D型肉毒梭菌菌苗及诊断用血清的研究

利用在国内首次从动物体内分出的D型肉毒梭菌,研制了D型肉毒梭菌菌苗及诊断血清。结果表明:采用透析培养技术制备的D型肉毒梭菌磷酸铝苗,免疫性良好,对家兔和豚鼠的免疫保护力均为100%;制备的诊断血清每毫升可中和10000 MLD毒素,可用于肉毒梭菌菌型鉴定。     

水貂肉毒梭菌(C型)透析培养菌苗

本试验采用透析培养法生产高价毒素的菌液制成的菌苗有很强的免疫原性。试验结果表明:取8801批原苗10倍稀释,用1ml给水貂皮下注射,21天后攻毒,结果能抗2000个水貂致死量毒素的攻击;口服可抗10个致死量攻击。8805批原苗10倍稀释后,以1ml剂量免疫水貂,4个月攻毒,能抗1万个水貂致死量毒素的攻击;口服抗100个致死量毒素的攻击。注苗水貂均未发生过肉毒中毒。     

多联厌气菌干粉菌苗的研究 Ⅱ各种梭菌干粉菌苗制造及其免疫剂量试验

研制了快疫、羔羊痢疾,猝狙、肠毒血症、黑疫、肉毒中毒、破伤风和气肿疽等八种干粉菌苗。前七种菌苗对家兔的免疫剂量分别为:3～5mg,2mg,1～2mg,0.1mg,0.5mg,0.25mg,和0.1mg。对绵羊的免疫剂量分别为:4～8mg,1mg,2mg,2mg,≤10mg,20mg,≤10mg。气肿疽菌苗对海猪的免疫剂量为7.5mg。对于前七种菌苗,每毫升培养基可分别制造2.68～1.31,24.1,5.7,13.1,≥2.84,1.51,和≥1.43头剂(绵羊)。四只免疫绵羊血清等量混合,0.1ml分别中和腐败梭菌毒素1MLD以上;魏氏梭菌B型毒素2MLD以上;C型毒素1MLD以上:D型毒素2MLD以上;诺维氏梭菌毒素200MLD;肉毒梭菌毒素1MLD;破伤风梭菌毒素1,000MLD,各该菌苗即可达到有效标准。     

肉毒梭菌毒力以其毒素灭活疫苗的效力试验

肉毒梭菌毒素毒力强,可以作为灭鼠的药物,现将肉毒梭菌C株菌液上清适当稀释,进行小鼠毒力试验。结果表明,肉毒梭菌C株菌液上清对小鼠的最小致死量为5.0×10~4MLD/ml,可以作为草原、牧场、其他养殖场灭鼠的参考依据。将毒素灭活制备疫苗,进行免疫小鼠,对小鼠具有保护力,可以抵抗致死量毒素的攻击。     

肉毒梭菌C型菌苗对水貂人工免疫试验报告

<正> 水貂肉毒梭菌病(Botulismus)又称肉毒梭菌毒素中毒,对养貂业危害很大。我们采用内蒙古兽医生物药品制造厂生产的供牛、羊、骆驼用的肉毒梭菌C型菌苗(以下简称菌苗),于1980—1982年对水貂进行了人工免疫试验。在此期间,曾发表了我们的“肉毒梭菌C型菌苗对水貂人工免疫的安全性和效力试验”及“肉毒梭菌C型菌苗对水貂产生免疫力的时间及免疫期的初步试验”报告。截止1982年12月,试验全部结束。为了便于读者掌握这方面的材料,本文将全部试验内容作以系统报告。     

D型肉毒梭菌毒素海猪家兔免疫试验和高免血清效价测定试验

先用D型肉毒梭菌菌苗对海猪、家兔进行基础免疫,再用不同致死量的D型肉毒梭菌毒素加强免疫3次.采用血清中和试验,测得海猪对毒素的耐受性为40万MLD/ml(小白鼠静注),家兔对毒素的耐受性为100万MLD/ml(小白鼠静注);两种动物每ml抗血清均能中和1万MLD/ml(小白鼠静注)毒素.     

