甘薯羽状斑驳病毒和甘薯褪绿矮化病毒检测方法的建立

为了建立甘薯羽状斑驳病毒(Sweet potato feathery mottle virus, SPFMV)和甘薯矮化褪绿病毒(Sweet potato chlorotic stunt virus, SPCSV)的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法,提高检测灵敏度,实现结果的可视化。根据SPFMV外壳蛋白基因(CP)的核苷酸序列和SPCSV的热休克蛋白基因(Hsp 70)的核苷酸序列设计4条RT-LAMP特异性引物,采取单因素优化试验,对RT-LAMP反应体系中的多个因素包括时间、温度、BST聚合酶、Mg²⁺、RNase抑制剂、dNTPs和Betaine浓度优化,恒温扩增60 min。经琼脂糖凝胶电泳分析,SYBR Green I可视化显色,结果表明：SPFMV的优化反应体系为：FIP/BIP 2μL、F3/B3 0.5μL、BST聚合酶1.0μL、dNTPs 0.6μL、MgSO₄ 1.5μL、RNase抑制剂1.0μL、Betaine 7μL,62℃60 min。SPCSV的优化反应体系为：FIP/BIP 2μL、F3/B3...     

甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)生物学性状研究

经 1996～ 1999年研究 ,明确了侵染甘薯的甘薯羽状斑驳病毒 (SPFMV)的失毒温度为 6 0～ 6 5℃ ,稀释限点为 10 -3 ～ 10 -4 ,体外保毒期为 1天 ,用 2 3种植物测定表明 ,SPFMV侵染普通牵牛和巴西牵牛 ;桃蚜、棉蚜、豆蚜、绣线菊蚜均为SPFMV传毒介体 ,白粉虱不传。免疫电镜观察 ,SPFMV质粒线条状 ,长度 830～ 85 0nm。制备的SPFMV抗血清效价为 1∶10 2 4。     

甘薯羽状斑驳病毒和褪绿矮化病毒双重 RT-PCR 检测方法的建立

根据 GenBank 中公布的甘薯羽状斑驳病毒（Sweet potato feathery mottle virus,SPFMV）外壳蛋白（CP ）基因和甘薯褪绿矮化病毒（Sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV）热激蛋白（Hsp70）基因序列保守区域设计了2对特异性引物,通过 RT-PCR 反应程序的优化,建立了能同时检测 SPFMV 和 SPCSV 的双重 PCR检测体系。该检测体系能够1次扩增出 SPFMV 和 SPCSV 的特异性片段,片段大小为461 bp 和304 bp,测序结果表明,2种病毒序列与参考序列的同源性达93％以上。     

0.1%大黄素甲醚防控甘薯病毒病害介绍

一、研发背景甘薯病毒病害(SPVD)是由甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)和甘薯褪绿矮化病毒(SPCSV)同时感染甘薯并互作时,产生的甘薯病毒病害,是世界范围内对甘薯产业危害最大的病害之一。     

泰国进口玉米种子玉米褪绿斑驳病毒的检测

采用DAS-ELISA对从泰国进口的6个玉米品种的种子进行玉米褪绿斑驳病毒(Maize chlorotic mottle virus,MCMV)检测,结果显示其中1个样品为MCMV阳性,其他品种为阴性。RT-PCR检测结果进一步证实该样品为阳性。对PCR产物进行测序,将分离物序列与已发布的23条MCMV序列进行比对和系统进化分析,结果表明该分离物的序列与中国分离物和泰国分离物的遗传距离较近,同分化在进化树的同一个簇。取5号样品的100粒种子进行DAS-ELISA检测,结果仅有2粒种子为阳性,即MCMV的检出率为2%。     

