利用小孢子培养创建大白菜-结球甘蓝易位系

为创建大白菜-结球甘蓝易位系,以大白菜-结球甘蓝3 号单体异附加系（AA + C3）为试材,进行了游离小孢子培养,利用结球甘蓝C02 连锁群相对于大白菜的特异InDel 标记对获得的小孢子植株进行鉴定,从17 个小孢子植株中筛选出1 个具有结球甘蓝特异条带的植株。通过对InDel 标记的加密设计,明确了该植株中外源甘蓝片段的大小为1.03 Mb。利用大白菜A 基因组10 个连锁群上均匀分布的100 个InDel 标记对其进行分子鉴定,初步确定了该植株中甘蓝染色体片段位于大白菜5 号染色体上。花粉母细胞减数分裂观察结果显示,该植株染色体数为20 条,为添加结球甘蓝3 号染色体片段的大白菜-结球甘蓝易位系。     

添加结球甘蓝4号染色体对不同基因型大白菜抽薹及BrFLCs基因表达的影响

在获得耐抽薹大白菜-结球甘蓝4号染色体单体异附加系AC4的基础上,以其为母本分别与不同基因型的2个耐抽薹大白菜自交系和2个易抽薹自交系杂交,利用根尖染色体计数法结合结球甘蓝4号染色体相对于大白菜的特异分子标记鉴定,对杂交后代进行筛选,在每个杂交组合后代中分别获得了2个2n = 21和2个2n = 20植株。抽薹现蕾时间鉴定结果表明每个杂交组合后代中2n = 21的植株均较2n = 20的植株抽薹现蕾时间推迟。对杂交后代及其父本植株中BrFLCs的表达进行了分析,结果表明BrFLCs基因表达量不是影响大白菜抽薹现蕾的唯一主要因素,基因组背景对抽薹现蕾时间效应大于BrFLCs基因,同时外源结球甘蓝4号染色体的添加对BrFLCs基因表达的效应受大白菜基因组背景的影响。     

三倍体狗牙根染色体数变异的分子细胞学鉴定

对三倍体狗牙根‘矮生百慕大’进行细胞学研究,结果表明,其细胞内染色体数存在非整倍性变异,变化范围为2n=27~30。进一步利用荧光原位杂交(FISH)技术以45S rDNA为探针进行鉴定,发现在三倍体狗牙根‘矮生百慕大’细胞中有3条染色体含有45S rDNA,并且都位于着丝粒部位。这3条染色体上的杂交信号强弱不一,两个染色体在45S rDNA区杂交信号较强,且易伸长呈线状结构,杂交信号较弱的一条染色体可能由于45S rDNA含量比较少,所以这一区域染色体很易在分裂中"拉长"并断裂,形成非整倍体。     

大白菜—结球甘蓝异源三倍体（ACC）基于25S rDNA的FISH分析

 应用25S rDNA-FISH对大白菜—结球甘蓝异源三倍体（ACC）中期染色体组成和减数分裂染色体行为进行了分析,并进行了花粉特性和结实性的研究。结果表明,大白菜—结球甘蓝异源三倍体染色体数为28,含有9个25S rDNA位点,其中4个来自结球甘蓝4号和7号染色体;5个来自大白菜1 ~ 5号染色体;A、C基因组间不同染色体同源程度不同,减数分裂终变期常形成单价体、二价体和三价体等不同的联会方式;中期Ⅰ和中期Ⅱ存在游离染色体;后期Ⅰ和后期Ⅱ染色体分离不均衡,并存在染色体落后或丢失;末期Ⅱ有微核产生。异源三倍体花粉整齐度和生活力远低于其二倍体亲本,自交及与亲本甘蓝（CC）回交的结籽率都极低,仅为0.01%。     

‘红江橙’天然多倍体的45S rDNA荧光原位杂交分析

 以实生筛选获得的红江橙三倍体和四倍体植株及其二倍体对照为试验材料,利用荧光原位杂交（Fluorescence In situ hybridization,FISH）技术分析了不同倍性红江橙体细胞染色体上45S rDNA的分布。结果表明,红江橙二倍体体细胞中期染色体中存在3个45S rDNA杂交位点,分别位于第1对染色体的核仁组成区和第8号染色体的整个随体上;三倍体体细胞中期染色体中存在4个杂交位点,其中有三个与二倍体基本相同,另外的一个位于第3号染色体的核仁组成区;四倍体体细胞中期染色体中存在6个杂交位点,分布的位置及区域和信号的强弱均与二倍体基本相同。供试材料体细胞间期核与中期染色体中的杂交信号数及强弱程度基本相似。通过分析,提出红江橙三倍体的形成与2n雌配子的形成有关,伴随有外源基因组的重组;四倍体可能产生于珠心系细胞的直接加倍,并且伴随有染色体的断裂和易位。     

