干酪乳杆菌对细菌性肠炎NF-κB通路及其介导的炎性介质的影响

为分析干酪乳杆菌(L.casei)对产肠毒素大肠杆菌(ETEC)K88引起的细菌性肠炎NF-kB信号通路及炎性介质的影响,本研究将90只BALB/c小鼠随机分成肠炎组(ETEC K88灌胃)、干预组(ETEC K88+L.casei灌胃)及对照组。对临床症状进行观察,利用荧光定量PCR方法检测肠系膜淋巴结中NF-κB、IL-1β及TNF-αm RNA水平,western blot方法检测肠系膜淋巴结中NF-κB蛋白表达量,ELISA方法检测外周血NO、PGE2含量。结果显示:肠炎组NF-κB、IL-1β、TNF-α mRNA表达水平、NF-κB蛋白表达量及NO、PGE2含量较高,与对照组相比差异显著(p0.05)。经L.casei干预后,人工感染ETEC的小鼠临床症状好转,NF-κB、IL-1β、TNF-αm RNA表达水平、NF-κB蛋白表达量及NO、PGE2含量均显著下降(p0.05)。表明L.casei可以通过抑制NF-κB的活化,降低IL-1β、TNF-α mRNA的表达,减少NO、PGE2的分泌,抑制肠道炎症的进一步发生。为L.casei的抑菌机制的深入研究奠定了基础。     

新型凝集技术快速检测产肠毒素性大肠杆菌菌毛的研究

为建立以彩色二氧化硅微球(CSN)为载体,快速检测产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)菌毛K88ab、K99、987p和F41的新型凝集技术,本研究采用反相微乳液法制备二氧化硅微球,将其与菌毛单因子血清偶联制成免疫彩色二氧化硅微球(ICSN),通过优化反应条件建立了快速检测ETEC菌毛的方法。特异性试验结果显示,ICSN只与携带其对应菌毛的菌株发生反应,与携带其它菌毛的菌株无交叉反应;敏感性试验结果显示菌液的最小检出浓度为1.0×10~6cfu/m L~5.1×10~6cfu/m L;稳定性试验显示4℃保存30 d,ICSN特异性、敏感性无明显变化;双盲样品检测准确率为100%。本研究有助于ETEC菌毛的快速检测和幼畜大肠杆菌性腹泻的诊断。     

芬氏纤维微菌对雏鸭盲肠微生物的影响

为研究芬氏纤维微菌(Cellulosimicrobium funkei)对雏鸭盲肠微生物菌群的影响以及该菌对AFB_1暴露雏鸭盲肠微生物菌群的影响。选取100只健康、体重相近的1日龄樱桃谷肉鸭,随机分为5个组,每组4个重复,每个重复5只雏鸭。每组均饲喂标准日粮,对照组经口灌服1 ml无菌LB培养基,每天灌胃1次,连续灌胃14 d;试验组1灌服1 ml C.funkei菌液(1×108cfu/ml),每天灌胃1次;试验组2灌服1 ml C.funkei菌液(1×10~(10)cfu/ml),每天灌胃1次,连续灌胃7 d,第8 d停止灌服菌液,只灌服1 ml无菌LB培养基;试验组3按照0.1 mg/(kg·BW)的量灌服AFB_1溶液+1 ml无菌LB培养基,每天灌胃1次;试验组4按照0.1 mg/(kg·BW)的量灌服AFB_1溶液+1 ml C.funkei菌液(1×108cfu/ml),每天灌胃1次,连续灌胃14 d。预饲期3 d,试验期14 d。结果表明,给雏鸭灌服低剂量C.funkei菌液可有效降低雏鸭盲肠内容物中大肠杆菌的数量,对乳酸菌和双歧杆菌数量无影响,灌服高剂量C.funkei菌液使雏鸭盲肠内容物中总需氧菌和总厌氧菌数量显著升高。灌服AFB_1的雏鸭盲肠内容物中大肠杆菌的数量显著升高,乳酸菌数量显著降低,而对AFB_1暴露雏鸭灌服芬式纤维微菌,可显著降低大肠杆菌和总需氧菌的数量,在一定程度上改善了盲肠微生物区系。     