甘薯羽状斑驳病毒（SPFMV）和甘薯褪绿矮化病毒（SPCSV）荧光定量RT-PCR检测方法的建立

【目的】甘薯病毒病（sweet potato virus disease, SPVD）是甘薯上的毁灭性病害之一,严重时可造成90%以上的产量损失。论文旨在对甘薯SPVD染病植株中甘薯羽状斑驳病毒（Sweet potato feathery mottle virus,SPFMV）和甘薯褪绿矮化病毒（Sweet potato chlorotic stunt virus, SPCSV）2种病毒的复合侵染情况进行研究,建立SPVD荧光定量RT-PCR快速检测方法,为SPVD的早期预警和流行学研究提供技术手段。【方法】选取重庆地区具有不同SPVD典型症状的甘薯品种（系）叶片作为试验材料,对其进行症状和SPFMV、SPCSV的硝酸纤维素膜酶联免疫吸附（NCM-ELISA）检测;对供试材料叶片中的SPFMV外壳蛋白CP和SPCSV热激蛋白HSP70核苷酸序列进行克隆和序列分析,根据保守核苷酸序列设计荧光定量RT-PCR检测引物。以甘薯泛素（ubiquitin,UBI）和组蛋白（histone,H2B）编码基因为内参对供试样品进行荧光定量RT-PCR检测,与感染SPVD典型症状和NCM-ELISA检测结果进行比较,并对取自不同甘薯品种(系)、相同品种(系)不同单株以及相同植株不同部位叶片检测结果进行比较,筛选可快速、精确、定量检测SPVD的荧光定量RT-PCR检测方法。【结果】症状学诊断表明不同甘薯品种（系）的感病叶片可能表现出不同的典型症状特点,同一品种（系）的不同感病植株感病症状相似但也存在差异。序列分析结果表明供试材料中SPFMV至少存在2个株系类型(RC和EA),SPCSV至少存在1个株系类型（WA）。在15份供试材料中,10份材料由NCM-ELISA和荧光定量RT-PCR均检测到SPFMV和SPCSV的共同感染,且荧光定量RT-PCR检测结果与发病症状和NCM-ELISA检测结果相吻合,其检测结果可准确反映甘薯SPVD染病植株中2种病毒复合侵染情况。荧光定量RT-PCR检测结果还表明,不同品种(系)或相同品种(系)不同单株病叶中SPFMV CP与SPCSV HSP70转录水平存在差异;相同植株顶端幼嫩叶片和中部成熟叶片中SPFMV CP与SPCSV HSP70转录水平也存在差异。染病材料中SPFMV中CP转录水平均相对较高,是SPCSV的HSP70转录水平的3-556倍。4份材料经NCM-ELISA检测只有SPFMV而没有SPCSV感染,而荧光定量RT-PCR还可检测到其中2份材料中SPCSV HSP70转录水平,说明这2份材料中也存在SPFMV和SPCSV的共同感染,表明荧光定量RT-PCR比NCM-ELISA检测结果更灵敏、准确。【结论】 筛选出可利用SPFMV CP与SPCSV HSP70转录水平进行检测的荧光定量RT-PCR检测引物,建立了SPVD荧光定量RT-PCR快速检测方法,为SPVD针对性地监测预警提供了极为有效的方法。在建立甘薯SPVD防御体系时,需综合考虑2种甘薯病毒的共侵染特性和甘薯品种差异,采取针对性的监测和预警机制。     

甘薯羽状斑驳病毒分离物的基因组3′-末端序列测定与分析

采用马铃薯Y病毒属通用引物,从甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)山东济南分离物和浙江杭州分离物基因组3′-末端扩增到一个含1814个核苷酸的序列,序列号分别为AJ310201和AJ310202.两个序列均包括NIb基因部分序列(nts 1-645)、外壳蛋白基因(nts 646-1590)和3′-UTR (nts 1594-1814),3′-末端具有典型的 poly(A)尾.外壳蛋白基因核苷酸系统进化树分析和氨基酸分析表明,以前对一些SPFMV分离物的命名有待商榷,一些相关性较强的分离物可分为3个进化主要群体,我国两个分离物属于第二群体.     

