褪黑素对大鼠纤维化TGF-β1/Smads信号通路干预研究

褪黑素是一种主要由松果体分泌的多效性神经激素,具有多种生物学功能,包括抗氧化应激、抗炎、抗凋亡和抗肿瘤特性,以及调节昼夜节律。为探寻临床治疗肾间质纤维化的新途径,本试验观察褪黑素对单侧输尿管梗阻(UUO)构建大鼠肾纤维化模型TGF-β_1/Smads信号通路影响,探讨其干预对肾纤维化机制,SD大鼠随机分为假手术(Sham)组、UUO模型(UUO)组、UUO+5mg·kg~(-1)褪黑素组、UUO+10mg·kg~(-1)褪黑素组、UUO+15mg·kg~(-1)褪黑素组,每组6只。均于手术当天晚上灌胃给药,每24h1次。14d处死大鼠,取血清检测血肌酐、尿素氮,肾组织进行Masson染色,观察病理结果,实时定量PCR检测肾组织TGF-β_1、Smad3、Smad7和Collagen Type I mRNA表达。结果表明:褪黑素减轻肾组织纤维化病理损伤,使肾组织TGF-β_1、Smad3、Collagen Type I mRNA表达降低,Smad7mRNA表达升高(P0.05,部分P0.01),以15mg·kg~(-1)改善效果最佳。褪黑素可呈剂量相关性下调TGF-β_1、Smad3、Collagen Type I及上调Smad7来抑制TGF-β_1/Smads信号通路,从而发挥肾间质纤维化作用。     

芪蚣抗纤方及拆方干预大鼠免疫损伤性肝纤维化的实验研究

目的观察芪蚣抗纤方(QF)及拆方对大鼠免疫损伤性肝纤维化的影响。方法 50只SD雄性大鼠随机分为正常对照组、模型组、QF全方干预组、软坚散结药干预组、活血药干预组,猪血清攻击法诱导免疫损伤性肝纤维化大鼠模型,实验过程8周。免疫组化法检测肝组织转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)相关表达;免疫组织化学染色检测肝纤维化大鼠TGF-β1和Smad2、Smad3阳性表达。结果药物干预后,治疗组TGF-β1含量明显下降,Smad2、Smad3表达减少,全方比拆方效果明显。结论芪蚣抗纤方及拆方对TGF-βl和Smads家族蛋白有显著调节作用,可干预大鼠肝纤维化形成,全方比拆方效果更明显。预防和治疗肝纤维化除了运用常法活血药与软坚药,益气健脾必不可少。     

尿毒清颗粒抑制大鼠肾脏间质纤维化作用靶点研究

目的 研究尿毒清抑制大鼠肾脏间质纤维化的作用。方法 采用单侧输尿管结扎术制备肾间质纤维化大鼠模型,将10周龄SPF级雄性大鼠60只,随机分3组：假手术（Sham,n=20）、模型组（UUO,n=20）和尿毒清治疗组（UNQ,n=20）;UNQ组于于术前1天给予尿毒清2 g/（kg·d）灌胃,假手术组及模型组每天灌胃等量生理盐水,各组分别于术后第3、7、14天处死5只大鼠,取梗阻侧肾脏进行组织学检查,对肾间质细胞浸润、肾小管萎缩和肾间质纤维化情况进行半定量评分;采用免疫组化、ELISA和Western Blot分别分析肾组织中转化生长因子β1（TGF-β1）、纤粘连蛋白（FN）表达。结果 与Sham相比,UUO大鼠各时间点的病理损害进行性加重,肾小管间质中TGF-β1、FN表达均增高（P<0.05）。与UUO相比,尿毒清治疗后3 d,可观察到大鼠的肾间质炎性细胞浸润、肾小管萎缩及肾间质纤维化（P<0.05）明显减轻,同时肾组织中TGF-β1表达减少（P<0.05）;治疗后7 d,上述治疗作用持续存在,同时进一步使UUO大鼠肾间质的FN表达下降（P<0.05）;治疗14 d后,肾间质细胞浸润情况评分（CIS）和慢性病变（包括肾小管萎缩和间质纤维化）评分（AFS）较UUO组分别下降22.2%和19.1%（P<0.05）,TGF-β1、FN的表达则较UUO组分别减轻30.8%和30%（P<0.05）。结论 尿毒清的保护作用表现在肾损伤的开始就通过减少TGF-β1表达从而使肾间质炎症细胞浸润受到抑制,同时还能减少病变肾组织细胞外基质的积聚,从而减轻肾间质纤维化。     