肉毒中毒(C型)的诊断与菌苗研究——Ⅱ、菌苗研究

本文报告了用鱼肉胃酶消化汤为主要成份的培养基制成C型肉毒梭菌明矾菌苗。以4毫升的剂量给绵羊皮下注射,一个月以后能抵抗10个最小致死量的毒素攻击。菌苗保存期二年以上,免疫期为一年,在发病地区使用以后,获得良好的预防效果。     

一起狐狸C型肉毒毒素中毒的诊治

肉毒毒素是由厌氧的肉毒梭菌在生长繁殖过程中产生的一种细菌外毒素,能引起动物发生肉毒中毒。根据毒素抗原性的不同,可将肉毒梭菌及其毒素分为A、B、C、D、E、F和G型7个型。其中A、B、E及F型为人的中毒型别,C和D型为动物的中毒型别。C型肉毒梭菌在自然界广泛分布,饮食被C型肉毒梭菌特别是C型肉毒毒素污染的水或草料的动物有可能发生C型肉毒中毒。     

C、D型二价产气荚膜梭菌抗毒素血清的制备及保护效果评价

为治疗产气荚膜梭菌感染引起的疾病,研究制备了产气荚膜梭菌多价高效抗毒素血清。试验采用C、D型产气荚膜梭菌标准菌株,制备了高浓度外毒素和灭活疫苗,作为免疫原多次免疫绵羊,通过间接ELISA法监测绵羊抗体水平变化,采用小鼠中和试验检验绵羊抗毒素血清保护效果。结果表明:制备的高效价抗C、D型产气荚膜梭菌毒素血清每0.1 m L血清能中和400个C型毒素对小鼠的MLD和600个D型毒素MLD,有良好的应用前景。     

一起犬肉毒梭菌毒素中毒的调查分析和启示

肉毒梭菌毒素中毒是细菌性毒素型食肉中毒之一。肉毒梭菌是一种腐败寄生菌，在自然界分布很广。肉毒梭菌在适宜的条件下，形成外毒素（肉毒毒素），它的毒力是现今已知的化学毒物以及细菌毒素中毒性量强烈的一种。口服0．0001mg就可毙命，其毒力比氰化物还要大一万倍。     

重组C型肉毒梭菌毒素的表达与免疫保护性分析

本研究旨在获得重组C型肉毒梭菌毒素蛋白,并评价其免疫保护性。将麦芽糖蛋白（MBP）和C型肉毒梭菌毒素重链C末端（CH_C）的编码基因序列进行优化和串联,获得基因片段GMBPCH_C。将GMBPCH_C克隆至pET28a-（＋）后转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,分别在15和37℃两种温度条件下诱导表达。利用Ni-IDA亲和层析方法对可溶性表达的目的蛋白进行纯化,从而获得重组蛋白rMBPCH_C。将rMBPCH_C与Montanide ISA 201佐剂混合制备成疫苗,免疫4只家兔,剂量为100 μg/只。根据《中华人民共和国兽药典》（2015年版）规定的方法检测一免后21 d及二免后14 d家兔血清的中和抗体效价。同时,在二免后14 d对家兔进行攻毒。结果表明,rMBPCH_C在37℃的诱导温度下,主要以包涵体的形式表达;在15℃的诱导温度下,可溶性表达的比例可达50%。一次免疫后,免疫组4只家兔血清对C型肉毒梭菌天然毒素（简称天然毒素）的中和效价均可达到1（0.1 mL血清中和1个小鼠最小致死量（MLD）的天然毒素）。二免后,家兔血清的中和抗体效价可达到4~8。用10个家兔MLD的天然毒素攻毒后,免疫组家兔得到了100%（4/4）的保护,而用1个家兔MLD的天然毒素攻毒后,对照组家兔100%（2/2）死亡。以上结果说明,rMBPCH_C具有良好的免疫原性,从而为C型肉毒梭菌病基因工程亚单位疫苗的研制提供了重要的试验数据。     