凤丹牡丹多酚提取及其抗氧化活性研究

为提高凤丹牡丹(Paeonia suffruticosa Fengdan)叶的多酚提取率,采用纤维素酶法提取叶中的多酚,以多酚提取量为考察指标,在单因素试验的基础上,选取纤维素酶用量、酶解温度、酶解时间、pH 4个因变量,进行响应面试验,建立各因变量与响应值之间的数学模型,确定最佳提取工艺条件。结果表明,曲面回归方程拟合性良好,其中纤维素酶用量和酶解温度的交互作用显著,得到多酚的最优工艺条件为纤维素酶用量150 U/mL、pH 5.0、酶解温度50℃、酶解时间105 min,在此条件下,多酚提取量达到34.66 mg/g,与模型预测值35.10 mg/g接近。凤丹叶片提取液对DPPH·清除率在提取液浓度为0.06 mg/mL时达到82.15%;对·OH清除率在提取液浓度为0.32 mg/mL时达到27.10%;铁氰化钾还原力在提取液浓度为10 mg/mL时,吸光度为3.41。     

甜草总多酚体外抗氧化活性研究

采用总抗氧化能力、OH·清除率、DPPH·清除率来考察甜草(Oldenlandia cantonensis How)总多酚的体外抗氧化活性。结果表明,甜草总多酚总抗氧化能力略小于维生素C(VC),但甜草总多酚OH·清除率远高于VC。此外,甜草总多酚对DPPH·的IC50(22.2μg/m L)与VC相近(16.0μg/m L)。甜草总多酚是天然的抗氧化活性剂和自由基清除剂。     

蛇莓总多酚体外抗氧化活性研究

为了促进蛇莓的综合利用,采用总抗氧化能力、·OH清除率和DPPH·清除率来考察蛇莓总多酚的体外抗氧化活性。结果表明:蛇莓总多酚总抗氧化能力高于VC,且蛇莓总多酚的·OH清除率远高于VC。此外,蛇莓总多酚对DPPH·的IC50(18.2μg·mL-1)与VC(IC50=17.6μg·mL-1)相近。蛇莓总多酚是天然的抗氧化活性剂和自由基清除剂。     

水葫芦叶中总黄酮的提取及其抗氧化性研究

为研究水葫芦(Eichhornia crassipes)叶中总黄酮的超声波法提取工艺,并测定其抗氧化活性,通过单因素试验和正交试验优化提取条件,对总黄酮还原能力及清除自由基能力进行测定.结果表明,水葫芦叶中总黄酮最佳提取条件为超声功率320 W、乙醇浓度70％、超声时间30 min、料液比1∶45、提取次数3次,此条件下总黄酮得率为5.71％,提取物呈现出良好的抗氧化活性.     

啤酒花茎多酚的提取优化及其抗氧化活性

为啤酒花加工废弃物的综合开发利用提供参考,以啤酒花茎为试验材料,采用超声辅助丙酮法提取多酚,通过单因素试验考察料液比、提取时间、丙酮体积分数和提取次数4个因素对啤酒花茎多酚含量的影响,并利用响应面法优化其提取工艺。结果表明:通对响应面法建立的啤酒花茎多酚提取回归方程为Y=106.5+1.64A+2.13B+2.63C+11.12D+0.51AB-2.53AC+0.19AD+4.37BC-0.87BD-0.24CD-3.85A~2-2.41B~2+1.04C~2-3.65D~2,模型决定系数R2=0.933 8,该回归模型的拟合程度良好;最佳提取工艺为提取时间20min、料液比1∶12、丙酮体积分数60%、提取4次,此条件提取啤酒花茎多酚的含量为115.89mg/g,与理论预测值116.56mg/g接近。啤酒花茎多酚对DPPH自由基的清除率为90.70%,半清除浓度(SC_(50))为22.81g/mL。采用响应面法优化的啤酒花茎多酚超声辅助提取工艺准确可靠,可用于啤酒花茎多酚的实际提取;啤酒花茎多酚具有较强的抗氧化活性,可作为天然抗氧化资源进行开发利用。     

