免疫小鼠，疫苗剂量为20μg/只，佐剂等量混合，2周后加强免疫。【结果】雌性小鼠免疫后4、6周，疫苗组平均增重显著高于对照组(P<0.05)。CpGDNA和DNA疫苗联合免疫后SS抗体P/N值、IgG2a/IgG1、脾细胞活性、GH和IGF-I均比单一使用DNA疫苗的高(P<0.05)。免疫后4周，P/N值以pES/2SS + CpGODN组最高，SI值以pES/2SS+ CpG-ODN组最高。CpGDNA佐剂组GH从第2周开始升高，至第6周达高峰，显著高于pES/2SS组（P<0.01），CpG-ODN组GH高水平持续时间最长，至免疫后8周，仍显著高于pES/2SS组（P<0.01）。CpGDNA组IGF-I值显著高于pES/2SS疫苗组（P<0.05）。【结论】生长抑素基因免疫小鼠可以产生SS抗体，而含CpGDNA序列的核酸佐剂及脂质体粗品，可以增强生长抑素基因疫苗的效果。     

黏膜免疫反应与猪病预防用疫苗研究

大部分的病原微生物均可通过黏膜感染动物机体,黏膜是抵御病原微生物入侵的第一道屏障。黏膜免疫操作简便,对猪应激小,适合规模化猪场使用,是目前猪用疫苗研究的新方向。黏膜免疫佐剂和黏膜免疫的途径是黏膜免疫能否取得成功的关键,猪的黏膜免疫疫苗研究也取得了一定的进展。文章介绍了黏膜免疫及其在猪病防控中的应用情况。     

玉米中霉菌毒素对仔猪疫苗免疫应答的影响

[目的]研究霉变玉米中的毒素对仔猪免疫应答的影响。[方法]使用ELISA方法测定了霉变玉米中黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的含量;将霉变玉米饲喂仔猪,并测定仔猪血清中相应的抗体效价。[结果]试验组抗体水平明显低于对照组,免疫器官的组织切片也表明霉菌毒素可以明显抑制仔猪的免疫应答反应。[结论]玉米霉菌毒素对仔猪内脏器官和免疫应答具有重要影响。