番鸭呼肠孤病毒弱毒株选育研究

应用番鸭胚成纤维细胞和鸡胚成纤维细胞(CEF)交替传代选育出适应CEF繁殖的番鸭呼肠孤病毒弱毒疫苗株。该弱毒株已失去对1日龄雏番鸭的致病性,对CEF的TCID50稳定在10-5~10-5.5;在雏番鸭体内连续盲传5代,未见毒力返强现象;1日龄雏番鸭免疫不同代次弱毒后7 d攻击番鸭呼肠孤病毒强毒,保护率均在88%以上,且不同代次弱毒的外源病毒检验结果均为阴性。上述结果表明该弱毒株无外源病毒污染、安全性好、遗传性稳定、免疫原性强,可用于制备番鸭呼肠孤病毒病活疫苗。     

番鸭呼肠孤病毒在番鸭体内的动态分布和排毒规律

应用RT-PCR技术检测番鸭呼肠孤病毒在人工感染番鸭体内的动态分布和排毒规律.结果显示在感染后ld可在肝、脾脏、法氏囊、胸腺和盲肠扁桃体中检出病毒RNA,表明病毒首先入侵免疫器官;随后其他器官中逐渐检测到病毒.高峰期为攻毒后7～14 d,所有器官中均能检测到病毒,此时也是病毒感染发病最严重的时间.感染后14 d,在肺和...     

新型鸭呼肠孤病毒弱毒S株在雏番鸭体内的增殖规律

【目的】研究新型鸭呼肠孤病毒（Novel duck reovirus,NDRV）弱毒S株C30在雏番鸭血液中的病毒血症,口咽、泄殖腔的排毒规律及靶器官的带毒时间,了解弱毒S株在雏番鸭体内的增殖规律和致弱机理。【方法】设计特异性引物,建立检测NDRV核酸的RT-qPCR方法;新型鸭呼肠孤病毒弱毒S株第30代（NDRV-S-C30）腿部肌肉注射2日龄雏番鸭,在免疫后1、2、3、4、6、8、10、12、14 d(Days post vaccination,dpv)采集其血液、肝脏、脾脏、泄殖腔分泌液和口咽液,用RT-qPCR方法检测NDRV在血液、口咽、泄殖腔及靶器官的增殖能力及带毒时间。【结果】建立了检测NDRV核酸的特异性RT-qPCR方法,使用该方法检测NDRV弱毒攻毒雏鸭的口咽和泄殖腔排毒时间分别为2～8 d和2～10 d,排毒高峰期为4～6 d;病毒血症时间为1～4 d,其中1～2 d为病毒血症高峰期;弱毒在肝脏的带毒时间为3～6 d,在脾脏的带毒时间为1～8 d。【结论】NDRV-S-C30弱毒株免疫雏番鸭后可通过口腔和泄殖腔向外界排毒,仅能引起较弱的病毒血症反应,且在肝脏中的增...     

番鸭呼肠孤病毒分子流行病学研究

选取1998～2009年福建省不同地区番鸭中分离到番鸭呼肠孤病毒分离株中具有代表性的10株,用RT-PCR技术扩增其S1和S4基因的功能区片段,进行序列测定.序列分析表明所扩增的S1基因的目的片段为819bp,S4基因目的片段为992 bp.参照国内外已发表的部分毒株S1和S4基因序列,构建番鸭呼肠孤病毒的遗传进化树,分析遗传进化关系.国内各分离株S1基因同源性为92.2％～96.7％,与国外89026株同源性为88.5％～92.8％,与禽呼肠孤病毒S1133株同源性为76％～78％.国内各分离株S4基因同源性为95.2％～99.3％,与国外89026株同源性为92.3％～94.5％,与禽呼肠孤病毒S1133株同源性为21.2％～21.5％.通过遗传进化树可以看到MDRV与同属的ARV序列形成了2个大分支,而MDRV序列分为2个小分支:一支为10株分离株和国内分离株,说明国内分离株没有明显差异;一支为国外分离株89026株,这说明国内分离株与国外毒株存在地域差异.     

