鸭疫里氏杆菌PCR快速检测方法的建立

本试验根据GenBank中的鸭疫里氏杆菌主要外膜蛋白A基因序列,在其保守区设计了1对引物,建立了检测鸭疫里氏杆菌的PCR方法,对鸭疫里氏杆菌进行检测,结果能扩增出预期片段,而金黄色葡萄球菌、链球菌、多杀性巴氏杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌的扩增结果均为阴性。说明该PCR法具有较好的特异性,可用于鸭疫里氏杆菌感染的检测、分子流行病学调查和分离菌株的快速鉴定。     

鸭疫里氏杆菌的分离与16 S rRNA的鉴定

从疑似患有鸭疫里氏杆菌病的病死鸭群中采取的肝脏、心脏、脑等病料中分离病原,进行生化鉴定,自6只病死鸭的12份病料中分离鉴定出6株鸭疫里氏杆菌。根据鸭疫里氏杆菌16 S rRNA基因的保守序列设计特异引物,对6株鸭疫里氏杆菌进行PCR扩增,均能扩增出680 bp的特异条带;从凝胶中回收DNA目的条带并测序,测序结果与GenBank中鸭疫里氏杆菌相应序列相似率达到99.99%。     

1型鸭疫里氏杆菌的分离鉴定及其ompA基因B细胞表位预测

本研究从贵州发病鸭中分离到1株致病菌,经生化试验、16S rRNA序列分析、血清学试验和动物回归试验,鉴定为1型鸭疫里氏杆菌(RA),药敏试验结果表明,其对头孢拉定、头孢曲松钠、头孢噻肟和氟苯尼考高度敏感;同时根据GenBank中鸭疫里氏杆菌ompA基因序列,设计1对引物,成功克隆出鸭疫里氏杆菌ompA基因,扩增产物大小为1149 bp。采用DNAStar Protean程序,综合运用二级结构、亲水性、可塑性和抗原性指数等参数,对鸭疫里氏杆菌ompA基因的氨基酸序列进行了B细胞表位预测,为进一步研究鸭疫里氏杆菌表位疫苗和分子诊断技术的建立奠定基础。     

3株鸭疫里氏杆菌的分离鉴定

对广东某鸭场疑似传染性浆膜炎病鸭进行细菌分离鉴定和致病性考察。从濒死鸭脑、肝脏和心血中进行细菌分离,通过鉴别培养、染色镜检、生化试验和PCR检测进行细菌的鉴定,将最终确定为鸭疫里氏杆菌的分离菌株进行扩增培养后,进行动物回归试验,考察其致病性。结果显示分离到的3株细菌均为鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer),动物回归试验中试验组鸭均发病,并表现典型传染性浆膜炎症状,甚至死亡。表明所分离的3株鸭疫里氏杆菌具有较强的致病性。     

鸭新城疫病毒和鸭圆环病毒二重PCR检测方法的建立

本研究根据GenBank中鸭新城疫病毒(NDV)的F基因和鸭圆环病毒(DuCV)的V1/rep基因的保守序列,各设计一对特异性引物,并对二重PCR的扩增条件进行优化,建立了鸭NDV和DuCV的二重PCR检测方法。对混合样品进行扩增,得到2条大小为493bp(鸭NDV)和218bp(DuCV)的特异性条带,与预扩增片段相符。而对番鸭细小病毒、鸭瘟病毒、鸭肝炎病毒、鸭源小鹅瘟病毒、鸭H9亚型流感病毒、鸭疫里氏杆菌、大肠杆菌、禽多杀性巴氏杆菌等病原检测,结果为阴性。该方法的敏感性试验表明,鸭NDV的核酸最小量为40fg,DuCV为20fg。     

安徽省部分地区鸭疫里氏杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

2007年3月～12月从安徽省不同地区临床疑似鸭疫里氏杆菌感染病/死鸭中分离到26株鸭疫里氏杆菌,通过细菌形态、PCR鉴定、培养特性、生化试验和动物试验,鉴定为鸭疫里氏杆菌.各地区分离株表现为较一致的形态特征和相似的生理生化特性.对不同地区分离到的26株鸭疫里氏杆菌进行了14种常用抗菌药物的药敏试验,结果26株鸭疫里氏杆菌分离株对青霉素G、氨苄青霉素、先锋噻肟、阿莫西林和罗红霉素等几种药物敏感性较高,对庆大霉素和卡那霉素的耐受率最高,对阿米卡星、复方新诺明、链霉素和新霉素等均不同程度地产生了耐药性.本研究为安徽省鸭疫里氏杆菌病的药物防治提供了理论依据.     