重组腐败梭菌α毒素替代羊三联四防苗中腐败梭菌组分的免疫效果评价

为了评价重组腐败梭菌α毒素在联苗中的免疫效果,试验用不同含量的重组腐败梭菌α毒素替代羊三联四防苗中腐败梭菌组分制备联苗,分别免疫兔和绵羊,在免疫后的第10,14,21天分别测定血清中和效价,免疫后第25天用1个最小致死量(MLD)的腐败梭菌毒素对免疫兔和绵羊分别进行攻毒,以期得到能使动物获得足够保护的抗原含量。结果表明:对于兔和绵羊联苗中重组腐败梭菌α毒素蛋白最小免疫剂量分别为0. 3 mg、0. 25 mg时,在免疫后第14天腐败梭菌毒素血清中和效价均能达到1;免疫后第25天进行攻毒保护试验,免疫兔和绵羊攻毒保护率分别为100%、75%。说明重组腐败梭菌α毒素可以替代羊三联四防苗中腐败梭菌组分用来进行免疫。     

C型肉毒梭菌毒素饵料剂防治高原鼠兔试验

旨在评价C型肉毒梭菌毒素饵料剂对高原鼠兔的防治效果。在青海省共和县开展不同投饵量(1.0、2.0、3.0 g/洞)的C型肉毒梭菌毒素饵料剂对高原鼠兔的防治效果研究;观察人工饲养条件下高原鼠兔对C型肉毒梭菌毒素饵料剂的适口性;探讨常温条件下不同保存期(10、20、30 d)对C型肉毒梭菌毒素饵料剂药效的影响。结果表明:C型肉毒梭菌毒素饵料剂投饵量为3.0 g/洞时校正防治效果最佳,为93.22%,其防治效果优于标准药剂;高原鼠兔对C型肉毒梭菌毒素饵料剂的摄食系数为1.51,优于对小麦基饵的适口性;C型肉毒梭菌毒素饵料剂的药效随保存时间的延长而不断降低。综上提示,C型肉毒梭菌毒素饵料剂对高原鼠兔的防治效果良好,且具有较好的适口性,在该地区的草原鼠害防治工作中具有一定的推广应用价值。     

肉毒中毒(C型)的诊断与菌苗研究——Ⅰ.病源诊断

本文报告了青海省发生的牛羊肉毒中毒症,其症状主要是吞咽困难,流涎和全身肌肉瘫痪。死亡率80％以上,造成较大的经济损失。从尸体胃肠内容物及其他器官中分离出8株肉毒梭菌。该菌在加有无菌新鲜生肝块或生肉块的肉肝胃酶消化汤中生长良好,并产生毒素,每毫升培养物含10万个海猪最小致死量。8株细菌的毒素均能被C型肉毒梭菌抗毒素中和。把毒素给绵羊口服或静脉注射其症状与自然发病者相同,故证明是C型肉毒梭菌引起的中毒症。     

G型产气荚膜梭菌类毒素疫苗的制备及其免疫保护效果的评价

为研制G型产气荚膜梭菌类毒素疫苗,本研究将G型产气荚膜梭菌菌株(7a9-2、D3-2)增菌培养后接种产毒培养基高效产毒,除菌后获得外毒素,经粗提后进行SDS-PAGE检测。结果显示：制备的G型产气荚膜梭菌外毒素含有α、NetB两种毒素蛋白。将两株G型菌株所产外毒素经2倍倍比稀释后经腹腔注射小鼠,检测外毒素的致病性,结果显示7a9-2菌株所产外毒素毒力较强,可作为疫苗候选株。因此选择7a9-2菌株制备外毒素,并经甲醛灭活后制备G型产气荚膜梭菌类毒素疫苗,经检验合格后免疫三黄鸡。免疫后5周内,每周随机选取10只鸡采血分离血清,采用ELISA方法检测鸡血清中的抗体效价。结果显示,免疫组鸡血清稀释100倍后,一免组鸡的抗体效价最高可达6.83log2,二免组鸡抗体效价最高可达8.34log2,免疫后鸡体内可产生较高水平的抗G型产气荚膜梭菌的抗体。免疫后实验鸡通过口服鸡球虫卵囊和G型产气荚膜梭菌菌液进行攻毒试验,结果显示,攻毒后免疫组鸡肠道病变程度和发病率均显著低于对照组(P<0.05)。在整个实验过程中观察各组鸡的生长情况,计算鸡平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)、料重比(F...     