番鸭细小病毒弱毒疫苗的研究

应用生物技术从番鸭细小病毒菁田株（ＭｕｓｏｖｙＤｕｌｋｉｌｉｎｇＰａｒｖｏｖｉｒｕｓ，ＭＰＶ－Ｐ）选育出对１日龄雏番鸭无致病力的弱毒疫苗株（ＭＰＶ－Ｐ１）。该弱毒株具有良好的兔原性和遗传稳定性；制备成疫苗，免疫注射１日龄雏番鸭，免疫后３ｄ部分鸭血清中出现抗体，７ｄ９８％以上的鸭血清中出现抗体；２１－３０ｄ抗体效价达高峰，有效免疫期在１９０ｄ以上；注苗后７ｄ攻毒，保护率１００％；当ＬＰＡＩ滴度在ｌｏ     

番鸭呼肠孤病毒的分离与鉴定

从番鸭肝“白点病”患鸭的肝脾匀浆中分离到7个病毒分离株。在电镜下观察到病毒粒子呈球形，无囊膜，有可见的双层衣壳结构，外壳直径75nm，内核直径50nm；病毒核酸型为RNA；不凝集鸡、鸭、兔、豚鼠红细胞，与禽呼肠孤病毒有一定的抗原相关性；对番鸭胚和鸡胚成纤维细胞可致感染细胞圆缩、融合，出现多核细胞和巨细胞，胞浆内有近核包涵体；试验感染1日龄敏感雏番鸭死亡率达100％，临床及病理变化与自然感染发病的番鸭基本一致，并可回收到该病毒。结果表明，目前国内流行的番鸭肝“白点病”病原为呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属番鸭呼肠孤病毒。     

新型鸭呼肠孤病毒弱毒株在雏番鸭体内的分布和排毒规律

为了解新型鸭呼肠孤病毒(Novel duck reovirus,NDRV)弱毒株感染雏番鸭后在体内的分布和排毒规律,本研究采用传代致弱的NDRV JDm10-150毒株接种1 d龄雏番鸭,对接毒后6 h~35 d雏番鸭的血液、脑、胸腺、心、肝、脾、肺、肾、胰腺、法氏囊、盲肠扁桃体、咽拭子和泄殖腔拭子采用qRT-PCR方法检测病毒分布情况。结果显示:接6 h后,在各组织脏器及血清中可检到NDRV核酸,且肝和脾病毒含量最高。随后,各组织脏器及血清中NDRV核酸含量逐渐减少。接毒后9 d,各组织器官及血液均检测不到NDRV核酸或NDRV核酸检测为阴性(Ct>35)。接毒后第13~35 d,除脑和血清外,大部分的组织脏器中均又检测到NDRV核酸,且NDRV核酸含量基本稳定,其中脾脏和法氏囊组织中NDRV核酸含量始终保持较高水平。对不同时间采集的咽拭子和泄殖腔拭子进行检测,发现雏番鸭在接毒后6 h开始向外界排毒,之后通过泄殖腔排毒,直至攻毒后28 d停止排毒。以上检测结果表明,NDRV JDm10弱毒株感染雏番鸭后快速侵入各组织脏器和血液,脾脏和法氏囊为主要侵染和定殖场所,主要通过泄殖腔分泌物向外界排毒。     

番鸭呼肠孤病毒致病机理研究进展

番鸭呼肠病毒病是近几年流行的一种侵害番鸭为主的急性传染病,该病主要以脏器出现白色坏死为主要临床症状,给养殖业的预防治疗带来极大困难。为了减少该病造成的经济损失,从阐述该病的致病机理入手,为进一步明确和研究该病提供了思路。     

番鸭呼肠孤病毒B3株感染对雏番鸭细胞免疫功能的影响

番鸭感染番鸭呼肠孤病毒后,在感染早期(15 d内),外周血淋巴细胞转化率比对照显著下降(P<0.01),外周血T淋巴细胞ANAE阳性率比对照显著下降(P<0.01),IL-2含量也比对照组显著下降(P<0.01);但在感染后期(特别是感染后20 d)各指标均有所回升,但仍显著低于对照.由此可见,番鸭呼肠孤病毒感染早期机体细胞免疫功能受到严重影响,感染后期功能逐渐恢复.     

