1株酸性α-淀粉酶产生菌的鉴定及发酵条件优化

[目的]研究酸性α-淀粉酶高产菌株B-5的发酵特性并对B-5菌株进行细菌鉴定,为进一步挖掘该菌株的应用价值奠定基础。[方法]以B-5菌株为研究对象,通过菌体形态、菌落特征、生理生化特性以及16Sr DNA同源性分析对其进行菌种鉴定。以单因素法和正交试验法对培养基进行优化,确定B-5菌株的最适发酵条件。[结果]通过传统细菌鉴定方法和分子生物学方法将B-5菌株初步鉴定为芽孢杆菌（Bacillus sp.）。以可溶性淀粉、玉米粉、小麦粉作为碳源时,都有利于B-5菌株产酶,从工业化生产降低成本的角度考虑,选用玉米粉作为发酵产酶的碳源。而以胰蛋白胨作为氮源时产酶活力最高,故选用胰蛋白胨作为发酵产酶的氮源。正交试验结果表明,2%玉米粉和2%胰蛋白胨的培养基组成最有利于发酵产酶,酶活为74.6U/ml。B-5菌株在60h时,发酵液中酶活力达到最高,随着时间的延长,酶活力逐渐降低。[结论]B-5菌株虽然产酶活力还有限,尚不能满足工业化生产的需要,但该菌株的酸性α-淀粉酶性质优异,通过对其菌种的鉴定则可以方便地获取该酸性α-淀粉酶的基因以尝试酸性α-淀粉酶的工程菌生产。     

一株蛋白酶产生菌分离及鉴定

蛋白酶在饲料加工行业中有广泛应用。为了获得高产蛋白酶菌株,本实验采用透明圈法进行初筛,通过Folin-酚法进行复筛,从土壤中获得了一株产蛋白酶能力较高的菌株S-3。通过生理生化反应和16S rDNA基因分析,鉴定其为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）。本实验为贝莱斯芽孢杆菌应用于蛋白酶生产提供了理论依据。     

S－3307浸种对水稻种子萌发特性的影响与α－淀粉酶活性关系的研究

低浓度（０～１００ｍｇ／ｋｇ）的Ｓ－３３０７在２５℃下浸种３６ｈ对水稻种子的发芽率、发芽势基本无影响，对种子的发芽指数和活力指数具有一定的抑制作用，但对幼苗的根芽比及根尖脱氢酶活性具有一定的促进作用。高浓度（大于２００ｍｇ／ｋｇ）Ｓ－３３０７浸种可能对芽产生药害，致使生长畸形，甚至降低发芽率。Ｓ－３３０７浸种对水稻种子萌发特性的影响与抑制胚乳α－淀粉酶活性有关。外施ＧＡ＿３可完全消除Ｓ－３３０７对种子发芽指数、活力指数的抑制作用。     

粉锈宁对萌发小麦α一淀粉酶活性影响机制初探

通过对用粉锈宁处理的萌发小麦α-淀粉酶活性测定，确定了粉锈宁在抑制丝状菌麦角甾醇生物合成的同时，也抑制了控制α-淀粉酶合成的赤霉素的合成。外加赤霉素可减轻粉锈宁对α-淀粉酶活性的抑制作用。     

耐甲醇脂肪酶产生菌的筛选鉴定及其酶学性质研究

[目的]筛选耐甲醇脂肪酶产生菌,并对其酶学性质进行研究。[方法]采用培养基中添加不同浓度甲醇（0、5%、10%、15%、20%）的方法筛选甲醇耐受性脂肪酶产生菌,形态学和ITS序列分析确定菌株的种属关系,硫酸铵分级沉淀和DEAE-Sepharose FF纯化脂肪酶,并对纯化的酶进行耐甲醇试验和酶学性质研究。[结果]筛选到183株脂肪酶产生菌,菌株SXL-107对浓度20%甲醇具有较好耐受性,脂肪酶活力达104 U/ml;ITS同源性分析确定该菌为Galactomyces geotrichum;经过纯化的SXL-107脂肪酶在浓度10%甲醇溶液中作用48 h后,剩余酶活为96.15%;该酶最适温度为40℃,pH为7.0,50℃温浴60 min仍有80%的酶活力,在pH 4.0~9.0间稳定,微量的Mg2＋、K＋和Zn2＋对该酶有激活作用,Mn2＋和CO2＋有抑制作用,分子量约为66 kDa。[结论]筛选到一株耐甲醇能力较强的脂肪酶产生菌,为该酶在生物柴油中的应用奠定基础。     

