中国广东家蚕微粒子孢子在Antheraea eucalypti细胞系的感染增殖

将中国广东的Ｎｏｓｅｍａ ｂｏｍｂｙｃｉｓ ＣＧＳ,用０２ｍｏｌ／ＬＫＯＨ 处理后,接种感染Ａ．ｅｕｃａｌｙｐｔｉ 细胞系。孢子的发芽率达８７％ ,在Ａ．ｅｕｃａｌｙｐｔｉ 细胞初期感染率为２７ ％ 。发育各阶段具２ 核,可观察到短极丝孢子和二次感染体形成,孢子芽母细胞按二分裂形成２ 个双核的孢子芽,具典型 Ｎｏｓｅｍａ 属特征。Ｎｏｓｅｍａｂｏｍｂｙｃｉｓ ＣＧＳ 生物学特性、血清学类型与日本Ｎｏｓｅｍａ ｂｏｍｂｙｃｉｓ ＮＩＳ００１ 大致相同,但孢子大小、裂殖体的形态、在Ａ．ｅｕｃａｌｙｐｔｉ 细胞寄生的细胞感染率、每个细胞的产孢数,２ 种微孢子虫却有差异。     

家蚕几种病原微孢子虫的比较研究

从不同地区养蚕生产及桑园害虫中分别收集到四种微孢子虫，ＭＡ—１、ＭＤ—１、Ｐｈａ—Ｍ和Ｈａ—Ｍ。从它们孢子的形态、对蚕的致病性、相互间的血清学关系、在蚕体内的寄生部位和引起的组织与细胞病变以及在蚕体内增殖的生活史等方面与典型的家蚕微粒子病病原Ｎｏｓｅｍａｂｏｍｂｙｃｉｓ进行了比较研究。结果表明，ＭＡ—１与Ｎ．ｂｏｍｂｙｃｉｓ相同；Ｈａ—Ｍ可能亦来源于Ｎ．ｂｏｍｂｙｃｉｓ；ＭＤ—１为Ｎ．ｂｏｍｂｙｃｉｓ的形态变异株，定名为Ｎ．ｂｏｍｂｙｃｉｓｍｏｒ．ｖａｒ．；而Ｐｈａ—Ｍ为与Ｎ．ｂｏｍｂｙｃｉｓ不同的种，暂称为Ｎｏｓｅｍａｓｐ。     

微粒子感染家蚕后血液蚕白质和氨基酸组成变化研究

本文报道家蚕微粒子孢子(Nosema bombycis)添食家蚕(Bombyx mori)在蚕体血液里所引起的蛋白质和氨基酸变化。以正常微粒子孢子、四川大孢子和蒸馏水分别添食四至五龄起蚕使蚕体感染微孢子后,在一定时间间隔内取血进行SDS-PAGE,观察到感染微孢子的蚕血有大分子蛋白出现,在电泳图上分离明显。对感染微粒子的家蚕进行氨基酸分析研究,与对照比较,毒性大的正常种Nosema bom-bycis氨基酸总的含量下降,而毒性弱的四川大孢子氨基酸总的含量升高。     

家蚕微孢子原虫在Antheraea eucalypti细胞中的增殖

家蚕微孢子原虫经ＫＯＨ处理后,接种于Ａｎｔｈｅｒａｅａ ｅｕｃａｌｙｐｔｉ细胞系,调查其生活史,ＫＯＨ处理的孢子发芽率约为４４．３％,Ａｎｔｈｅｒａｅａ ｅｕｃａｌｙｐｔｉ细胞的初期感染率约为３０％,接种３６ｈ后,裂殖子数量急速增加,７２ｈ达到最高峰。接种４８ｈ后可观察到短极丝孢子发芽后形成的空孢壳和二次感染体。感染Ｎｏｓｅｍａ ｂｏｍｂｙｃｉｓ ４８ｈ前的家蚕血淋巴对ＢｍＮ细胞无感染性,而感染２     

家蚕异形微孢子虫与交叉传染

由于检测手段的改进，七十年代初，在日本蚕种生产过程中，发现了一些与家蚕微粒子虫孢子（Ｎｏｓｅｍａ ｂｏｍｂｙｃｉｓ）形态不同的微孢子虫以来，国内外众多学者开展了异型微孢子虫的分离和鉴定工作，发现了许多异形微孢子虫。且多数研究者和蚕种生产者认为，家蚕中分离到的异形微孢子虫主要来源于野外昆虫的交叉传染，我国家蚕微粒子病发生率的上升与野外昆虫的交叉传染关系密切。本文就有关方面的研究作一综合，期望对家蚕微粒子病的防治有所助益。二 异型徽抱子虫 根据目前分舟到的微抱子虫的形态结构、血清学特点、增殖特点、对家…     