呼肠孤病毒B3分离株感染番鸭的病理组织学研究

番鸭呼肠孤病毒B3分离株可经滴鼻、饮水、肌肉和爪垫注射与同居感染1日龄敏感番鸭，潜伏期3－11d，死亡率100％；接种1日龄番鸭、半番鸭和雏鸡抓垫可引起注射部位炎性反应，爪垫和肌肉注射1日龄半番鸭和雏鸡不死亡，病毒感染番鸭主要引起肝、脾、心肌、肾、腔上囊、腺胃、肠粘膜下层等组织局灶性坏死；肝、脑血管周围和肾间质、肺间质、心肌间有淋巴样细胞或／和蚕噬细胞聚集，法氏囊淋巴细胞变性和坏死，电镜观察表明，感染胚肝细胞和脾淋巴细胞胞浆内有大量病毒样颗粒及近核包涵体，感染细胞多核化、空泡化及颗粒化；发现含有病毒样颗粒的凋亡细胞；吞噬细胞胞浆内有病毒样颗粒和含病毒样颗粒的调亡小体，此项研究为国内首次报道。     

抗番鸭细小病毒卵黄抗体的制备

[目的]有效预防和治疗番鸭细小病毒病。[方法]用番鸭细小病毒连续免疫产蛋母鸡3次,收集鸡蛋,并制备出高免卵黄抗体。通过琼脂扩散试验对制备的卵黄抗体进行效价测定,用雏番鸭进行中和与治疗试验。[结果]制备的卵黄抗体琼扩效价达到1∶32,能有效中和番鸭细小病毒对雏番鸭的致病性,对发病的雏番鸭有很好的治疗作用。[结论]该研究为番鸭细小病毒的预防和治疗提供了一种有效的生物制品。     

骡鸭和番鸭的生长及屠宰性能比较

通过饲养试验与屠宰试验探讨骡鸭和番鸭生长性能和屠宰性能的差异,确定最佳饲养品种.结果表明,骡鸭、母番鸭、公番鸭的上市日龄分别为8周龄、10周龄和12周龄,上市体重分别达3.67、2.44和5.06 kg;它们增重速度最快阶段分别在4～6周龄、6～8周龄和5～6周龄;全程平均日增重分别为64.80、34.10和59.70 g;全程成活率分别为89.61％、75.77％和82.61％.骡鸭的屠宰率、半净膛率、全净膛率分别是92.20％、84.19％和70.52％,均显著高于番鸭(P＜0.05);骡鸭腹脂率为1.52％,显著低于番鸭(P＜0.05).骡鸭生长速度最快,成活率最高,且具屠宰性能优势.     

番鸭体内H5亚型禽流感HI抗体与抗感染关系研究

对经过H5N1油苗免疫的50日龄番鸭,按HI抗体水平分组后,进行人工接种HPAIV,通过试验鸭的临床症状、病理变化和排毒情况综合判断HI抗体水平与保护力之间的关系。结果表明,HI抗体水平在5.0log2以下时,番鸭群可感染HPAIV,出现临床症状,表现不同程度的病理变化,并有排毒现象。抗体水平达到3.0log2~5.0log2的免疫番鸭群已具有一定的抵抗力,可以延缓发病时间,降低发病程度。随抗体水平的升高,发病与排毒的程度有所下降。当抗体水平达6.0log2及以上时,番鸭对人工接种HPAIV具有完全抵抗能力,不排毒。因此,番鸭对H5N1亚型HPAIV具完全抵抗力的HI抗体水平的临界保护滴度为6.0log2。     

番鸭IFN-α基因的克隆与序列分析

采用RT-PCR方法从番鸭肺脏器官中扩增IFN-α基因片段,将扩增产物经胶回收后克隆到pMD18-T 载体上,经PCR和双酶切鉴定为阳性后进行序列测定,并用Lasergene v7.1DNAStar软件对测序结果进行分析.结果表明,所扩增的IFN-α基因编码完整的开放阅读框,基因长度为576 bp,为国内外首次报道.并...     

番鸭细小病毒VP3基因的原核表达及鉴定

[目的]使番鸭细小病毒(DPV)VP3在原核表达系统中正确表达.[方法]根据番鸭细小病毒VP3基因序列,设计一对特异性引物,利用PCR技术扩增出VP3基因;将其克隆至原核表达载体p ET-32a,获得重组表达载体p ET-32a-VP3.将重组质粒转化感受态细胞BL21(DE3),经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测重组蛋白.[结果]成功表达出与预期大小相符的重组蛋白,约89 k Da;且当IPTG浓度为1.2 mmol/L,诱导时间为6 h时蛋白表达量最大.[结论]该研究通过原核表达系统成功表达了DPV、VP3蛋白,并摸索了蛋白最佳表达条件.     