胡椒组织培养研究

进行了海南岛3个地区的大田成龄胡椒各种外植体的组织培养试验。结果表明：只有成熟的种子才可以建立无菌培养；对在无菌环境中萌发的实生苗茎尖进行增殖培养，可获得丛生芽，再经壮苗培养和生根培养，即可得到健壮的生根植株；适合茎尖增殖、壮苗和生根培养的培养基分别为1／2MS＋1.5-2.0mg/L BA 0.1-0.2mg/L IAA,1/2MS和1／2MS＋0.5-1.0mg/L IAA；无菌实生苗的胚轴和叶片切段均可诱导形成愈伤组织，但不定芽的分化率极低，仅约1％。     

火龙果花中多酚类化合物抗氧化活性研究

对火龙果花中多酚类化合物抗氧化活性进行研究。采用抗氧化能力的体外实验方法,研究火龙果花中多酚类化合物的还原能力、清除·OH、O2-、DPPH·和ABTS·四种自由基的能力,以评价其抗氧化性,并以BHT作为阳性对照。结果表明,火龙果花中多酚类化合物抗氧化能力与浓度(0.4~0.8 mg/m L)呈量效关系。虽总体抗氧化活性较弱于BHT,但总体趋势与BHT相同,在浓度为0.7 mg/m L时,其羟自由基清除活性甚至略高于对比溶液。因此,火龙果花中多酚类化合物具有较好的抗氧化活性,可进一步研究开发为抗氧化功能性食品。     

微波提取金果榄总黄酮的工艺及其抗氧化性

为优选金果榄总黄酮的最佳提取工艺并对其黄酮的体外抗氧化活性进行评价,采用微波法对金果榄总黄酮进行提取,采用正交试验设计,考察乙醇质量浓度、微波功率、固液比、提取时间对金果榄总黄酮提取率的影响,用芦丁比较其对羟自由基、超氧阴离子的清除能力。结果表明:微波提取最佳的工艺条件为乙醇质量浓度60%、固液比为1∶20、提取时间8min、微波功率640W;抗氧化性评价表明,总黄酮对羟自由基、超氧阴离子的清除率为50%时,其浓度分别为2.766mg/mL和4.571mg/mL。最优条件下的总黄酮得率为11.384mg/g,金果榄总黄酮对羟自由基、超氧阴离子均具有不同程度的清除能力。     

胡椒脱皮方法研究进展

胡椒脱皮的方法有浸泡脱皮、机械脱皮、酶法脱皮、生物脱皮等方法。浸泡脱皮属于传统脱皮方法,机械脱皮污染严重,酶法脱皮成本高,生物脱皮是一种绿色环保的脱皮方法。相比传统脱皮法和化学脱皮法,生物脱皮具有提高胡椒质量、无污染等优点。胡椒生物脱皮技术是未来胡椒脱皮的主要发展方向。     

狗尾巴草多酚提取及抗氧化性研究

【目的】研究狗尾巴草中多酚的最佳提取条件及其抗氧化性。【方法】采用乙醇浸提法,探讨了浓度、温度、时间和料液比等提取条件对提取多酚的影响,并通过正交实验优化条件。【结果】结果表明,在最佳条件乙醇浓度为60%,提取时间为2.0h,料液比为1∶20,温度为70℃时,提取的多酚含量为2.806mg/g,实验结果还表明,从狗尾巴草中提取的多酚清除羟基自由基的作用较强。【结论】此工艺提取效果较好,多酚含量较高。     

超声波辅助提取胡椒中胡椒碱

采用单因素和正交试验优化从胡椒(Piper nigrum L.)中提取胡椒碱的工艺条件,分别考察了料液比、乙醇体积分数、提取时间和提取温度对胡椒碱提取率的影响。结果表明,胡椒碱的最佳提取工艺为料液比1∶30(g∶m L),乙醇体积分数95%,提取时间45 min,提取温度70℃。在最佳条件下,胡椒碱提取率达到6.12%。该提取工艺简单、高效,可以应用于从胡椒中提取胡椒碱。