抗ICAM-1单链抗体基因的克隆及序列分析

应用 RT- PCR技术 ,从分泌具有中和活性的抗 ICAM- 1单克隆抗体 (Mc Ab)的杂交瘤细胞 F12中 ,扩增出抗体VH和 VL 基因 ,用 linker(Gly4 Ser) 3基因 ,将 VH和 VL 基因连接成 Sc Fv基因 ,并将其克隆到 p MD18- T载体中。经核苷酸序列分析证实 ,VH、VL 基因和 linker基因拼接正确 ,基因全长为 74 4 bp。经计算机分析 ,VH 和 VL 基因均为新发现的基因序列 ,符合功能性重排鼠抗体可变区基因特征。 VH和 VL 基因分别属于鼠免疫球蛋白重链 (B)和轻链к 家族     

抗新城疫病毒HN蛋白单链抗体基因的克隆与序列分析

从分泌抗新城疫HN蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取纯化mRNA,经RT-PCR扩增抗体轻、重链可变区基因,然后与L inker连接组装成单链抗体基因(scFv),其排列方式为VL-linker-VH。结果,成功地构建了scFv基因,序列分析表明,scFv基因长为744 bp,其中VH基因长为366 bp,VL基因长为333 bp。单链抗体基因的构建为抗新城疫HN蛋白基因工程抗体的制备奠定了基础。     

抗盐酸克伦特罗单链抗体基因的克隆、序列分析及表达

提取分泌抗盐酸克伦特罗单克隆抗体杂交瘤细胞株的总RNA,通过RT-PCR技术,扩增VH和VL,用一段柔性肽链-(G4S)3将VH和VL连接成ScFv。测序后经NCBI Blast分析,所得ScFv具有重组功能性鼠抗体可变区基因的特征。将所得目的基因与pET-22b( )连接,转化E.coli BL21,用IPTG诱导表达,表达蛋白经SDS-PAGE分析,37℃培养5 h表达量较大,25℃诱导表达以可溶性为主。     

抗猪脂肪细胞特异膜蛋白单克隆抗体的制备及生物学特性鉴定

以纯化的猪脂肪细胞特异膜蛋白 (40 0 0 0 )为抗原免疫 BAL B/ c小鼠 ,制备了 2 A3、3 H7和 3 A6等 3株单克隆抗体 ,分别属于 Ig A、Ig M和 Ig G1亚类 ,其最佳稀释倍数分别为 1∶ 1 6 0 0、1∶ 3 2 0 0和 1∶ 6 4 0 0。经 Western blotting鉴定 ,3株单抗均能与 4 0 0 0 0的抗原结合 ,且具有较强的抗原亲和力 ,亲和常数分别为 4 .86× 1 0 8、1 .86× 1 0 9和 2 .4 6× 1 0 9;对皮下脂肪细胞具有很强的特异性 ,经 Western blotting鉴定仅与猪和人脂肪细胞的 4 0 0 0 0膜蛋白发生特异反应 ,而与牛、羊、兔、鸡、鼠等动物的脂肪细胞膜蛋白均无交叉反应 ;能与滇玉、滇昆、滇陆、长撒、长白、DL Y、约长撒和撒坝等品种猪皮下脂肪细胞的 4 0 0 0 0膜蛋白发生特异反应 ,而与皮下脂肪细胞的其他膜蛋白无交叉反应 ;仅与长撒猪皮下脂肪和腹部脂肪细胞的 4 0 0 0 0膜蛋白发生特异反应 ,与心、肝、脾、肺、肾、肌肉、肠系膜脂肪和肾周脂肪细胞膜蛋白均无交叉反应     

抗隐孢子虫子孢子表膜单链抗体基因的克隆和核苷酸序列分析

应用RT－PCR技术，从分泌具有抗隐孢子虫子孢子表膜单克隆抗体（McAb)的杂交瘤细胞3D6中扩增出抗体VH和VL基因，用linker(Gly4Ser)3基因，将VH和VL基因连接成ScFv基因，并将其克隆至pMD-18T载体中。经核苷酸序列分析证实，VH、VL基因和linker基因拼接正确，基因全长为720bp。经计算机分析，VH和VL基因均为新发现的基因序列，符合功能性重排的鼠抗体可变区基因特征。VH和VL基因分别属于鼠免疫球蛋白重链Ⅱ（A）和轻链κⅢ家族。     

抗猪脂肪细胞膜单链抗体基因的构建及鉴定

应用噬菌体展示技术，从猪脂肪细胞免疫的小鼠脾细胞mRNA中构建出单链抗体(scFv)cDNA文库。cDNA文库克隆到噬菌粒载体pCANTAB5E，转化E.coli TG1,通过噬菌体表面展示，用猪脂肪细胞对表达的重组噬菌体单链抗体文库进行3轮亲和富集，筛选出了猪脂肪细胞膜scFv，为今后的应用奠定了基础。     