新型番鸭细小病毒的发现及其感染的临床表现

2008年下半年以来,福建省、浙江省、安徽省及江苏省等地部分鸭场或养鸭户的雏半番鸭和台湾白鸭出现低病死率,约于40日龄起脚易断、上喙变短占近30%,至出栏时残次鸭达60%;免疫接种了雏番鸭细小病毒弱毒活疫苗的雏番鸭依然发生类雏番鸭"三周病",除出现死亡外,幸存鸭的番鸭翅脚易断、上喙变短,83%感染鸭成为僵鸭,对我国养鸭业造成了较大的直接经济损失。经病原学检测、病毒分离鉴定和实验室感染试验,发现其病原为与原经典的雏番鸭细小病毒(MDPV)在基因组上、感染宿主范围和致病性存在较大差异的番鸭细小病毒,鉴于此,将之暂定名为新型番鸭细小病毒(NMDPV)。     

法国番鸭不同孵化阶段蛋壳内钙·磷含量的变化研究

[目的]为了了解法国番鸭胚胎发育期间钙、磷的吸收利用规律。[方法]通过对不同孵化时期法国番鸭蛋壳内钙、磷含量及比例进行测定,研究了不同孵化阶段蛋壳内钙、磷含量的变化。[结果]随着孵化时间的延长,蛋壳内钙、磷含量呈现逐渐降低的规律性。0～20胚龄,蛋壳内钙变化相对较小,20胚龄时钙含量突然降低,并持续至35d出雏;磷含量变化从8胚龄开始,28胚龄达最大,0～8和28～35胚龄蛋壳中吸收磷较少。孵化期间,8～28胚龄钙磷吸收比例呈逐渐上升趋势。[结论]孵化前期,钙的吸收较低,中后期较高,出雏前4d钙吸收最多。磷孵化前期变化不明显,中期较为明显,后期趋于稳定。该研究符合禽类胚胎发育规律。     

番鸭本品种人工授精的技术

通过５００多头次采用母鸭诱情法采精和食指定位法输精，对番鸭本品种人工授精方法、输精量、输精间隔时间、输精时间以及稀释液对受精率影响等进行系列研究．结果表明：番鸭平均采精量为１．０７±０．２６ｍＬ只－１，密度为（１．８５±０．２３）×１０９ｍＬ－１，活力为７．５－９．８；以１６：００－１７：００输精，输精量０．０５ｍＬ只－１，间隔６ｄ输精１次为好，受精率可达８９．１１％；采用人工授精，公鸭利用率比自然交配提高２０倍，可大幅度提高饲养效益；用不同稀释液（生理盐水、蛋黄葡萄糖液和磷酸缓冲液）按１１稀释番鸭精液与原精液输精比较，以磷酸缓冲液稀释组的受精率（９０．０１％）较高，但与原精组受精率（８９．０９％）差异不显著（Ｐ＞０．０５）；用磷酸缓冲液和Ｌａｋｅ液以１１稀释后在２－５℃保存２４ｈ输精，受精率分别为３０．５６％和４５．３２％     

番鸭的饲养试验

对引进的法国RF系白番鸭进行饲养试验,观测结果表明:番鸭适应性强,生长发育良好,成活率高,70d成活率达97.50％;早期生长速度快,产肉性能好,70d公母鸭平均体重达3.46kg;料肉比低,仅为2-31:1。     

法国番鸭与莆田白番鸭杂交的效果

为改善莆田白番鸭的生长速度和肉用性能,本试验选用法国Ｒ５１系番鸭与莆田白番鸭进行二元杂交,通过对杂交后代与亲本的生产性能进行比较．结果表明,７０日龄时杂交番鸭．莆田白番鸭平均体重公鸭分别为２８７０．６ｇ和２６１６．７ｇ,母鸭为１９５４．２ｇ和１７３７．５ｇ,经检验公鸭体重之间存在显著差异（Ｐ＜０．０５）,母鸭体重之间存在极显著差异（Ｐ＜０．０１）,日增重公鸭分别为４０．３１ｇ和３６．６８ｇ,母鸭为２７．２４ｇ和２４．１５ｇ,杂交番鸭与莆田白番鸭的料肉比为３．０７和３．１４．由此可见,杂交番鸭与莆田白番鸭相比,具有生长快,体型大,饲料转化率高等特点,获得了良好的杂交效果．