蟹源副溶血弧菌胞外蛋白酶的纯化与特性分析

采用硫酸铵盐析、Sephadex G-100凝胶层析和DEAE—Cellulose离子交换柱层析等方法,从中华绒螯蟹Eriocheir sinensis弧菌病病原菌——副溶血弧菌Vibrio parahemolyticus的胞外产物中分离纯化出两种具有致病作用的胞外蛋白酶。相对分子质量为39600的蛋白酶是一种金属蛋白酶,EDTA可抑制其活性,金属离子Cu^2＋、Mg^2＋、Fe^2＋对该酶有抑制作用,而Ca^2＋对其则有一定程度的激活作用;该酶在50—60℃下热稳定性最好,最适pH为9。而相对分子质量为20000的蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶,EDTA对其酶活力几乎没有影响,但苯甲基磺酰氟（PMSF）可抑制其酶活性;该酶的最适温度为50℃,最适pH为8。     

家蚕肠液蛋白酶消化生理参数的研究

家蚕肠液蛋白酶对家蚕消化吸收蛋白质及其生长发育有着十分重要的作用。为探明影响家蚕肠道蛋白酶活力的因素,从家蚕肠道内容物中分离出蛋白酶酶液,在不同温度、pH及金属离子处理条件下,用福林-酚法测定酶活力变化情况,确定家蚕肠液蛋白酶的最适作用条件,同时研究了家蚕中肠蛋白酶活力随龄期增长的变化规律。结果表明,在35℃、pH10.0左右条件下蛋白酶活力最大,低浓度Mn2+、Fe2+、Cu2+对酶活有抑制作用,高浓度Ca2+对酶有抑制作用,Mg2+浓度对酶活物影响不明显,家蚕中肠蛋白酶活力随龄期增长而增强。     

黄曲霉和黑曲霉发酵麻疯树废弃饼粕产蛋白酶的酶学性质初探

通过对黄曲霉和黑曲霉发酵麻疯树废弃饼粕所产蛋白酶的酶学性质进行初步研究,确定黄曲霉所产蛋白酶最适催化温度为45℃;最适pH值为6．0;Vmax=3333．33μg·min^-1,Km=31．25mg·mL^-1;Fe^3＋能对其活力产生强烈的抑制作用;适量有机溶剂对蛋白酶活力有一定促进作用。黑曲霉所产蛋白酶最适催化温度为50％;最适pH值为4．0;Vmax=18．05μg·min^-1,Km=2．23mg·mL^-1;有机溶剂对蛋白酶活力有一定促进作用;Na^＋和Hg^2＋对蛋白酶活力则有十分强烈的抑制作用。     

豇豆CAT活性的研究

[目的]对豇豆过氧化氢酶（CAT）的活性进行研究。[方法]以豇豆中的过氧化氢酶为材料,测定其活力、最适温度与pH值,及各因素对活力的影响。[结果]豇豆中过氧化氢酶的最适pH值为8.0,最适温度为25℃。甲醇和乙醇对豇豆中过氧化氢酶活性的影响均表现为低浓度具有激活作用,高浓度转为抑制作用。金属离子Cu2＋对该酶有不用程度的激活作用,而Mg2＋和Na＋则对该酶有一定程度的抑制作用。[结论]该研究为豇豆过氧化氢酶的进一步研究提供了理论依据。     

pH值对黑鲷胃肠道及肝胰脏主要消化酶活力的影响

 试验研究了pH值对黑鲷胃、肠及肝胰脏中蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶等3种主要消化酶活力的影响。结果表明:在黑鲷正常的消化道酸碱条件下（胃pH值2.5,肠pH值7.5）,蛋白酶活力大小顺序为:胃>肠>肝胰脏;淀粉酶活力大小顺序为:肝胰脏>肠>胃;脂肪酶大小顺序为:肠>肝胰脏>胃。胃蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶的最适pH值分别为2.0,5.0和4.0,均在酸性范围;肠蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶的最适pH值分别是7.0,7.0,7.5,肝胰脏蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶的最适pH值分别是7.5,7.0,7.0,均为中性或略偏碱性。     