水貂犬瘟热,病毒性肠炎和肉毒梭菌中毒三联疫苗的研究

用FPV弱毒、CDV弱毒和肉毒梭菌C型疫苗研制成功了水貂三联疫苗。该苗安全可靠、免疫原性强、免疫期达6个月以上,同各单苗相比抗体产生期及效价相近,室温可保存3天;4℃可保存2周;-20℃可保存6个月。该苗的免疫剂量为2ml,其中CDV和FPV弱毒滴度分别为10~(3.0),肉菌梭菌C型疫苗为2mg/ml。现场应用26000余只水貂,抗体阳转率达90％以上。     

腐败梭菌类毒素抗原含量与免疫效果之间的关系试验

为了确定腐败梭菌类毒素抗原含量与免疫效果之间的关系,将不同剂量的类毒素分别接种家兔和绵羊,免疫17日后测定血清中和效价,并用1MLD的毒素进行攻毒。测毒结果表明,1个家兔MLD的毒素含量为小鼠MLD的30倍,1个绵羊MLD的毒素含量为小鼠MLD的600倍。血清中和试验和免疫攻毒保护结果表明,类毒素含量与免疫效果在一定的范围内呈正相关,在家兔和绵羊上能提供保护的最小免疫剂量分别为100个小鼠MLD和300个小鼠MLD的类毒素。本试验结果为腐败梭菌疫苗的研制提供了重要的参考数据。     

肉毒梭菌C型菌苗对水貂人工免疫的安全性和效力试验

<正> 肉毒中毒(Botuisnus)即肉毒梭菌病。该病由肉毒梭菌的外毒素所引起,一旦暴发,动物大量倒毙,损失极为严重。根据肉毒梭菌所产生毒素的不同,可分为A、B、C、D、E、F六个型。在我国,牛、羊的肉毒梭菌中毒症由C型引起。水貂对C型毒素极为敏感,食入含有C型毒素的饲料,一般经10—96小时发病,可造成大批死亡。例如:1971年黑龙江省某养貂场发生肉毒中毒,在2—3天内死亡水貂4000余只;1980年内蒙某养貂场发生肉毒中毒,3天内死亡水貂近2000只。国外曾有过因肉毒中毒使全场水貂死亡的记载。     

肉毒梭菌C型菌苗对水貂产生免疫力的时间及免疫期的初步试验

<正> 近年来,水貂肉毒梭菌毒素中毒(又称肉毒梭菌病)不断发生。由于肉毒梭菌(B.botulinus)广泛分布于自然界,在饲料卫生条件不能保证,又缺乏冷藏的情况下,则很难避免发病。该病的特点是潜伏期短,病程急(一般经几小时至2—3天),死亡率高,难以抢救。因此,采用人工免疫来预防本病是最理想的方法。关于肉毒梭菌C型菌苗对水貂人工免疫的安全性和效力的试验结果,已在本刊1981年第二期中报道。1981年11月底,我们利用取皮的时机观察了水貂注射菌苗后产生免疫力的时间,并测定了注射菌苗后142     

D型肉毒梭菌毒素杀灭高原鼠兔试验

<正> 肉毒毒素是肉毒梭菌在生长繁殖过程中产生的一种细菌外毒素。根据毒素抗原的不同,将其分为A、B、C、D、E、F、G 7个型。D型肉毒梭菌在我国比较少见,对其应用方面的研究尚未见报告。 为测试D型肉毒梭菌毒素对高原鼠兔的杀灭效果,