欧洲山杨一号染色体显微分离、原位杂交分析及特异文库的构建

 以欧洲山杨( Populus tremula) 根尖细胞为材料, 采用玻璃针分离法, 通过显微操作器成功地分离出一号染色体。将分离到的单条染色体去蛋白、Sau3A酶切, 并在染色体DNA片段两端加上Sau3A人工接头, 进行两轮PCR扩增, 得到了200～3 000 bp的DNA扩增片段。以DIG2dUTP标记的欧洲山杨基因组DNA为探针进行Southern杂交, 结果表明显微分离出的染色体扩增片段与欧洲山杨基因组DNA同源,从而证明一号染色体DNA确实已被成功地扩增。以一号染色体第2轮PCR产物为探针进行荧光原位杂交,发现荧光信号较密集的分布于一号染色体, 但同时荧光信号也出现在其它染色体的着丝粒及端粒区域。对第2轮PCR产物进行克隆, 构建单条染色体DNA文库, 经分析, 该微克隆文库包含约3 ×10⁵ 个重组子。随机挑选160个重组子进行鉴定, 证明该文库的插入片段主要介于230～2 200 bp之间, 平均800 bp。该文库的构建为欧洲山杨1号染色体特异探针的筛选、遗传图谱的构建、重要基因的克隆等研究奠定了基础。     

大白菜—结球甘蓝1号染色体二体异附加系自交后代InDel标记分析和染色体数鉴定

在进行异附加系鉴定和相应连锁群In Del标记筛选的基础上,利用In Del标记和细胞学方法对大白菜—结球甘蓝1号染色体二体异附加系自交后代46个单株进行了鉴定分析。结果表明:结球甘蓝C03连锁群相对于大白菜特异的67个In Del标记,均至少在1份后代单株中扩增出了甘蓝的特异条带;在46个后代单株中,3个单株为染色体数22条的二体异附加系,6个单株为染色体数21条的单体异附加系,1个单株为染色体数20条的大白菜二体代换系,28个单株为染色体数20条的附加了结球甘蓝染色体片段的大白菜易位系,还有3个单株染色体数为22条,2个单株染色体数为21条,推断其分别为易位了结球甘蓝染色体片段的大白菜非整倍体易位系,还有3个单株没有检测到甘蓝特异条带。本研究结果为这些材料的进一步研究和应用奠定了基础。     

番木瓜四倍体与二倍体的核型分析及45S r DNA-FISH研究

 以番木瓜四倍体与二倍体植株为材料, 利用45S rDNA为探针, 结合核型分析与荧光原位杂交( fluorescence in situ hybridization, 简称FISH) 技术, 分析比较了二者之间的核型特征。结果表明: 二倍体与四倍体番木瓜在核型特征上没有明显差异, 染色体绝对长度在2.35～4.76μm之间, 属于中小染色体,均由中部着丝粒染色体(m) 和近中部着丝粒染色体( sm) 组成, 属“2A”类型, 二倍体核型公式为2n=2x=18=16m (2SAT) +2 sm, 四倍体为2n=4x =36=32m (4SAT) + 4 sm; 在二倍体体细胞中期染色体及间期核中, 均发现两个杂交信号位点, 在四倍体中则发现4个杂交信号位点。二者的杂交信号均位于第6对带有随体的同源染色体的次缢痕区域。由此认为该四倍体是由二倍体直接加倍形成的同源四倍体。     

基因组荧光原位杂交区分百合回交一代的不同基因组*

 利用东方百合(Oriental Lily)基因组DNA作荧光原位杂交的探针，用鲱鱼精子DNA或亚洲百合(Asiatic Lily)基因组DNA作封阻DNA，对东方百合和亚洲百合杂种的回交一代(Bc )的中期染色体进行了荧光染色。该方法将东方百合和亚洲百合的两个基因组在其回交一代中清楚地区分开来。表明基因组荧光原位杂交技术既能有效地鉴定杂交的成败，又能科学地分析基因组之间染色体的交换和重组。关键词：中图分类号：     

蓝猪耳45S rDNA的荧光原位杂交作图及其核型分析

 以番茄45S rDNA为探针,结合核型分析和荧光原位杂交(FISH)技术,对蓝猪耳染色体的核型以及45S rDNA在染色体上的定位进行了研究。结果表明,蓝猪耳染色体的核型为1A型,核型不对称系数为57.46,染色体相对长度变异范围为4.455% ～ 6.990%,最长染色体与最短染色体的比值为1.57,染色体相对长度组成为 2L + 4M2 + 12M1,核型公式为2n=2x=18=14m + 4sm (2SAT)。在蓝猪耳体细胞有丝分裂中期染色体和间期核中,均发现45S rDNA有2个杂交信号,且信号在有丝分裂中期位于第5对染色体短臂的近着丝粒处。基于上述结果绘制了蓝猪耳染色体的核型图。     

白菜EST-SSR信息分析与标记的建立

 数量迅速增加的EST为开发新的SSR标记提供了宝贵的资源。本研究对4 584条白菜EST进行了搜索, 共检索出474个SSR, 检出率为10.3% , 包括40种重复基元。其中二核苷酸和三核苷酸重复单元的EST-SSR占主导地位, 二者出现的频率基本相近, 占总SSR的近83%; 其它重复类型所占比例均不足5%。GA和GAA是二、三核苷酸中的优势重复类型, 分别占二、三核苷酸重复类型的71.5%和37.5%。设计了15对EST-SSR引物, 在合适的PCR反应体系下, 以构建EST的白菜自交系A的DNA为模板, 对设计的EST-SSR引物进行筛选, 发现15对EST-SSR引物都能扩增出产物。进一步用这些可扩增的引物对28个白菜品种进行PCR扩增, 发现7对引物显示多态性, 占引物总数的46.7%。此结果表明, 根据EST建立EST-SSR标记是一条简便而又有效的途径。     