α- 淀粉酶产生菌的分离筛选及酶学性质研究

[目的]获得在某些方面性能优良（如耐高温、耐强酸、耐强碱等）的α-淀粉酶产生菌。[方法]对α-淀粉酶产生菌进行分离筛选,并对其酶学性质进行了研究。[结果]从稀释样品涂布的淀粉筛选平板上筛选出10株有明显淀粉水解圈的单个菌株,又从中得到3株α-淀粉酶酶活力较高的菌株：X6、X8和X10。这3株菌的最适pH值均在中性范围内,最适温度均为60℃。Ca2＋能提高酶的热稳定性,X6和X8在Ca2＋浓度为0.02～0.04 mol/L时,酶的热稳定性最高;X10在Ca2＋浓度为0.03～0.04 mol/L时,酶的热稳定性最高;当Ca2＋浓度继续增大时,酶的热稳定性反而降低。[结论]为满足不同行业对不同特征α-淀粉酶的需求提供了理论依据。     

乳链菌肽产生菌的筛选及其鉴定

乳链菌肽产生菌中乳链菌肽编码基因、乳链菌肽抗性基因和蔗糖发酵基因紧密连锁.根据该原理,在添加乳链菌肽、蔗糖及溴甲酚紫的M17选择培养基上,从新鲜牛奶样品中定向筛选到6株能在选择培养基上生长的菌株,通过细菌生理生化指标鉴定、16S rDNA序列测定,以及发酵产物的抑菌试验,获得了两株产乳链菌肽的乳酸乳球菌和两株只对乳链菌肽具有抗性但不产生乳链菌肽的乳酸乳球菌.     

一株纤维素酶产生菌B.cereus JYMB2菌株的筛选鉴定

为寻找纤维素酶高产菌株,用于农作物秸秆、园林枯枝落叶及城市生活垃圾等的降解利用,本研究以羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为唯一碳源,从重庆市缙云山林地腐殖质中分离纤维素降解菌,结合羧甲基纤维素钠水解圈法和胞外酶活测定法(DNS法)筛选获得1株纤维素酶高产菌株JYMB2.该菌株24h发酵上清液经DNS法检测纤维素酶活达到峰值,其CMC酶活为159.25U/mL,滤纸酶活(FPase)为152.13U/mL.菌种鉴定结果表明JYMB2菌株为革兰氏阳性芽孢杆菌,多个菌体串联成链状;过氧化氢酶、硝酸盐还原及V-P试验呈现阳性;能水解淀粉、液化明胶.基于16SrDNA序列的系统发育分析结果表明JYMB2菌株与登录号为KF010349的蜡状芽孢杆菌处于同一最小分枝,且与多株芽孢杆菌属菌株相似度达到98%以上.综合菌体及菌落形态特征、生理生化实验结果以及基于16SrDNA的系统发育分析,将JYMB2菌株鉴定为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus),命名为B.cereus JYMB2.     

粉锈宁萌发小麦α—淀粉酶活性影响机制初探

通过对用粉锈宁处理的萌发小麦α-淀粉酶活性测定，确定了粉锈宁在抑制丝状菌麦角甾醇生物合成的同时，也抑制了控制α-淀粉酶合成的赤霉素的合成，加赤霉素可减轻粉锈宁对α－淀粉酶活性的抑制作用。     

一株碱性高温α-淀粉酶产生菌的分离鉴定及其酶学性质初步研究

[目的]从乌鲁木齐地区啤酒厂、面粉厂、酱醋厂等地采集的酒渣、麸皮和酱渣中筛选淀粉酶产生菌.[方法]筛选采用可溶性淀粉培养基和K-KI染色;酶活测定采用硝基水杨酸法;菌株鉴定使用法国梅里埃细菌自动鉴定仪.[结果]得到9株酶活较高的淀粉酶产生菌,其中1株编号为A-1的菌株酶活最高达28.17 U/mL,生理生化反应鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus.subtilis );并对其酶学性质研究表明,该淀粉酶的最适温度为90℃,最适pH为8.0,最适碳源为玉米粉,最适氮源为黄豆粉.[结论]该菌株为碱性高温淀粉酶产生菌.     