斑点叉尾鮰鱼肠蛋白酶的分离纯化及其酶学性质

以斑点叉尾鮰Ictalurus punctatus鱼肠道为原料提取蛋白酶,对分离条件进行了优化,并对部分酶学性质进行了研究。结果表明：鱼肠内的蛋白酶在硫酸铵饱和度为70%时,所得沉淀中酶活力最高。经过阴离子交换层析分离后,蛋白酶的纯化倍数达到了218倍。该蛋白酶的最适温度为55℃,最适pH为7.5,具有良好的低温稳定性和酸碱稳定性,米氏常数为5.4 g/L。K^＋和Ca^2＋离子对该蛋白酶活性有较弱的激活作用,Mg^2＋则能显著激活蛋白酶活性;Na＋和Zn2＋对蛋白酶的活性有较弱抑制作用,而Cu^2＋和EDTA能显著抑制蛋白酶活性。     

纳豆芽孢杆菌配伍发酵产中性蛋白酶的性质研究

为研究纳豆芽孢杆菌SH和B1配伍发酵产物中中性蛋白酶的性质,通过Folin-酚法测定中性蛋白酶的最适作用温度、最适作用pH值、pH稳定性、热稳定性和金属离子、表面活性剂、抑制剂、模拟胃肠道环境对酶活力的影响,绘制相对酶活力变化图。结果表明:该酶的最适作用温度为70℃,最适作用pH为11.0,其次是pH为7.0,40℃时热稳定性较好,在pH6～7时比较稳定,属中性蛋白酶。金属离子、抑制剂和模拟胃环境对酶有抑制作用,而10g/LTween-80和模拟肠道环境对酶有激活作用。     

藤茶中二氢杨梅素和杨梅素对体外胃蛋白酶模型建立及活性评价

为了解藤茶中二氢杨梅素、杨梅素对胃蛋白酶活性的影响，通过探索对体外胃蛋白酶模型建立的影响因素确定建立条件，选用胃蛋白酶—血红蛋白为反应体系，在一定条件下分析胃蛋白酶作用时间、胃环境模拟成分（NaCl溶液、盐酸溶液）、终止剂三氯乙酸、血红蛋白、胃蛋白酶活性的影响因素以及二氢杨梅素和杨梅素对胃蛋白酶活性的影响。结果表明，胃蛋白酶作用时间为10 min、胃环境模拟成分（0.1 mol/L NaCl溶液和0.065 mol/L盐酸溶液）、5 m L血红蛋白溶液（1%）、1 mL胃蛋白酶（0.10 mg/mL）。另外，以不同浓度的二氢杨梅素、杨梅素为实验组，以酶活性变化指标为考察组，考察二氢杨梅素和杨梅素对胃蛋白酶活性的影响。结果为当二氢杨梅素用量为0.05mg时，对0.1 mg胃蛋白酶有最大抑制作用，空白组酶活力（u）为10 632.322 9，实验组酶活力（u）为695.680 9，抑制率为93.46%；当杨梅素用量为0.15 mg时，对0.1 mg蛋白酶有最大抑制作用，空白组酶活力（u）为10 632.322 9，实验组酶活力（u）为2 260.962 9，抑制率为78.74%。由此可知，...     

温度和pH对澳洲宝石鱼消化酶活性的影响

通过改变酶反应温度和pH,分析了澳洲宝石鱼Scortum barcoo淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶活性的变化。结果表明,澳洲宝石鱼肝胰脏、肠道、胃淀粉酶的最适pH均为6.2;肝胰脏、肠道蛋白酶的最适pH分别为7.5、7.0~7.5,胃蛋白酶的最适pH为2.0。说明淀粉酶在中性偏酸性时活性最高,肝胰脏、肠道蛋白酶在中性偏碱性时活性最高,而胃蛋白酶在强酸性时活性最高。肝胰脏、肠道、胃的淀粉酶的最适温度均为30℃,脂肪酶的最适温度分别为40、35、35℃,蛋白酶的最适温度分别为50、50、40℃。在一定温度和pH范围内,3种消化酶的活力均呈先上升后下降的趋势,并在各自最适的温度下,3种消化酶比活力的大小均为肠道>胃>肝胰脏。     

