粘虫核型多角体病毒(LsNPV)部分基因文库构建及Xho Ⅰ-X片段的末端序列测定

杆状病毒作为生物杀虫剂具有安全、持效、不易产生抗药性等优点，而杆状病毒－昆虫细胞表达系统具有产量高、易控制、相对安全等优点，目前已有数百种外源蛋白在杆状病毒－昆虫细胞系统中表达。国外已报道了苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒（ＡｃＮＰＶ）１３１．９ｋｂ［１］、...     

豆天蛾核型多角体病毒和雀纹天蛾核型多角体病毒光解酶基因的功能鉴定

为研究豆天蛾核型多角体病毒(Clbi NPV)和雀纹天蛾核型多角体病毒(Thja NPV)的光解酶是否具有修复由紫外线辐射引起的DNA损伤的功能,本试验分析了2种光解酶基因对大肠杆菌和家蚕(Bm)细胞抵御紫外线能力的影响。结果显示,来源于Thja NPV的野生型光解酶基因(Thjaphr)的表达显著提高了大肠杆菌的光修复能力,而来源于Clbi NPV的突变型光解酶基因(Clbiphr)没有光修复功能。在紫外线处理的Bm细胞中,野生型及突变型光解酶基因均没有表现出光修复活性。亚细胞定位结果显示,Thjaphr及Clbi NPV光解酶基因大的开放阅读框(Clbiphr2)定位于家蚕细胞的细胞核,小的开放阅读框(Clbiphr1)仅在细胞质中积累。     

四株昆虫细胞系对粘虫核型多角体病毒敏感性的测定

用粘虫核型多角体病毒 ( Mythimna separata Polyhedrosis Virus,Ms NPV)感染粘虫的NEAU- Ms- 94 7311和 NEAU- Ms- 94 10 15,草地夜蛾的 IPL B- SF- 2 1AE,八字地老虎的 Xc730 E四株昆虫细胞系。试验结果表明 ,异源的 IPL B- SF- 2 1AE和 Xc730 E细胞均不能被 Ms NPV感染 ,同源的 NEAU- Ms- 94 7311和 NEAU- Ms- 94 10 15细胞对 Ms NPV的敏感性有明显差异 ,前者在接种病毒后 10 d感染率平均达 39.51% ,形成多角体数目为 2 6.14PIBs/感染细胞 ,而后者被感染的细胞数极少     

基因重组核型多角体病毒AcMNPV对东方粘虫的毒力作用

采用小滴饮下法，研究了基因重组核型多角体病毒AcMNPVAaIT和野生型核型多角体病毒AcMNPV-C6对东方粘虫(Pseudaletia separata)的病原性，并添加感染增效物质，研究其增效作用。结果表明，AcMNPVAaIT比AcMNPV-C6具有更强的病原性，被感染昆虫死亡率高，致死时间短；添加的感染增效物质Fluorescent brightener28具有较强的感染增效作用。     

粘虫核型多角体病毒感染特性的研究

对东北农业大学昆虫学教研室分离出来的粘虫核型多角体病毒Ｖ－Ｍｓ－４毒株进行初步研究，结果表明，病毒多角体呈近圆形、四角形、六角形和不规则形，大小在１．１６～２．８６μｍ之间，病毒粒子为３８９～４６７μｍ×４０～６８μｍ，为多粒包埋，病毒在粘虫消化液作用下，１０ｍｉｎ失去折光性，３０ｍｉｎ内完全被溶解，释放出病毒粒子；消化液能使释放出的病毒粒子在１５ｍｉｎ内失活；寄主的脂肪、气管基质及表皮组织为感染病毒的敏感组织，感染后脂肪和血淋巴蛋白的含量比健康幼虫明显降低，未见病毒侵染中肠的现象。     

核型多角体病毒杀虫剂的开发

本文概述了核型多角体病毒杀虫剂在害虫生物防治中的筛选、生产、产品检测及应用方面的试验程序及步骤。     

蜀柏毒蛾核型多角体病毒（NPV）DNA的初步研究

经ＳＤＳ—冷酚法由纯化的蜀柏毒蛾ＮＰＶ颗粒抽提到了ＮＰＶ的ＤＮＡ．经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ—１００柱层析和聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定，该ＤＮＡ是均一制剂．ＰｏＮＰＶ－ＤＮＡ的Ｔｍ值测定为７０℃，经限制性内切酶ＨｉｎｄⅢ和ＥｃｏＲⅠ酶切，琼脂糖电泳分析测得该ＤＮＡ分子量约为５５×１０６道尔顿左右．     

斜纹夜蛾核型多角体病毒多角体基因的克隆

在以５种限制性内切酶对ＳＩＮＰＶ基因组作酶解分析的基础上，以ＡｃＮＰＶ多角体基因的部分编码序列作探针，对其进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析，发现ＸｂａⅠ酶切的２．９ｋｂ片段含有全部或部分ＳＩＮＰＶ多角体基因，并将该片段克隆至ｐｕｃ１８载体上。     

茶尺蠖核型多角体病毒SalI 1.1 k片段的克隆及gp41部分序列分析

茶尺蠖核型多角体病毒(EoNPV)是尚未完成基因组测序的一种杆状病毒.为了解其基因组的信息,从病虫中分离纯化了茶尺蠖NPV,提取基因组DNA,构建了EoNPV DNA的SalI酶切片段文库,并对阳性克隆进行测序,获得了EoNPV gp41基因的部分序列.序列同源性分析结果表明,EoNPV与LdMNPV之间gp41基因的同源性较高,而与AcMNPV及BmNPV的同源性较低.     