一株脂肪酶产生菌的筛选鉴定及其酶学性质研究

分离筛选脂肪酶高产菌株,为生物降解富含油脂的工业及生活污水提供菌种资源.从校园食堂附近土壤中分离微生物,结合中性红油脂平板筛选法与三丁酸甘油酯平板透明圈法筛选脂肪酶高产菌株.根据菌株形态特征、生理生化特性以及分子生物学特征鉴定高产菌株,进而利用酸碱滴定法定量测定脂肪酶酶活,探究该菌株产生脂肪酶的最适酶促反应温度、pH值等酶学性质.研究结果表明,筛选获得的脂肪酶产生菌SLB-1为革兰氏阳性芽孢杆菌;硝酸盐还原呈阳性,能够水解淀粉和液化明胶;基于16SrDNA的系统发育分析结果表明SLB-1菌株与登录号为NR116240甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)处于同一最小分支,故将SLB-1菌株鉴定为甲基营养型芽孢杆菌,命名为B.methylotrophicus SLB-1,该菌株产脂肪酶的最适培养时间是24h,酶促反应的最适温度为30℃,最适pH值为7.0.本研究分离鉴定了脂肪酶产生菌Bacillus methylotrophicus SLB-1,且由该菌所产生的脂肪酶为中性常温酶.     

α-淀粉酶产生菌分离筛选及酶学性质研究（摘要）

[目的]为了获得在某些方面性能优良（如耐高温、耐强酸、耐强碱等）的α-淀粉酶产生菌。[方法]对α-淀粉酶生菌进行分离筛选,并对其酶学性质进行了研究。[结果]从稀释样品涂布的淀粉筛选平板上筛选出10株有明显淀粉水解圈的单个菌株,从中又测定得到3株α-淀粉酶酶活力较高的菌株即为：X6、X8和X10。这3株菌的最适pH值都在中性范围内,最适温度均为60℃。Ca^2＋能提高酶的热稳定性,X6、X8在Ca^2＋浓度为0.02～0.04mol/L时,酶的热稳定性最高,X10在Ca^2＋浓度为0.03～0.04mol/L时,酶的热稳定性最高;当Ca^2＋浓度继续增大时,酶的热稳定性反而降低。[结论]该研究为满足不同行业对不同特征的α-淀粉酶的需求提供了理论依据。     

春小麦α-淀粉酶活性及其与穗发芽抗性的关系

用改进的凝胶扩散法对国内外57个春小麦品种(系)在灌浆后35 d进行了穗发芽抗性和α-淀粉酶活性的测定.结果表明:不同春小麦品种的穗发芽抗性及α-淀粉酶活性存在显著差异.来自黑龙江省的大部分主栽品种的穗发芽抗性中等,红粒品种的穗发芽抗性比普通白粒品种强,在白粒品种中也存在抗性极强的品种.穗发芽率与种子中α-淀粉酶活性存在显著正相关,α-淀粉酶活性可作为鉴定穗发芽抗性的生化指标.     