大肠杆菌诱发腹泻对断奶荣昌猪炎症因子的影响

为了解产肠毒素大肠杆菌K88所致肠炎对炎症反应的影响,检测了荣昌仔猪K88肠炎模型的炎症因子水平。每头仔猪经口灌服K88菌液1mL(0.1g/mL),1次/d,直至出现腹泻。在腹泻第5d时前腔静脉穿刺采血,检测血清中细胞因子IL-1β、IL-4和TNF-α的水平。结果显示,腹泻组外周血液中的IL-1β、IL-4和TNF-α水平均比健康组有所升高,且TNF-α水平差异极显著(P0.01)。     

正交法筛选治疗奶牛乳房炎蒙药复方中最佳抗炎免疫成分复方的研究

为了筛选治疗奶牛乳房炎蒙药复方"特润舒都乐"中最佳的抗炎免疫成分复方,试验测定了奶牛乳房炎主要致病菌大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和链球菌的单菌最低致死浓度(MLD)及混合菌液80%MLD;并以80%MLD的混合菌液感染小鼠,给小鼠灌服正交试验设计所得蒙药复方中的抗炎免疫成分复方,测定其在体内的抑菌效果。结果表明:混合菌液的80%MLD(腹腔注射0.1 mL/只)为大肠杆菌1.0×108cfu/mL、金黄色葡萄球菌1.0×108cfu/mL和链球菌0.5×109cfu/mL;最佳蒙药抗炎免疫成分复方为A2B2C3D1E2F1G3,即A、B和E采用中剂量,C采用高剂量,D、F和G不用药。     

金黄色葡萄球菌诱导小鼠乳腺纤维化模型TGF-β1的表达

为探究金黄色葡萄球菌(S.aureus)引起乳腺纤维化的致病分子机制,本研究以不同剂量(10~4 cfu/m L、10~6cfu/m L、10~8cfu/m L、10~(10)cfu/m L)的S.aureus感染哺乳期BALB/c小鼠乳腺组织,观察小鼠临床症状和病理组织学变化,筛选建立小鼠乳腺纤维化模型的S.aureus感染剂量。感染小鼠后分别于感染后1 d、3 d、5 d、7 d、14 d、21 d采集小鼠乳腺组织,通过病理组织学观察、免疫组化染色、荧光定量PCR、western blot等方法,研究乳腺纤维化、TGF-β1的表达分布状况,检测TGF-β1的m RNA的转录和蛋白表达水平。结果显示108 cfu/m L S.aureus感染哺乳期小鼠21 d时出现乳腺组织纤维化,确定其为建立小鼠乳腺纤维化模型的感染菌剂量。10~8 cfu/m L S.aureus感染小鼠乳腺组织后,TGF-β1主要由巨噬细胞(感染后1 d、3 d、5 d)、乳腺成纤维细胞(感染后1 d、3 d、5 d、7 d、14 d、21 d)及乳腺上皮细胞(感染后7 d、14 d、21 d)表达;在感染后3 d～7 d时小鼠乳腺组织中TGF-β1的表达先升高后降低,感染后14 d、21 d时其表达再次升高,并显著高于对照组(p0.01)。本研究表明通过S.aureus感染小鼠乳腺可以建立小鼠乳腺纤维化模型,并能够促进感染后小鼠巨噬细胞、乳腺成纤维细胞、乳腺上皮细胞中TGF-β1的表达,TGF-β1在小鼠乳腺纤维化的发生发展过程中具有重要的促进作用。     

产肠毒素大肠杆菌K88黏附素蛋白亚基Fae G在L.lactis中的表达及其抗原性

在构建L.lactis表达载体pNZ8148-fae G的基础上,将该载体转化到L.lactis NZ9000中,重组菌经5 μg/Lnisin诱导3 h,SDS-PAGE结果显示,FaeG在L.lactis中表达的目的蛋白相对分子质量大小约为27 000,表达产物的量达菌体可溶性总蛋白的10.89%.Western blot分析结果表明,该目的蛋白具有良好反应原性.将重组L.lactis口服免疫BALB/c小鼠,小鼠产生特异性IgG及黏膜slgA.本试验为进一步研究仔猪口服重组L.lactis疫苗,诱导其产生抗ETEC K88黏膜免疫的同时,发挥L.lactis的益生功能,预防仔猪腹泻奠定了基础.     