生三七对肝纤维化小鼠血液流变学的影响

目的观察生三七对肝纤维化小鼠血液流变学的影响.方法复制小鼠中毒性肝纤维化模型,生三七粉灌胃6周,检测全血粘度、血浆粘度、红细胞压积等血液流变学参数,并行肝脏病理组织切片检测.结果与空白对照组比较,肝纤维化模型组小鼠全血粘度、血浆粘度、红细胞压积明显增高(P＜0.05,P＜0.01),生三七治疗后小鼠全血粘度、血浆粘度、红细胞压积明显降低(P＜0.05,P＜0.01);肝脏病理组织切片显示使用生三七后,肝纤维化程度有明显改善.结论生三七可降低血液粘度,延缓肝纤维化的发展.     

α-SMA与TGF-β1在大鼠肝纤维化中的表达及相互关系

为明确α-SMA和TGF-β1在肝脏纤维化过程中的作用和相互关系,研究首先利用CCl4腹腔注射的方法建立肝脏纤维化大鼠模型,通过组织学、免疫组织化学及蛋白组学方法检测肝脏纤维化过程中病理组织结构变化、α-SMA和TGF-β1的表达情况。结果显示肝脏纤维化模型造模成功,肝脏组织呈现明显纤维化病变特征,α-SMA和TGF-β1的表达呈阳性,且与肝脏纤维化程度呈正相关。α-SMA和TGF-β1是肝脏纤维化过程中的重要细胞因子,能够促进肝脏纤维化的形成,并可能协同参与。     

二氢杨梅素对肝纤维化小鼠肝功能的影响

试验旨在研究二氢杨梅素对肝纤维化小鼠肝功能的影响。试验选取小白鼠54只,随机分成空白组、模型组、扶正化瘀胶囊阳性对照组,二氢杨梅素低剂量组、二氢杨梅素中剂量组、二氢杨梅素高剂量组,测试不同剂量二氢杨梅素对肝纤维化小鼠肝功能的影响。结果表明:二氢杨梅素能缓解四氯化碳导致的肝损伤,低剂量二氢杨梅素对于ALT较佳,高剂量二氢杨梅素对于AST较佳;二氢杨梅素能够在一定程度缓解肝细胞纤维化,但是并不能完全防止肝纤维化。二氢杨梅素可以调节肝功能,能明细降低ALT、AST的水平,有显著的保肝护肝功效,同时,二氢杨梅素对于肝纤维化有一定的疗效。     

抗纤灵Ⅰ方对小鼠血吸虫病肝纤维化的干预及机制探讨

目的 观察抗纤灵Ⅰ方对小鼠血吸虫病肝纤维化的干预效果,探讨抗纤灵Ⅰ方干预血吸虫肝纤维化的可能分子机制,为抗纤灵Ⅰ方的临床应用提供实验依据。方法 采用日本血吸虫尾蚴经皮肤贴片感染昆明小鼠,建立血吸虫病早期肝纤维化动物模型,将建模成功的小鼠用吡喹酮药物连续杀虫治疗后分为抗纤灵Ⅰ方低、中、高剂量组,抗纤灵Ⅰ方的丹参加味方低、中、高剂量组,秋水仙素治疗对照组,蒸馏水灌胃对照组和未做任何处理的模型对照9组。以未感染血吸虫的正常小鼠为肝纤维化阴性对照组。各实验组连续灌胃治疗8周,收集各组小鼠肝脏,HE染色观察肝纤维化病理改变,测量肝组织虫卵肉芽肿平均面积;免疫组化染色方法检测肝组织内胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ、MMP-1蛋白酶以及TIMP-1蛋白的表达,比较各组间的蛋白表达差异。结果 HE染色显示,与模型组和正常对照组相比抗纤灵Ⅰ方及其丹参加味方高剂量组可显著减少肝组织虫卵肉芽肿面积（P<0.05）;免疫组化染色结果显示,与模型组比较,抗纤灵Ⅰ方及其丹参加味方中、高剂量组干预后小鼠肝组织内的胶原Ⅰ、Ⅲ蛋白以及TIMP-1蛋白表达显著减少（P<0.05）、MMP-1蛋白酶表达显著增加（P<0.05）,但抗纤灵Ⅰ方与丹参加味方之间差异无统计学意义（P>0.05）。结论 抗纤灵Ⅰ方及其丹参加味方对小鼠血吸虫病肝纤维化具有较好的干预效果,但两者在疗效上差异无统计学意义,丹参未能增强抗纤灵Ⅰ方的干预肝纤维化效果;抗纤灵Ⅰ方的干预机制可能是通过抑制肝组织内胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ和TIMP-1蛋白的表达,增加MMP-1蛋白酶的表达来发挥作用。     