暗纹东方鲀胃蛋白酶的分离纯化及部分性质研究

为了探明 pH 值、温度及矿物质离子对暗纹东方鲀胃蛋白酶活性的影响效果,用暗纹东方鲀的胃为材料,经柠檬酸缓冲液抽提,硫酸铵分级沉淀,CM-纤维素离子交换柱、Sephedex G75 层析柱纯化,获得比活为 7.13μmol/(min·mg)的胃蛋白酶.酶经聚丙烯酰胺电泳,表现为单一蛋白带,经 SDS-PAGE 测得酶的亚基相对分子质量为18 600.酶水解酪蛋白的最适温度为50 ℃,在pH2.5, ℃下酶催化酪蛋白水解的Km值为0.715 mmol/L;pH5.0, 3737 ℃下酶催化 N-卞氧羰酰 L-赖氨酸对-硝基酚酯(CBZ-Lys.pNP)的 Km 值为 0.112 mmol/L.几种矿物质离子对酶活力的影响表明,Ca2+,Mn2+,Mg2+对酶有激活作用,Zn2+,Fe2+对酶有抑制作用.     

胃蛋白酶水解松仁蛋白的研究

[目的]优化得到胃蛋白酶水解松仁蛋白的酶解工艺,并检验水解蛋白清除自由基的效果。[方法]选用胃蛋白酶水解松仁蛋白,并进行酶解工艺优化,同时检测了松仁蛋白胃蛋白酶水解物的还原能力和清除羟基自由基的效果。以可溶性蛋白质量浓度为响应值,进行了单因素及正交试验。[结果]确定了胃蛋白酶水解松仁蛋白的最佳水解条件:酶添加量7.5 U/g干蛋白质、水解温度50℃、水解时间3.75 h、pH 2.0,各因素对结果的影响程度大小依次为pH、水解时间、酶添加量、温度。抗氧化试验表明,松仁蛋白胃蛋白酶酶解物具有清除羟基自由基的能力和还原能力。[结论]研究可为松仁的精深开发利用提供参考依据。     

植物酯酶反应活性影响条件研究

研究酶液用量、pH值、温度、乙酸-1-萘酯用量等条件对酶促反应影响以及几种金属离子对酶促反应活性的影响,并建立酶抑制方程。结果表明:酶液用量0.25 mL、乙酸-1-萘酯0.6 mL、pH值6.5、温度38℃为酶促反应的最佳条件。Cu2+、Mn2+、Ca2+、Fe2+、Co2+等离子在一定浓度范围内对酶促反应活性具有激活作用,且Cu2+浓度为0.06 mol/L时激活作用最为明显,能提高60.37%。Co2+浓度为0.04 mol/L时次之,能提高51.75%。     

毛栓菌木聚糖酶理化性质及动力学研究

从威海市玛珈山上获得毛栓菌（Trametes trogii）,在对其产酶条件研究的基础上,主要研究pH、温度、无机离子对毛栓菌木聚糖酶活性和稳定性的影响,以及该酶底物浓度效应和Km值测定。结果表明：在pH 6.81左右酶活性最高,pH在5.60-9.18范围内体现较强的稳定性.最适酶解温度为40℃,酶液在50℃以下有较好的热稳定性,Na^＋、Mn^2＋对木聚糖酶有激活作用,而Cu^2＋、Fe^3＋、Ca^2＋则抑制木聚糖酶活性,表观Km值为1.25×10^-2g·L^-1。     

菠萝蛋白酶降解壳聚糖条件的研究

[目的]为菠萝蛋白酶降解壳聚糖制备壳寡糖提供工艺参数和科学依据。[方法]用DNS比色法测定还原糖的含量,探讨不同条件对菠萝蛋白酶降解壳聚糖的影响。用端基分析法测定壳寡糖的分子量,研究菠萝蛋白酶降解壳聚糖过程中壳聚糖分子量的变化。[结果]菠萝蛋白酶降解壳聚糖的最适pH为7.1,最适温度为53℃,最适酶浓度为0.30 g/L。在最适条件下,降解反应进行6 h以上,可以得到平均聚合度为8,平均分子量为1 306的壳寡糖。[结论]菠萝蛋白酶能有效降解壳聚糖,制备壳寡糖。     

影响金针菇多酚氧化酶活性因素研究

目的从金针菇中提取多酚氧化酶,并对其特性进行研究．方法采用分光光度法研究温度、pH、抑制剂对金针菇多酚氧化酶活力的影响．结果以邻苯二酚为底物,金针菇多酚氧化酶（Polyphenoloxidase from Flammulina velutipes,FVPPO）的酶促褐变产物在可见光波长295nm处有最大吸收峰;在pH为5．0—6．0范围内酶活力较大;在20—40℃的范围内随着温度升高,酶活性逐渐增强;在40℃时PPO活性最强;抗坏血酸、柠檬酸、EDTA-2Na对金针菇多酚氧化酶的活性都有抑制作用,在同浓度下,对金针菇PPO活性的抑制效果次序为抗坏血酸〉柠檬酸〉EDTA-2Na．结论金针菇多酚氧化酶的最适pH为6．0,最适温度为40℃,抗坏血酸对金针菇PPO活性的抑制作用最强．     