异源多角体蛋白包装对重组家蚕核型多角体病毒感染性的影响

 将 Ac MNPV的 polh基因克隆到缺失 polh基因的 Bm NPV(API4)基因组中 ,得到被 Ac MNPV多角体蛋白包埋并可表达慈菇蛋白酶抑制剂的重组病毒 Bm NPV(OAc- API4)。发现它的芽生型病毒能感染家蚕细胞和经皮下注射感染家蚕幼虫 ,但包埋型病毒不能经口感染家蚕幼虫。     

同安钮夜蛾核型多角体病毒pst I-G片段克隆及序列分析

 【目的】测定同安钮夜蛾核型多角体病毒（OpdiNPV）pst I-G 片断的序列,了解OpdiNPV的遗传结构和与其它昆虫病毒的进化关系。【方法】用pstⅠ酶切病毒基因组,电泳分离并回收pst I-G片段,连接到PUC18,转化入E.coli DH 5α,挑取阳性菌落测序。【结果】该片段长度为5 056 bp,有4个ORF,分别编码ODV-E66的C末端（EU 623602）,P87/VP80的C末端（EU 732665）,ODV-Ec43（EU617337）和Ac108（EU 732666）。ac108基因和odv-ec43起始密码子上游都有1个晚期启动子结构域TAAG,odv-ec43 基因起始密码子上游有2个早期转录起始元件CAGT;由odv-ec43推导的蛋白有2个跨膜螺旋、3个N-糖基化位点、1个N端酰基化位点、7个PKC磷酸化位点、1个酪氨酸激酶磷酸化位点和4个CKⅡ磷酸化位点;p87/vp80基因终止密码子下游有polyA信号。【结论】氨基酸序列同源分析和相似性分析显示Ac108、ODV-E66和 P87/VP80与其它昆虫病毒差异较大,ODV-Ec43的保守性较高。     

家蚕对核型多角体病毒（NPV）抗性的遗传学研究

】以１０个家蚕原种和２个杂交种为材料,采用机率分析法研究了不同家蚕品种对ＮＰＶ的抗性差异。结果表明,不同家蚕品种对ＮＰＶ的抗性差异极显著。抗性主要受微效多基因控制,并具有偏父遗传现象。日本系统的品种的抗性比中国系统的品种强。     

柞蚕核型多角体病毒基因组编码的VmiRNA筛选及功能分析

[目的]VmiRNA不仅可以控制自身基因,还可调节宿主的稳定表达,研究VmiRNA的功能有助于从分子水平说明核型多角体病毒与柞蚕的寄生关系,从而改进对病毒的防控措施。[方法]利用生物信息学及实时定量PCR等分子生物学相关技术,对柞蚕核型多角体病毒编码的miRNA及其作用的靶标基因进行研究。[结果]经预测和筛选得到了Ap NPV编码的miRNA MD217,与其有关的宿主靶基因14种,主要参与细胞组成、生化过程以及分子功能等途径,涉及到生物体细胞内一些催化、免疫反应等过程;实时定量PCR结果表明,MD217在病毒感染后上调表达,脂肪体组织内的靶基因MAPKK7表达水平与MD217的表达呈正相关。[结论]miRNA MD217在病毒感染后诱导表达,推测很可能降低了宿主免疫系统的防御能力,并同时影响靶基因MAPKK7的功能表达,从而避免了在免疫应答过程中的免疫清除。     

家蚕核型多角体病毒ie-2基因dsRNA表达载体的构建

为了研究ie-2基因的dsRNA对家蚕核型多角体病毒增殖的抑制效果,根据NCBI公布的BmNPV(T3株)基因组序列,克隆了BmNPV极早期表达因子ie-2.将该基因用亚克隆的方法导入到L4440载体中构建L4440-ie-2,并成功转入大肠杆菌HT115(DE3).IPTG诱导可以成功表达相应的dsRNA.     

豆天蛾核型多角体病毒泛素基因的序列分析

为了对CbNPV ubiquitin基因序列进行分析,并对目前已知全基因组序列的杆状病毒的泛素氨基酸序列进行比较。从豆天蛾幼虫尸体中分离纯化豆天蛾核型多角体病毒(CbNPV),提取基因组DNA,进行基因组测序。序列分析发现一个长度为252 bp的读码框序列与泛素基因同源性很高,该基因编码83个氨基酸。氨基酸序列同源性分析结果表明,CbNPV泛素的氨基酸序列与20种杆状病毒泛素的氨基酸序列的同源性在66.3%~82.1%,并且维持泛素功能所必需的氨基酸序列,在大部分杆状病毒中也都保守存在。