利用Balb/c 小鼠构建家蚕蛹食物过敏模型的研究

利用Balb/c小鼠构建家蚕蛹过敏模型并研究其致敏作用。48只雌性Balb/c小鼠分别用灌胃和皮下注射家蚕蛹蛋白的方法进行致敏。小鼠致敏后通过尾静脉注射伊文斯蓝考察其对血管通透性的影响;光镜和扫描电镜下观察致敏小鼠空肠组织的病理切片;测定血清中IgE、组胺、IFN-γ、IL-4和IL-6等的含量;免疫印记反应测定小鼠血清特异性抗体与家蚕蛹变应原的结合度。结果表明:小鼠发生过敏反应时,血清中产生与家蚕蛹蛋白特异性结合的IgE抗体,血清中组胺、IL-4和IL-6等的含量显著上升,而IFN-γ含量显著下降,同时各致敏试验组小鼠血管通透性增加,空肠组织出现糜烂和结构受损症状。该小鼠致敏模型的成功构建对于后续研究家蚕蛹变应原及其致敏的抗原表位等均具有重要基础作用。     

硫化氢通过氧化应激及细胞因子调控小鼠肝纤维化的进程

目的 观察硫化氢(H2S)通过氧化应激及细胞因子调控四氯化碳(CC14)诱导小鼠肝纤维化的抑制作用.方法 将20只雄性昆明小鼠随机分为4组,正常对照组、肝纤维化组、低剂量NaHS组和高剂量NaHS组,每组5只.采用化学发光试剂盒检测氧化应激酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)水平;ELISA检测炎性细胞因子TNF-α、IL-1α和IFN-γ水平;全自动生化检测仪检测各组小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和甘油三酯(TG)水平;Realtime-PCR检测参与氧化应激基因的表达调控.结果 与正常对照组比较,肝纤维化组的SOD、CAT和GSH-Px水平降低,细胞因子TNF-α、IL-1α和血清中ALT、AST、TG升高(P＜0.05或0.01);与肝纤维化组比较,NaHS高、低剂量组的ALT、AST降低,SOD、CAT和GSH-Px升高,且呈剂量依赖关系(P＜0.05或0.01),TG变化则无统计学意义(P＞0.05).结论 H2S可通过降低氧化应激水平,抑制细胞因子的释放和肝纤维化,改善肝功能.     

氧化苦参碱治疗慢性乙型肝炎后肝纤维化的疗效观察

目的:观察氧化苦参碱治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的疗效。方法:43例慢性乙型肝炎随机分为治疗组22例与对照组21例,治疗组采用氧化苦参碱与常规药物联合治疗,对照组仅采用常规药物治疗。疗程24周。用酶联免疫法测定HBeAg,聚合酶链免疫护增法测定HBV-DNA,用放射免疫法测定治疗前后血清透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、IV型胶原(CIV)、III型前胶原(PCIII)水平。结果:治疗组HBeAg转阴率36.4%(8/22),HBV-DNA转阴率54.5%(12/22)。血清HA、LN、CIV及PCIII明显降低(P<0.01)。结论:氧化苦参碱有较好的抗乙型肝炎肝纤维化作用。     

甘薯糖蛋白对小鼠血脂水平的影响

为了研究甘薯糖蛋白对小鼠血脂水平的影响。先用含8.0%猪油的高脂鼠料诱导小鼠成为高脂血,再将其平均分为四组,一组用普通鼠料饲养作为对照,其他三组分别用含0.5%、1.0%及1.5%甘薯糖蛋白的鼠料饲养,在第15天和第30天对每只小鼠采血,用全自动生化分析仪测定其中的甘油三酯及血清胆固醇的浓度。结果发现用含1.0%甘薯糖蛋白的鼠料饲养15d就能明显降低高脂血模型小鼠血液中的血清总胆固醇水平,继续饲养30d能显著降低其中的甘油三酯水平;如果用含1.5%甘薯糖蛋白的鼠料饲喂,则只需15d就能同时降低两者的水平。因此甘薯糖蛋白具有显著降低高脂血模型小鼠血脂的作用。     