鸭疫里氏杆菌南昌分离株的16S rDNA鉴定与药敏分析

为了对从南昌某疑似鸭疫里氏杆菌病的病死雏鸭大脑、肝脏中分离得到的1株菌株进行16S rDNA鉴定,并筛选敏感药物,试验采用染色镜检、PCR扩增、测序与序列比对分析及药敏纸片扩散法等对分离株进行研究。结果表明:经染色镜检,分离菌呈革兰氏染色阴性,菌体为单个或成双排列的小杆菌,无芽孢,将其命名为NC-RA1;PCR扩增得到大小约为1 500 bp的条带;分离株NC-RA1与鸭疫里氏杆菌16S rDNA基因同源性高达99%;分离株NC-RA1对氟苯尼考、替卡西林-克拉维酸、头孢噻肟敏感,对四环素中度敏感,对庆大霉素、卡那霉素等药物耐药。说明该分离株为鸭疫里氏杆菌,并且可以用氟苯尼考、替卡西林-克拉维酸、头孢噻肟对其进行防治。     

鸭疫里默杆菌PCR快速检测方法的建立

为了建立一种能快速准确地检测鸭疫里默杆菌的PCR方法,试验采用GenBank中鸭疫里默杆菌42 ku主要外膜蛋白A的基因序列设计并合成1对引物,建立PCR方法,分别以21株来自广西各地区鸭场的鸭疫里默杆菌全菌体为模板,结果均能扩增出大小为660 bp的目的片段,经测序证实为鸭疫里默杆菌,而对鸭源大肠杆菌、鸭源沙门菌、鸭...     

广东省Ⅰ型鸭疫里氏杆菌分离鉴定及PFGE分型研究

本文旨在研究广东地区Ⅰ型鸭疫里氏杆菌流行分布情况及其分子分型特点。2007—2017年,收集广东地区病死鸭、鹅的脑或肝组织等样品,进行菌株的分离、纯化及PCR鉴定等试验;采用玻片凝集的方法对鸭疫里氏杆菌进行Ⅰ型血清型鉴定,并进一步对血清Ⅰ型菌株进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型,用BioNumerics 6.0软件进行聚类分析,比较同源性。结果表明:2007—2017年本实验室共分离保存220株鸭疫里氏杆菌,其中有119株为Ⅰ型血清型,占总分离株的54.09%。PFGE分型得到33种不同的PFGE分型图谱(以相似度≥85%为判断标准),可分为19个簇及14个单一型。血清Ⅰ型是广东地区鸭疫里氏杆菌的优势血清型。Ⅰ型鸭疫里氏杆菌分子型别呈现多样化,菌株之间的同源性差异较高,但存在小范围的克隆传播。     

鸭圆环病毒套式PCR检测方法的建立

根据GenBank发布的鸭圆环病毒(duck circovirus,DuCV)序列(AY228555),运用Primer Premier 5.0设计2对引物,建立了适合DuCV快速检测的套式PCR方法,采用该方法对从安徽省望江县采集的发病鸭肝脏、胸腺、法氏囊、肾脏和脾脏等内脏病料进行DuCV检测。结果显示,套式PCR对所有内脏病料均能扩增出340 bp的条带,而正常鸭胚、健康鸭肝脏、鸭瘟病毒、禽流感病毒(H9亚型)、新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒、网状内皮组织增生病毒、鸡传染性贫血病毒、鸭源大肠杆菌和鸭疫里氏杆菌的扩增结果均为阴性;该方法第1次扩增的敏感性是1 ng,第2次扩增的敏感性是1 fg,第2次比第1次扩增的敏感性高106倍;表明本试验所建立的套式PCR方法可用于鸭圆环病毒(DuCV)感染的临床诊断和流行病学调查。     

鸭疫里氏杆菌九种氨基糖苷类修饰酶基因的检测

用PCR技术对在革兰氏阴性菌中常见的9种氨基糖苷类修饰酶基因进行检测,从1株鸭疫里氏杆菌种检测到了ant(3″)-Ⅰ基因,说明修饰酶已经在中国的鸭疫里氏杆菌中存在。     

鸭疫里氏杆菌病病原的分离鉴定

鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)病,是造成养鸭业严重经济损失的传染病之一。作者对某鸭场的病死鸭进行临床症状观察、病理剖检,通过细菌的分离培养及鉴定,确诊病死鸭病原为鸭疫里氏杆菌。鉴于养殖场中该病的存在及对养鸭业的危害,建议加强对鸭疫里氏杆菌病的诊断及监控。     

鸭疫里氏杆菌耐药性及分子生物学检测方法的研究进展

鸭疫里氏杆菌病又称鸭传染性浆膜炎,是由鸭疫里氏杆菌引起的主要侵害雏鸭的一种急性败血性传染病。近几年,该病的发病率和死亡率不断升高,迄今为止还主要靠药物治疗。了解鸭疫里氏杆菌的耐药机制及其快速准确检测,其污染是控制鸭疫里默氏杆菌感染传播及其疾病治疗的关键环节。因此本文对鸭疫里氏杆菌的耐药现状、耐药机制以及分子生物学检测方法做了总结概述,以期为临床合理用药防治鸭疫里氏杆菌病,减缓耐药菌株的产生提供依据。     

