卡特兰叶片原生质体分离条件的研究

试验以卡特兰叶片组织为材料,研究了预处理时间、酶液组合、酶解时间、酶液中甘露醇含量等不同因素对其原生质体分离的影响.结果表明,以1%的纤维素酶＋0.3%的果胶酶为混合酶液,11%的甘露醇为渗透压稳定剂,在25±1℃的条件下,pH为5.8的酶液组合中酶解8 h,获得的原生质体产量最高,可达8.9×10^6/g鲜重,存活率高达91.2%.     

矮牵牛愈伤组织诱导及原生质体的分离与纯化

研究了影响诱导矮牵牛(Petunia hybrid)形成愈伤组织和分离、纯化其原生质体效率的关键因素。结果表明,矮牵牛无菌苗叶片可在含1.0 mg/L 6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)和0.1 mg/L萘乙酸(NAA)的MS培养基上形成愈伤组织,用酶液(2%纤维素酶R-10 + 0.5%果胶酶Y-23 + 0.3%离析酶R-10,0.5 mol/L甘露醇)对继代培养10~15 d的愈伤组织在黑暗条件下静置酶解12 h,原生质体产量和活性分别达到3.4×10⁶个/g 和83%。     

青天葵叶片原生质体分离条件的优化

以青天葵Nervilia fordii(Hance)Schltr.的新鲜叶片为试材,对青天葵原生质体的制备分离技术进行研究。用不同浓度的甘露醇溶液处理青天葵叶片下表皮细胞,进行细胞质壁分离试验,确定青天葵叶片细胞的等渗浓度;采用正交设计研究酶解法制备青天葵叶片原生质体的最适合纤维素酶浓度、离析酶浓度及酶解时间。结果表明,青天葵叶片细胞的等渗浓度为11%甘露醇;采用1.0%纤维素酶R-10+0.6%离析酶R-10的混合酶液酶解青天葵叶片12 h能达到很好的分离效果,获得高质量的原生质体。     

菜豆叶片原生质体的分离条件

以菜豆幼嫩叶片为材料,研究了预处理、酶液组合、酶解时间、酶解方式、甘露醇浓度及纯化时的离心转速对菜豆叶片原生质体分离的影响。结果表明:菜豆叶片质壁分离1 h后,在2%纤维素酶+1%离析酶+10%甘露醇+0.1%BSA+5 mmol/L MES+10 mmol/L CaCl2·2H2O,pH为5.8的混合液中,(25±1)℃黑暗条件下振荡酶解12 h可获得大量有活力的绿色原生质体。纯化时400 r/min离心3 min效果较好。     

卡特兰叶片原生质体分离条件的研究

试验以卡特兰叶片组织为材料,研究了预处理时间、酶液组合、酶解时间、酶液中甘露醇含量等不同因素对其原生质体分离的影响.结果表明,以1%的纤维素酶+0.3%的果胶酶为混合酶液,11%的甘露醇为渗透压稳定剂,在25±1 ℃的条件下,pH为5.8的酶液组合中酶解8 h,获得的原生质体产量最高,可达8.9×106/g鲜重,存活率高达91.2%.     

木薯叶片原生质体分离条件研究

本试验以木薯叶片为材料,研究了质壁分离时间、酶液组合、酶解时间、酶液中甘露醇浓度等不同因素对原生质体分离的影响.结果表明:叶片在CPW9M溶液中质壁分离0.5h后,置于1％离析酶+0.5％纤维素酶+1％半纤维素酶+9％甘露醇的酶液中,黑暗条件下酶解14～16 h,其原生质体产量和活力最高.     

桑树原生质体分离条件的优化

为了获得桑树原生质体分离的最优条件,为今后桑树原生质体融合、新种质的获取等植物遗传改良提供理论基础,采用酶解法和血球板计数法,对桑树原生质体分离的影响因素进行研究。结果表明,酶、酶液组合、酶解时间和渗透压稳定剂等都对原生质体的制备有显著的影响,较适宜桑树叶片游离的组合条件是1.0%纤维素酶+0.5%果胶酶+0.2%离析酶+0.6mol/L甘露醇+CPW盐溶液,酶解温度为28℃±2℃,酶解时间为6h。在此条件下可获得高产量的原生质体。     

牡丹叶片原生质体分离条件的研究

以地方品种洛阳红牡丹叶片为材料,通过单因素和正交试验,研究了预处理时间、酶解时间、不同酶组合及酶液中甘露醇含量等因素对牡丹叶片原生质体分离的影响。结果表明:在蔗糖浓度为0.3mol/L的溶液中,预处理0.5h效果最好,(25±1)℃条件下,在0.5%纤维素酶+0.4%果胶酶+0.3%半纤维素酶+10%甘露醇、pH值5.8的混合酶液中,酶解6h所得的原生质体产量最高,有活力的细胞可达2.325×106个/g。     

红叶石楠叶片原生质体分离条件的研究

以红叶石楠(Photinia×frasery)叶片为试验材料,研究了预处理时间、酶类组合、酶解时间、酶液中甘露醇含量及酶解温度等不同因素对其原生质体分离的影响。结果表明,以1.0%的纤维素酶+0.3%的果胶酶为混合酶液,11%的甘露醇为渗透压稳定剂,在25℃±1℃的条件下,酶解8h,获得的原生质体产量最高,可达14.7×106个/g(FW),原生质体活力可达84.5%。     