壳聚糖为递送载体的鸭肠炎病毒gC基因疫苗诱导Balb/c小鼠

  【目的】探讨壳聚糖对鸭肠炎病毒（duck enteritis virus, DEV）gC基因疫苗免疫反应的影响。【方法】应用壳聚糖作为DEV gC基因疫苗（pcDNA-DEV-gC）递送载体,采用肌肉注射和口服单次免疫Balb/c小鼠50µg剂量基因疫苗,并以肌注不同剂量裸质粒组、弱毒组和生理盐水组作为对照,分别检测不同疫苗免疫后的细胞、体液和黏膜免疫水平。【结果】肌注壳聚糖疫苗组诱导小鼠产生较肌注裸质粒50µg组和口服壳聚糖疫苗组高的细胞和体液免疫反应,且产生与弱毒疫苗相似的细胞免疫应答,但弱毒疫苗诱导体液免疫的能力更强,仅口服壳聚糖疫苗组产生粘膜免疫。【结论】上述研究结果表明壳聚糖具有一定的佐剂效应,为获得更有效的DEV gC基因疫苗提供了新策略,但该疫苗的推广应用还有待于对影响疫苗免疫效果的各因素进行进一步优化。     

龙眼果肉水溶性提取物对正常小鼠免疫调节作用的影响

目的从体液免疫、细胞免疫和NK细胞活性等不同角度研究龙眼水溶性提取物对正常小鼠免疫调节作用的影响。方法以120只雄性昆明种小鼠为研究对象,按体重随机分5组,阴性对照组、龙眼水溶性提取物低、高剂量组(130mg·d-1、380mg·d-1)和龙眼果肉低、高剂量组(150mg·d-1、450mg·d-1),每组24只,连续35d。测定淋巴器官相对质量、脾淋巴细胞转化值、血清溶血素值、NK细胞活性和脾脏抗体生成细胞数等免疫学指标以及血清丙二醛水平、总抗氧化能力、谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶活力等抗氧化指标。结果与阴性对照组比较,龙眼水溶性提取物低、高剂量组血清溶血素值和脾淋巴细胞转化值显著升高(P0.05),而龙眼果肉各剂量组效果均不显著(P0.05);高剂量龙眼水溶性提取物NK细胞活性显著增强(P0.05),但龙眼果肉剂量组无显著效果(P0.05)。龙眼果肉高剂量组血清丙二醛水平显著降低(P0.05),龙眼水溶性提取物各剂量组则差异不显著(P0.05);龙眼果肉高剂量组和龙眼水溶性提取物高剂量组血清总抗氧化能力分别极显著(P0.01)和显著(P0.05)提高。结论一定剂量的龙眼水溶性提取物能显著提高正常小鼠的体液免疫和细胞免疫能力及抗氧化活性,但抗氧化活性非其免疫调节作用的主要机制。     

日粮核苷酸对早期断奶小鼠肝脏基因表达的影响

研究了日粮核苷酸对早期断奶小鼠肝脏基因表达的影响:选取16～17日龄健康BALB/C雄性小鼠60只,分成对照组和实验组,分别饲喂添加0、0.25%核苷酸的无核苷酸基础日粮,在实验的第2、4、10天采用差异显示技术分离小鼠肝脏中差异表达的基因。结果表明:采用6对引物分离到4条差异表达的基因片断。采用差异显示技术初步分离到4个受核苷酸影响差异表达的基因,这些片段需要做进一步的验证。     

竹叶提取物对小鼠运动能力的影响

旨在研究竹叶提取物对小鼠运动能力的影响。选取8周龄健康雄性小鼠45只随机分为阴性对照组、模型组和试验组,检测骨骼肌和心肌组织中丙二醛(MDA)的质量摩尔浓度,并测定超氧化物岐化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性。结果表明,试验组小鼠游泳至力竭的时间显著大于模型组。与阴性对照组相比,运动训练后,模型组小鼠骨骼肌和心肌组织中的MDA质量摩尔浓度上升,试验组下降;模型组小鼠骨骼肌和心肌组织中的CAT活性下降,试验组升高;试验组和模型组的SOD活性升高。说明竹叶提取物具有改善运动能力和抗氧化的功能。     