鸭疫里默氏杆菌假定溶血素相关蛋白基因Riean_0415的原核表达及溶血活性检测

为了分析鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)假定的含CBS结构域的溶血素相关蛋白(hypothetical hemolysinrelated protein,HRP)的功能,本研究根据血清10型鸭疫里氏杆菌HXb2株Riean_0415基因的核苷酸序列,设计了1对特异性引物,采用PCR扩增了Riean_0415基因,并进行了序列测定与分析。然后将Riean_0415基因克隆到原核表达载体p ET-43.1a,再用亲和层析纯化获得诱导表达的重组蛋白r HRP。溶血活性检测结果表明表达的重组蛋白r HRP具有裂解鸭红细胞的活性。本研究结果为进一步研究r HRP蛋白的功能和鸭疫里默氏杆菌的溶血机制等奠定了基础。     

山东部分地区3型鸭疫里氏杆菌感染流行病学调查

利用血清3型鸭疫里氏杆菌制备兔抗高免血清和平板凝集诊断抗原,对收集的2010年3月~10月来山东畜牧兽医职业学院动物医院就诊的鸭传染性浆膜炎疑似病例进行血清3型鸭疫里氏杆菌分离培养及鉴定。同时,采集山东养殖量较大的9个县、市、区的13个养殖场372份鸭血清,利用平板凝集试验对3型鸭疫里氏杆菌的流行情况进行血清学调查。结果显示：共分离得到39株鸭疫里氏杆菌,且19株为血清3型,占鸭疫里氏杆菌总数的48.7%;在采集的血清样本中,3型鸭疫里氏杆菌阳性率为21.7%。可见,3型鸭疫里氏杆菌在山东上述地区感染较为普遍。     

鸡胚培养鸭疫里氏杆菌的培养条件优化研究

鸭疫里氏杆菌病是由鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)引起的一种接触性传染性疾病,又称为鸭传染性浆膜炎、新鸭病、鸭败血症、鸭疫综合征、鸭疫巴氏杆菌病等,多见于1～8周龄的小鸭,呈急性或慢性败血症,临床主要表现为眼和鼻分泌物增多、喘气、咳嗽、下痢、共济失调和头颈震颤,少数慢性     

鸭疫里氏杆菌病的研究进展

鸭疫里氏杆菌病是由鸭疫里氏杆菌(Riemerel-la anatipestifer,RA)引起的鸭、鹅、火鸡等多种禽类的一种急性或慢性传染病[1],又称为“新鸭病”“、鸭疫综合征”“、鸭败血症”“、鸭传染性浆膜炎”“、鸭疫巴氏杆菌感染”和“鸭疫雷摩氏菌病”。本病呈急性或慢性败血症过程,以纤     

鸭疫里氏杆菌病的防治

鸭疫里氏杆菌病又名鸭传染性浆膜炎,是由鸭疫里氏杆菌感染引起的一种接触性传染病,本病以出现纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎和脑膜炎为特征。 　　鸭疫里氏杆菌病于 1932年在美国纽约州长岛的鸭群中首次发生,曾先后被称为新鸭病、鸭败血症、鸭疫综合征、鸭疫巴氏杆菌病。 1993年 Segers等人利用分子生物学技术对本病病原菌的各种表型参数和基因特征进行分析,认为应将该菌放在单独的一个属,为纪念首先发现本菌的 Riemer氏 (1904),特将本菌的属名命名为 Riemerella,由本菌引起的鸭病命名为鸭疫里氏杆菌病 (Riemerella anatipestife…     

鸭疫里氏杆菌外膜蛋白研究进展

综述了鸭疫里氏杆菌外膜蛋白的研究进展。鸭疫里氏杆菌病为危害养鸭业最严重的疾病之一。外膜蛋白作为鸭疫里氏杆菌不同血清型的共同免疫原性蛋白,可同时诱导机体的体液免疫和细胞免疫,具有异种血清型的免疫交叉保护作用,其与鸭疫里氏杆菌毒力密切相关,且在鸭疫里氏杆菌诊断及疫苗研制中具有重要的应用价值。     

病案分析专栏

上期答案:上期介绍的鸭子病是鸭疫里氏杆菌病诊断:本病在临床上要与大肠杆菌病相区别,因为后者也会导致鸭的咳嗽、软脚、拉稀等症状及心包炎,肝周炎、气囊炎等病变,但鸭疫里氏杆菌病会出现一些运动失调症状,除此之外最关键的是要靠化验室的显微镜检查,在油镜下鸭疫里氏杆菌是呈两极深染的小杆菌。同时在培养基上鸭疫里氏杆菌的菌落为透明的小菌落。治疗:在治疗上,鸭疫里氏杆菌病与大肠杆菌病的治疗方案也不尽相同,据大量的药敏结果表明:先锋霉素、青霉素、强力霉素、林可霉素、氯霉素等对鸭疫里氏杆菌病效果较好;而丁胺卡那,恩诺沙星、环丙…