蕙兰原生质体分离条件的研究

用蕙兰无菌苗的幼叶和幼原球茎以及花蕾时的花瓣和花粉块为材料，研究了纤维素酶（商品名ＯｎｏｚｕｋａＲ－１０）浓度、渗透压稳定剂甘露醇浓度和酶解时间等因素对蕙兰原生质体分离的影响，结果表明：①花粉块和花瓣的分离条件为１．５％纤维素酶、０．３％果胶酶、１１％甘露醇、酶解时间６．５ｈ时，其原生质体最高得率分别为４．５６×１０６和２．１２×１０６个／ｇＦＷ。②幼叶的分离条件为１．０％纤维素酶、０．３％果胶酶、１３％甘露醇、酶解时间２０ｈ时，其原生质体最高得率为３．３６×１０６个／ｇＦＷ。③幼原球茎的分离条件为１．０％纤维素酶、０．３％果胶酶、１１％甘露醇、酶解时间１６ｈ时，其原生质体最高得率为１．８７×１０５个／ｇＦＷ。此外，花粉块与叶片的原生质体溶液中杂质很少，有利于提纯；花瓣原生质体溶液中碎屑较多，且有少量的针晶；原球茎原生质体溶液中的淀粉粒与针晶很多，非常不易提纯。因此，花粉块与叶片为蕙兰原生质体分离的较好材料     

柚类、橘类叶肉原生质体分离方法研究

原生质体是植物遗传改良的重要实验体系之一,而原生质体的分离是该体系的基础。对柑橘叶肉原生质体来说,柠檬、橙类等品种的叶肉原生质体比较容易分离,而柚类、橘类等柑橘品种则相对困难。本研究采用椪柑、黄岩本地早、沙田柚、冰糖橘4个品种为试材,枳壳试管苗为对照,系统研究了不同基因型、不同叶龄、不同酶种类、不同酶液组合对叶肉原生质体分离的影响,探讨了影响柚类、橘类等柑橘叶肉原生质体分离的因素,从中找出了各品种较适宜的分离条件。在适宜条件下,4种供试品种的原生质体得率(FW)可达10×106~20×106g-1。     

矮牵牛的快速繁殖

矮牵牛带芽嫩茎、嫩叶作为外植体,经培养都能再生完整植株。诱导分化阶段,带芽嫩茎以腋芽发育为主,也有不定芽发育,最适培养基MS＋6-BA0．5mg／L＋NAA0．1mg／L或MS＋6-BA1．0mg／L＋NAA0．5mg／L;叶片以不定芽发育为主,在MS＋6-BA0．5mg／L＋NAA0．5mg／L及MS＋6-BA1．0mg／L＋NAA0．1mg／L培养基上,丛生芽分化效果最好。继代增殖阶段,切割新梢接种于MS培养基或切割丛生芽接种于MS＋6-BA0．5mg／L培养基,均可获得6～10倍的增殖。生根培养阶段,1／2MS＋IBA0．01—0．05mg／L培养基的生根效果好,移栽成活率可达95．6％。     

矮牵牛愈伤组织耐盐性研究

[目的]了解矮牵牛愈伤组织的耐盐能力。[方法]将矮牵牛嫩叶接种到8种不同盐浓度的MS培养基中培养,观察愈伤组织生长分化情况。[结果]当培养基盐度为0.4%时,矮牵牛愈伤组织诱导率与对照无差异;当培养基盐度为0.8%以下时,提高盐度能促进矮牵牛愈伤组织的芽分化率;当培养基盐度大于0.8%时,矮牵牛愈伤组织的生长分化受到抑制;当培养基盐度达到2.8%时,矮牵牛外植体全部死亡。[结论]矮牵牛愈伤组织可适应0.8%以下的盐度。     

农杆菌介导的矮牵牛遗传转化美洲商陆抗病毒蛋白基因的研究

为获取矮牵牛抗病毒株系,利用农杆菌介导的叶盘法,对3个品种的矮牵牛进行了PAP(美洲商陆抗病毒蛋白)基因遗传转化试验。结果表明,矮牵牛基因型对抗性芽的再生有显著影响,只有红色波浪系矮牵牛在含100 mg/L的卡那霉素筛选培养基上获得抗性芽,进一步转入含卡那霉素100 mg/L的生根培养基上进行筛选,获得31个株系的生根植株。对再生植株进行PCR检测,初步证明PAP基因已整合到其中29个株系的矮牵牛基因组中。     

矮牵牛花色遗传研究进展

经过对植物花色在生物化学和遗传学2个方面近1个世纪的研究以及遗传学的不断发展,证实矮牵牛也许可以为花色分析提供最好的遗传体系,连同基因工程学的应用,可以对许多影响花色改变的基因进行分离和分子特性分析。该研究主要讨论了影响矮牵牛花色的因素、矮牵牛花色的遗传调控、矮牵牛花色的改良方法以及应用前景。     

矮牵牛茎尖诱导分化研究

[目的]推动矮牵牛组培的产业化,达到使其苗木生产快速、经济的目的。[方法]共配制5种MS培养基,选择无污染、生长健壮的矮牵牛茎尖作为外植体,进行诱导分化单因素试验,研究不同浓度的NAA对矮牵牛外植体诱导成活率的影响,进而选择适合矮牵牛诱导成活的最佳培养基。[结果]培养基中NAA浓度的差异对外植体成活率的影响较大。NAA浓度为0.5mg/L的培养基为最佳诱导成活培养基,NAA浓度为0.7及0.3mg/L的培养基对矮牵牛的作用仅次于NAA浓度为0.5mg/L的培养基,但NAA浓度为0.1及0.9mg/L的培养基处理效果不是十分理想。筛选出矮牵牛组培最佳诱导分化培养基为MS＋NAA0.5mg/L＋6-BA0.3mg/L＋琼脂8g/L＋蔗糖30g/L。[结论]研究结果可为矮牵牛的组织培养提供参考。