牛骨胶原蛋白肽的表征及其对Balb/c小鼠的抗疲劳作用

为了开发牛骨胶原蛋白肽(BBP)的抗疲劳功能,对BBP的氨基酸组成和肽段序列进行表征;选取16只7周龄、SPF级的Balb/c小鼠并随机分为2组,包括对照组(生理盐水)和肽干预组(w(BBP)=200 mg/kg)),每日定时灌胃。BBP干预4周后,测定小鼠的负重游泳时间和运动后血清代谢积累物含量。BBP干预18周后,测定血清氧化因子、炎症因子含量和肠道菌群组成。结果表明：1)BBP疏水性氨基酸比例为61.37%,大部分肽段来源于蛋白P02453(I型胶原蛋白的α1链)。2)BBP干预后小鼠负重游泳时间显著提高,且运动后血氨浓度显著降低、谷胱甘肽浓度显著升高(P<0.05),表明了BBP潜在的抗疲劳能力。3)BBP干预后,在非运动状态下小鼠血清SOD和GSH-Px显著升高,MDA浓度显著降低(P<0.05),表明了BBP潜在的抗氧化能力;在免疫方面,BBP干预后小鼠血清抗炎因子IL-10和促炎因子IL-6、TNF-α浓度均显著下降(P<0.05),主要的免疫器官胸腺指数显著下降(P<0.01),脾指数显著上升(P<0.05);在粪便中,潜在的有益菌Akke...     

发酵中草药对免疫功能低下小鼠的保护作用研究

试验旨在研究发酵中草药对环磷酰胺(CTX)致免疫低下小鼠的保护作用。将20±2 g昆明小鼠100只随机分为5组,每组20只,雌雄各两个重复,每个重复5只,各重复小白鼠分笼饲喂基础饲粮。正常组和模型组自来水灌胃,发酵中草药组中草药水溶液灌胃,灌胃浓度分别为100、200和400 mg·kg-1,灌胃剂量0.1 mL·10 g-1体重,1次·d-1,连续20 d。在灌胃的第5天开始,除正常组外,模型组和发酵中草药组均腹腔注射CTX 40 mg·kg-1,1次·d-1,连续5 d。检测各组老鼠免疫器官指数、血清生化指标及碳粒廓清法检测单核-吞噬细胞吞噬功能。结果表明,与模型组相比,发酵中草药高、中、低剂量(400、200和100 mg·kg-1)均能够极显著提高免疫功能低下小鼠的胸腺指数(P0.01),显著增加其脾脏指数和单核吞噬细胞的廓清指数和吞噬指数(P0.05),同时显著降低血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和尿素氮(BUN)含量(P0.05)。表明发酵中草药对CTX致免疫功能低下小鼠具有保护作用。     

中兽药复方“痢克”对小鼠实验性腹泻及兔肠蠕动影响的研究

[目的]研究中兽药复方“痢克”对试验性小鼠腹泻的治疗作用。[方法]观察痢克对小鼠小肠墨水推进率的影响,研究蓖麻油与番泻叶引起小鼠腹泻模型的止泻作用并描记兔离体肠管蠕动波,观察药物对蠕动波的影响。[结果]结果表明,中药复方“痢克”能明显抑制小鼠小肠墨水推进长度;对蓖麻油引起的小肠腹泻能明显减少湿粪次数,对番泻叶引起的大肠性腹泻作用较弱。兔离体肠管描记显示,它能明显降低由硝酸毛果芸香碱引起的兔肠管蠕动增强。[结论]“痢克”能够抑制小鼠小肠推进和有效抑制肠蠕动,具有较好的抗腹泻作用。     

几种中草药提取物对菜青虫的干扰控制作用

研究了9种中草药乙醇提取物对菜青虫种群的干扰控制作用。结果表明,9种中草药提取物对菜青虫成虫产卵都有较好的忌避作用,但对卵和低龄幼虫的毒杀作用不明显。其中百部、贯众、槟榔对菜青虫种群的干扰控制作用较好,干扰作用控制指数分别达到0.3180、0.3837、0.4134,即控制效果分别达到68.2%、61.63%和58.66%。