纤维素酶产生菌的鉴定与筛选

用马铃薯葡萄琼脂（ＰＤＡ）板和察氏培养基（ＣＣＭ）,从自然界和饲料中分离出６种８株霉菌,分别是产黄青霉１株（９９０８）,米根霉１株（９９１７）,米曲霉１株（９９３５）,高大毛霉１株（９９３９）,黑曲霉２株（９９３０,９９３４）,绿色木霉２株（９９１６、９９４２）。其中产Ｃｘ酶高的菌株是９９３０、９９３４,产Ｃ１高的菌株是９９３０、９９３４、９９４２。     

PHA产生菌的筛选与鉴定

从15个污泥样品中分离筛选出5株PHA产生菌,其中A-0603-11为产PHA最好菌株,经苏丹黑染色镜检发现有2~3个PHA颗粒,黑色部分的体积占菌体50%以上。生理生化试验表明,该菌为革兰氏阴性杆状,单鞭毛运动,好氧,氧化酶阳性,接触酶阳性,不发酵D-葡萄糖和其它糖类。经分子生物学鉴定,该菌为Delftia sp.,属于Comamonadaceae丛毛单胞菌科。     

Nisin产生菌的筛选及鉴定

从新鲜牛奶样品中用M17G筛选培养基定向筛选出20株目的菌株.应用琼脂扩散法,以黄色微球菌(Micrococcus flavus)NCBI8166为指示菌对其发酵产物进行效价测定,经反复筛选,获得1株稳定的高产菌株KY08,产Nisin效价为813IU·mL-1.用细菌鉴定系统Vitek-32进行生化特征鉴定,并参照了<伯杰氏细菌学鉴定手册>(第八版),将KY08菌株初步鉴定为乳酸链球菌种的一个亚种.     

降解生淀粉真菌的筛选、鉴定及其产生淀粉酶的性质研究

以生木薯粉为唯一碳源,对收集的土壤样品悬浮液进行培养、I2/KI溶液染色,经摇瓶复筛和菌株发酵上清液RSDE活力测定,筛选出10株RSDE活力较高的真菌;对RSDE活力最高的真菌菌株1-31进行形态学观察和ITS（Internaltranscribed spacer）序列分析,将其鉴定为青霉属。对青霉1-31的酶学性质进行测定,结果发现其RSDE对生木薯淀粉的最适作用pH和温度分别为5.0和55℃;分别以玉米和大米为底物时,其RSDE的生淀粉分解活力比（RDA）较高,为59.0%和58.8%;青霉1-31 RSDE对生木薯粉的吸附率约为37.0%。HPLC检测发现,以该菌株RSDE水解生木薯粉4 h,仅释放出葡萄糖,说明青霉1-31产生的RSDE主要为生淀粉糖化酶。电镜观察结果发现,经青霉1-31 RSDE处理,可使生木薯粉颗粒光滑完整的表面变得粗糙,形成无数小坑,说明青霉1-31 RSDE对生淀粉具有较强的水解作用。因此,青霉1-31 RSDE在各种生淀粉如木薯、玉米、大米和马铃薯生淀粉等加工业中具有一定的应用潜力。     

高产β—葡聚糖酶菌种分离方法的改进及其新菌种鉴定

根据刚果红与β－１，３－１，４－葡降糖紧密结合的特性，采用改进的方法筛选β－葡聚糖酶产生菌。凡菌落周围刚果红裉然的透明圈大，其酶酶活性亦高，从１２个土壤样品分离的上百个菌株中筛选，获得一株高产β－葡聚糖酶活性的菌株Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｉｌｉｓ ９１２６，它在刚果红平皿上生长菌落周围的透明圈很大，其产酶活力高达５７Ｕ／ｍｌ。     

一株纤维素酶产生菌及其对秸秆纤维素的降解作用

应用双层平板法，从腐败秸秆上分离筛选到产生高活性纤维素酶的野生菌株，经鉴定属于绿色木霉。通过在最适培养基和最适培养条件下产生的酶曲产品，对秸秆类天然纤维素有较强的降解作用。     

一株核酸酶产生菌的筛选及初步鉴定

以0.5%RNA为筛选培养基的惟一碳源和惟一氮源,对目标微生物施以环境选择压力,从浏阳河地区土壤中筛选一株核酸酶活力较高产生菌株LM-7。经初步鉴定,该菌株为青霉属、二轮不对称青霉类、桔青霉系。结果表明:菌株LM-7在培养温度30℃、摇床转速180 r/min的条件下,以改良的察氏培养基液体发酵2.5 d,发酵液的核酸酶P1活力达283 U/ml。