PEG渗调引发处理对菜薹老化种子DNA损伤的修复作用

利用ＲＡＰＤ技术对菜薹人工老化种子ＤＮＡ的损伤及ＰＥＧ渗调引发处理的修复作用进行了研究。在６１种引物中，有６种在菜薹人工老化的种子上获得了基因组ＤＮＡ指纹图谱，平均每种引物扩增的总ＤＮＡ带数为２．１６，多态性ＤＮＡ带数为１．１７，有１１种引物在ＰＥＧ渗调引发的菜薹老化种子上获得了基因组ＤＮＡ指纹图谱，平均每种引物扩增的总ＤＮＡ带数为３．９１，多态性ＤＮＡ带数也是３．９１。人工老化对菜薹种子基因组Ｄ     

Application of genomic in situ hybridization for phylogenetic study between Mangifera indica L. and eight wild species of Mangifera

The phylogenetic relationship between mango (Mangifera indica L.) and eight wild species of Mangifera were analyzed by comparing signal intensity of genomic in situ hybridization (GISH) on somatic metaphase chromosomes of M. indica, using labeled DNA of eight wild Mangifera species. The eight wild species were divided into four groups based on intensity and number of hybridization signals on chromosomes of M. indica in GISH analyses. The probe of Mangifera sylvatica Roxb. gave the highest intensities on the chromosome of M. indica, indicating a close relationship between M. indica and M. sylvatica. For the other species, classification of GISH was comparable to that of the phylogenetic analysis using AFLP markers, as previously reported ( Eiadthong et al., 2000). This suggested a possibility that GISH analysis can be effectively used in the classification of Mangifera species.     

试探大白菜源流

对古、近代有关大白菜的文献试行勘校和补充。首次利用AFLP技术,通过聚类分析初步查明白菜类和芜菁亲缘关系不在同一类群;北方现有的几个大白菜品种和南方的黄芽白、黄秋白虽在同一类群但不属于同一亚群。在中青麻叶大白菜×四月慢小白菜的试验中F3发生了严重的分离现象,不仅出现了"白苗",还表现出多种亲本不具备的性状;自交F9部分株系出现球叶顶部抱合的变异。     

大白菜几丁质酶基因CHB4的克隆及序列分析

根据已知的几种十字花科植物几丁质酶基因保守序列设计特异性引物, 以大白菜叶片基因组DNA为模板, 通过PCR反应扩增出约1 kb的DNA片段和几丁质酶基因5′端序列片段(150 bp) 。利用不同浓度的水杨酸处理苗龄7 d的大白菜, 选择酶活力较高的处理植株叶片提取RNA, 采用RACE技术扩增。研究结果表明, CHB 4基因的DNA序列长度为1 517 bp (DDBJ 登录号: AB257452) , 包含有1个长度为508 bp内含子。该基因编码的产物是由268个氨基酸残基组成的蛋白质, 氨基酸序列与油菜ClassⅣ类几丁质酶的同源性达99% , 与其它几种高等植物的同源性达50%以上。     

ISSR-PCR和链亲和素磁珠吸附法开发白菜SSR引物

  分别利用ISSR-PCR和链亲和素磁珠吸附法分离白菜基因组微卫星, 共得到41对SSR引物。ISSR-PCR法运用巢式PCR, 分别设计微卫星两侧引物IP₂ 和IP₃ , SSR引物得率为12%。磁珠吸附法首先利用生物素标记的SSR探针与文库杂交, 链亲和素磁珠吸附富集含SSR的片段。然后用接头引物扩增, 克隆。根据测序结果, 设计SSR两侧引物PL 和PR, 引物得率为9.6%。     

大白菜与芥菜型油菜种间杂种的获得与鉴定

以大白菜‘A03’(2n=2x=20,AA)和芥菜型油菜‘AABB’(2n=4x=36,AABB)为试材,通过杂交获得了大白菜-芥菜型油菜异源三倍体(2n=3x=AAB=28)。结果表明:该三倍体生长势较强;叶色均较亲本深,株型偏向于芥菜型油菜,叶片、花、花蕾同时兼具了两亲本性状。减数分裂行为观察表明,在终变期,一般形成二价体、单价体和多价体,A基因组和B基因组染色体表现出部分同源性;中期I存在1~8条游离染色体;后期I存在落后染色体、染色体丢失及姊妹染色单体提前分离等异常现象,分到两极的染色体数目之和多大于28条;后期II分到每极的染色体数变异为10~15条,大多数为12~13条,同时有染色体片段存在。大白菜-芥菜型油菜异源三倍体(AAB)的获得为创建AA+B染色体的异附加系和研究A、B基因组间的亲缘关系奠定了基础。