蒲菜多酚氧化酶的酶学性质研究

[目的]研究蒲菜多酚氧化酶（PPO）的酶学性质。[方法]研究蒲菜PPO的吸收光谱和动力学性质,并对温度、pH、底物浓度、抑制剂等因素对蒲菜PPO活性的影响进行探索。[结果]蒲菜PPO催化邻苯二酚的产物在415 nm处有最大吸收峰,动力学方程为：V=0.982[S]/（4.97＋[S]）,其中,V为反应速度;[S]为底物浓度。蒲菜PPO最适温度为30℃,在95℃、2 min条件下可以有效地抑制蒲菜PPO活性;蒲菜PPO最适pH为6.8,当pH（5.4或pH（7.2时可以有效降低蒲菜PPO活性;柠檬酸、亚硫酸钠、抗坏血酸、EDTA-2Na等抑制剂对PPO均有抑制作用。[结论]蒲菜PPO的酶学性质研究结果可为蒲菜的研究开发提供依据。     

鳕鱼皮胶原蛋白酶解液的制备及抗氧化研究

[目的]利用酶解法从鳕鱼皮中提取胶原蛋白肽,研究其抗氧化能力。[方法]以鳕鱼鱼皮为原料,采用胃蛋白酶进行酶解,通过正交试验研究pH、水解温度、加酶量及水解时间4个因素对酶解鳕鱼皮的影响,确定胃蛋白酶酶解鳕鱼皮的最佳条件,并采用试剂盒法对酶解产物进行抗氧化活性研究。[结果]各因素对酶解鳕鱼皮的影响为水解时间〉水解温度〉加酶量〉pH,胃蛋白酶酶解鳕鱼皮的最佳工艺条件为：加酶量4%、温度37℃、pH 3、时间3 h。此条件下,蛋白质水解度可达到6.91%。胃蛋白酶酶解鳕鱼皮得到的胶原肽粗品具有一定的抗氧化能力,并对超氧阴离子自由基具有较强的清除作用。[结论]该研究为开发新的抗氧化剂提供科学参考。     

高产蛋白酶P5菌株的纯化及酶学性质

对高产蛋白酶细菌P5菌株发酵产生的蛋白酶进行初步分离纯化并研究其酶学性质。结果表明,硫酸铵饱和度为70%时,酶活性达到最高(310.44U/mL);该酶最适反应温度为40℃,在35～40℃保温5h,酶活性基本没变化;酶反应最适pH值为7.0,酶活性在pH值6.0～7.5时比较稳定。K+、Ca2+、Mg2+、Fe3+对酶活性有促进作用,Na+对酶活性基本没有影响,Hg2+和Mn2+对酶活性有抑制作用,其他金属离子对酶活性的影响随离子浓度的不同而不同。     

固定化啤酒酵母废菌体吸附Ni^2＋的研究

为了开发新型生物吸附剂,研究了啤酒酵母废菌体制备的生物吸附剂对水中重金属Ni^2＋的吸附作用;为了增强啤酒酵母废菌体吸附Ni^2＋的能力,对其进行了固定化,研究包括了pH值、吸附时间、吸附温度、酵母添加量、Ni^2＋起始浓度这5个条件对酵母菌吸附Ni^2＋的影响。试验结果表明,经过固定化,啤酒酵母吸附Ni^2＋的能力有所提高。pH值对啤酒酵母菌吸附Ni^2＋的影响较大,最适pH值为6。在20-40℃,温度对吸附的影响不大。     

乳酸片球菌产谷氨酸脱羧酶的相关酶学性质研究

为研究乳酸片球菌谷氨酸脱羧酶（GAD）的性质,采用比色法测其酶活。结果表明：当底物L-MSG的浓度为100 mmol.L-1时,GAD的活力达到最大。GAD的浓度为3.16%,最适温度为37℃,最适pH为5.0,PLP浓度为0.1 mo.lL-1时,GAD酶活力最大。Mg2＋和Mn2＋使GAD活力提高10%左右,KCl...