抗脂肪细胞40 000特异膜蛋白scFv-Fc融合抗体毕赤酵母表达载体的构建

采用RT—PCR方法从人外周血淋巴细胞克隆IgG1 Fc片段基因，经序列分析表明，该Fc片段基因长699bp，具有完整的铰链区、CH2和CH3结构区，与GenBank中人IgG1重链Fc片段基因序列完全相同。将Fc片段基因与pPICZaA酵母载体连接先构建pPIgG1质粒，然后将抗脂肪细胞40000特异膜蛋白的噬菌体scFv抗体基因插入到pPIgG1质粒，构建pPIgG1-scFv酵母表达载体。序列分析表明，scFv基因与Fc片段基因拼接正确，阅读框正确无误，表明成功构建了抗脂肪细胞40000特异膜蛋白scFv—Fc融合抗体毕赤酵母表达载体。本试验为下一步在毕赤酵母中大量表达与IgG结构相似、具有较高亲和力和生物活性的scFv—Fc融合抗体分子奠定了基础。     

单链抗体的研究进展及其应用前景

随着分子生物学的进一步发展，抗体技术也逐步由细胞工程抗体(单克隆抗体)向基因工程抗体演替，特别是单链抗体在理论和应用方面的研究尤为令人关注。本文对单链抗体的特点及单价单链抗体、单链抗体多聚体、双特异性单链抗体等方面的研究进展进行回顾，并就单链抗体的应用前景进行了简单地阐述。     

抗A型产气荚膜梭菌α毒素单链抗体的基因克隆及核苷酸序列分析

应用 RT-PCR技术 ,从分泌具有中和活性的抗 A型产气荚膜梭菌α毒素单克隆抗体 ( Mc Ab)的杂交瘤细胞 2 E3中 ,扩增出抗体 VH 和 VL 基因 ,用 linker( Gly4Ser) 3基因 ,将 VH 和 VL 基因连接成 Sc Fv基因 ,并将其克隆至 p GEM-T载体中。经核苷酸序列分析证实 ,VH、VL 基因和 linker基因拼接正确 ,基因全长为 72 6bp。经计算机分析 ,VH 和 VL 基因均为新发现的基因序列 ,符合功能性重排的鼠抗体可变区基因特征。VH 和VL 基因分别属于鼠免疫球蛋白重链 ( B)和轻链κ 家族     

抗蓖麻毒素单链抗体基因的构建及其在大肠杆菌中的表达

为构建和表达抗RT单链抗体(ScFv)蛋白,用RT-PCR方法从能分泌特异性抗RT单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞中分离纯化抗体VH和VL基因。用重叠延伸PCR方法将VH和VL拼接在一起,构建抗RT-ScFv基因。将ScFv基因连接到pMAL-p2X表达载体,转化TB1表达菌。阳性克隆用IPTG诱导18h,Western blotting鉴定重组蛋白。结果表明,试验成功扩增出了ScFv基因,长度约为750bp。通过DNA序列测定和分析,构建出VL-(Gly4Ser)3-VH。其VH全长363bp,可编码121个氨基酸,VL全长324bp,可编码108个氨基酸。SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,抗RT-ScFv在TB1表达菌中获得高效表达,pMAL-p2X表达的ScFv加上同时融合表达的MBP标签分子质量约为75ku。本试验成功构建了pMAL-RT-ScFv表达载体,并获得了高效表达。     

抗猪囊尾蚴头节特异性单链抗体的构建及克隆

首先对猪囊尾蚴头节特异性单链抗体重链可变区基因(Vh)和轻链可变区基因(Vl)进行酶切鉴定,PCR鉴定以及测序分析,然后采用重叠延伸PCR(SOE PCR)技术,将重链可变区基因和轻链可变区基因,通过linker链连接成Vh-linker-Vl单链抗体基因(ScFv)。将此基因与pMD18-T载体连接,转化感受态大肠杆菌J M109,从而进一步克隆并对重组载体pMD-ScFv进行鉴定。结果:成功构建并克隆了抗猪囊尾蚴头节单链抗体,为重组免疫毒素ScFv-PE40的构建?表达及活性测定奠定了良好的基础。     

单链抗体的研究进展

抗体在疾病的诊断、治疗和预防中发挥着重要的作用,其生产制备经历了抗血清多克隆抗体和单克隆抗体(Monoclonalantibodies,McAb)阶段,现已进入了基因工程抗体的时代。基因工程抗体主要包括单链抗体(ScFv)、Fab抗体、F(ab`)2抗体等小分子抗体、嵌合抗体和改形抗体。本文就单链抗体的研究进展作了综述。     