益生菌与黄芪提取液联合对腹泻模型小鼠肠道功能的影响

本试验以抗生素与致病大肠杆菌来诱导肠道菌群失调性腹泻模型,考察黄芪提取液和益生菌联合应用对小鼠肠道菌群和形态结构的影响。结果表明,灌服氨苄西林钠(浓度为250 mg/m L)0.3 m L/只,处理8 h后腹腔注射大肠杆菌菌液0.3 m L(1.0×108CFU/m L),制备腹泻模型成功。联合组与益生菌组和黄芪提取液组相比,联合组腹泻显效率率为90%,抑制肠道中大肠杆菌和沙门氏菌,增殖乳酸杆菌和双歧杆菌,促进肠黏膜损伤的恢复,增加肠道绒毛长度48.94%(P0.01)和131.52%(P0.01),降低隐窝深度8.47%(P0.05)和29.70%(P0.05),促进小鼠免疫机能恢复,最终降低腹泻率。     

天鹅源丙型副伤寒沙门菌对小鼠的致病性

为了解天鹅源丙型副伤寒沙门菌的公共卫生学意义,并建立天鹅源丙型副伤寒沙门菌感染小鼠的实验动物模型。采用腹腔注射和人工灌服途径感染小鼠,了解感染鼠的LD50,观察灌服鼠于灌服后不同时段的临床症状、病理变化、血清生化指标、粪便排菌情况。结果表明,腹腔注射感染鼠的LD50为4.55×107 CFU/mL,人工灌服途径感染鼠的LD50为1.8×109 CFU/mL;用菌液浓度2×106 CFU/mL灌服感染鼠6h开始发病,6~96h精神沉郁、嗜睡、食欲减退,有腹泻、死亡;病、死鼠(12h)呈现肠黏膜坏死脱落、肠壁变薄,肠腔有多量黄色黏液状的内容物,肺脏有出血性病变,24h肝脏表面见有点状坏死;感染后36h的尿酸、72h的谷丙转氨酶、谷草转氨酶显著升高直至120h,尿素氮在72~96h明显升高,碱性磷酸酶活性在48~96h显著降低,血糖、蛋白在72~120h明显下降;2种途径感染8h后小鼠的粪便皆可检出感染菌,且粪便排菌的持续时间与感染剂量呈正相关,0.5mL/只(2×1010 CFU/mL)感染鼠直至感染后23d粪便仍有排菌,表明天鹅源丙型副伤寒沙门菌对试验小鼠有致病性,感染后经粪便长期排菌。     

两株水貂源肺炎克雷伯菌对小鼠的致病性研究

为确定临床中收集到的两株水貂源肺炎克雷伯菌Kpn-HY和Kpn-WH对小鼠的致病性,用SPF级小鼠腹腔接种不同浓度的肺炎克雷伯菌菌液,接种后观察小鼠的发病情况,对病死小鼠进行病理剖检和病理组织学研究。结果表明:两株水貂源肺炎克雷伯菌半数致死量(LD50)分别为4.00×10~5cfu/m L和1.35×10~7cfu/m L;两菌株在致小鼠病理变化方面具有相似性,主要表现为肺脏严重性出血、损伤,大量炎性细胞浸润,肝脏、肾脏出血,且均引起败血症,但在致病程度方面存在明显差异。说明肺炎克雷伯菌Kpn-HY和Kpn-WH存在明显的致病性差异。