抗脂肪细胞膜蛋白抗体对猪生长性能的调控

通过腹腔注射抗猪皮下脂肪细胞全膜蛋白抗体研究其对猪生长性能的调控效果。结果显示,在15kg时分别注射10、20、30ml和60kg时注射20ml抗体,注射后3周内猪的采食量降低(P>0.05),5周后采食量恢复正常;同一时间注射不同剂量抗体和不同时间注射相同剂量抗体对猪的日增重无显著影响(P>0.05),但料重比明显降低(P<0.05);对血液GH和IGF-I的含量无显著影响(P>0.05),但可明显提高T3的含量。表明抗脂肪细胞膜蛋白抗体可提高猪的生长性能,使饲料转化效率提高。     

抗脂肪细胞膜蛋白抗体及其对动物生长的调控

介绍了脂肪细胞膜蛋白及其抗体的研究进展,以及用脂肪细胞膜蛋白抗体免疫动物的作用机制和效果,并阐述了它在动物生产及人的肥胖症等方面的应用前景。     

抗α毒素单链抗体基因表达及生物学特性研究

将重组质粒分别转化至相应的受体菌XL1-BLUE中，得到重组菌株XL1-BLUE（pHOG-2E3)。ELISA和SDS-PAGE检测表明：经IPTG诱导后所表达的ScFv目的蛋白在重组菌株XL1-BLUE（pHOG-2E3)中主要形成了包含体的形式，在其胞周质和培养上清中也检测到了ScFv的存在，经薄层扫描分析：重组菌株XL1-BLUE（pHOG-2E3)的蛋白表达产物分别占菌体可溶性蛋白的4%，占菌体总蛋白的相对含量为22%，其相对分子量约为31kD。表达的SeFv蛋白不但具有中和卵磷脂酶的活性，而且能够对致死性腹腔攻击α毒素的小鼠产生了良好的被动保护作用。     

单链抗体的制备及其应用

单链抗体由于分子质量小、穿透力强、半衰期短、特异性好和免疫原性低等特点,越来越引起学者的重视.本文就单链抗体的制备、表达及应用等方面作一综述.     

抗猪流感病毒单链抗体的原核表达及活性分析

为了深入研究抗猪流感病毒(SIV)单链抗体(scF v)的功能,以及抗体的放大生产和应用,在获得特异性抗体SIV scF v编码基因的基础上,建立该单链抗体的原核高效表达体系,并对表达产物进行复性纯化和活性测定。通过PCR从重组噬粒中扩增抗scF v基因,将其克隆到原核表达载体p ET28a(+)中后,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞并诱导表达。SDS-PAGE和Western blot分析表明重组scF v主要以包涵体形式表达,经过复性和纯化可获得可溶性的重组scF v,分子质量约为33 ku。间接ELISA和阻断ELISA表明,复性后的scF v与包被在酶标板上的SIV具有特异的结合反应,且具有浓度依赖性。重组scF v可以与其他2株SIV国内分离株特异性结合,提示重组scF v可能针对的是该病毒的保守区域。本研究成功获得了具有中和H1N1猪流感病毒活性的重组抗SIV scF v,为深入研究其功能以及进行大规模生产应用提供依据。     

抗脂肪细胞膜蛋白抗体对猪胴体组成的调控

选择健康、胎次相近、体重为15kg的6周龄云南长撒二元杂交仔猪20头,公母各半,随机分为4组,每组5头.Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组为试验组,于试验开始第一天各组每头猪分别腹腔内免疫抗脂肪细胞膜蛋白抗体10mL、20mL和30mL抗体;、Ⅳ为对照组,注射20mL非免疫血清.研究结果表明:抗脂肪细胞膜蛋白抗体可明显改善猪胴体组成.仔猪阶段(15kg)腹膜内免疫20mL、30mL抗体对猪胴体组成的改善效果最明显,脂肪率分别降低22.97%和22.25%(P＜0.01);背膘厚分别减少18.85%和17.91%(P＜0.05);板油重和花油重分别减少13.36%、13.70%和11.69%、11.03%(P＜0.05);瘦肉率分别提高7.76%和7.62%(P＜0.05);眼肌面积分别增加28.03%和24.21%(P＜0.01).     

抗脂肪细胞膜蛋白抗体对猪胴体组成的调控

选择健康、胎次相近、体重为15kg的6周龄云南长撒二元杂交仔猪20头,公母各半,随机分为4组,每组5头。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组为试验组,于试验开始第一天各组每头猪分别腹腔内免疫抗脂肪细胞膜蛋白抗体10mL、20mL和30mL抗体;、Ⅳ为对照组,注射20mL非免疫血清。研究结果表明:抗脂肪细胞膜蛋白抗体可明显改善猪胴体组成。仔猪阶段(15kg)腹膜内免疫20mL、30mL抗体对猪胴体组成的改善效果最明显,脂肪率分别降低22.97%和22.25%(P<0.01);背膘厚分别减少18.85%和17.91%(P<0.05);板油重和花油重分别减少13.36%、13.70%和11.69%、11.03%(P<0.05);瘦肉率分别提高7.76%和7.62% (P<0.05);眼肌面积分别增加28.03%和24.21%(P<0.01)。