家蚕微粒子原虫的增殖观察

电镜观察表明：家蚕微粒子原虫（ＮｏｓｅｍａｂｏｍｂｙｃｉｓＮａｅｇｅｌｉ）裂殖体在体内以分裂法增殖，裂殖体２核，常有宿主的粗面内质网包围。裂殖子通过细胞膜厚化转为产孢体。产孢体分裂成为孢子芽细胞后逐渐发育为成熟的新孢子，此过程可观察到胞内原生质电子密度极高和胞内类似中空两个过程。成熟孢子具有典型Ｎｏｓｅｍａ属的特征。     

家蚕病原性微孢子虫孢子表面蛋白的选择性分离与总蛋白比较分析

选择性分离了Ｎｏｓｅｍａｂｏｍｂｙｃｉｓ孢子表面蛋白和总蛋白，采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测发现，孢子表面蛋白由分子量不同的３种亚基（３２０００、２６０００、２４５００Ｄａ）组成，其总蛋白至少包括２５个条带。同时将从养蚕生产中收集到的两种微粒子ＭＡ－１和ＭＤ－１以及从野外昆虫收集到的微孢子虫Ｐｈａ－Ｍ和Ｈａ－Ｍ与Ｎ．ｂｏｍｂｙｃｉｓ进行了比较，发现不同微孢子虫间蛋白组成有差异。     

家蚕微孢子原虫(Nosema bombycis)在Antheraea eucalypti细胞中的增殖

家蚕微孢子原虫（ Ｎｏｓｅ ｍ ａ ｂｏ ｍ ｂｙｃｉｓ） 经 Ｋ Ｏ Ｈ 处理后,接种于 Ａｎｔｈｅｒａｅａ ｅｕｃａｌｙｐｔｉ 细胞系,调查其生活史。 Ｋ Ｏ Ｈ 处理的孢子发芽率约为４４３ ％ 、 Ａｎｔｈｅｒａｅａ ｅｕｃａｌｙｐｔｉ 细胞的初期感染率约为３０ ％ ,接种３６ｈ 后,裂殖子数量急速增加,７２ｈ 达到最高峰。接种４８ｈ 后可观察到短极丝孢子发芽后形成的空孢壳和二次感染体。感染 Ｎｏｓｅｍ ａ ｂｏ ｍｂｙｃｉｓ ４８ｈ 前的家蚕血淋巴对 Ｂｍ Ｎ 细胞无感染性,而感染７２ｈ 的血淋巴则表现出感染能力。     

家蚕微粒子孢子DNA的制备方法

家蚕微粒子孢子ＤＮＡ的制备方法曹广力，张志芳，贡成良，吴祥甫（苏州蚕桑专科学校）家蚕微粒子（Ｎｏｓｅｍａｂｏｍｂｙｃｉｓ，Ｎｂ）孢子由于被一层几丁质为主要成分的外壳所包被，对一般的化学物品和不良环境具有根强的抵抗性，不易去除。为获得芽体细胞，传统的方...     

家蚕微孢子虫孢子DNA的提取、克隆及部分DNA序列分析

报道家蚕微孢子虫（Ｎｏｓｅｍａｂｏｍｂｙｃｉｓ简称Ｎ．ｂ）孢子ＤＮＡ的提取、克隆及部分ＤＮＡ序列测定的结果。采用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ将孢子破碎，用苯酚一氯仿法提取孢子的ＤＮＡ。将Ｎ．ｂ孢子ＤＮＡ与ｐＴＺ１８Ｒ质粒重组，转化于大肠杆菌ＤＨ５，获得４个阳性克隆株：ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ１，插入片段为１ｋｂ；ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ２，为１．２ｋｂ；ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ３为１．８ｋｂ及ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ４为１．９ｋｂ，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，证实插入的ＤＮＡ片段为家蚕Ｎ．ｂ孢子所特有。与ＭＧ１（Ｎｏｓｅｍａｓｐ．），蓖麻蚕微孢子虫、蓝萤叶甲微孢子虫及蚕卵的ＤＮＡ均无同源性。用双脱氧链终止法测定４个克隆株插入片段的部分ＤＮＡ的序列，经检索尚未发现同源性的基因序列。讨论了ＰＣＲ技术诊断家蚕微孢子虫孢子与近缘种的问题。     

家蚕微孢子虫孢子DNA的提取、克隆及部分DNA序列分析

报道家蚕微孢子虫（Ｎｏｓｅｍａｂｏｍｂｙｃｉｓ简称Ｎ．ｂ）孢子ＤＮＡ的提取、克隆及部分ＤＮＡ序列测定的结果。采用ＳＤＳ－蛋白酶Ｋ将孢子破碎，用苯酚一氯仿法提取孢子的ＤＮＡ。将Ｎ．ｂ孢子ＤＮＡ与ｐＴＺ１８Ｒ质粒重组，转化于大肠杆菌ＤＨ５，获得４个阳性克隆株：ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ１，插入片段为１ｋｂ；ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ２，为１．２ｋｂ；ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ３为１．８ｋｂ及ｐＴＺ１８ＲＮ．ｂ４为１．９ｋｂ，经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，证实插入的ＤＮＡ片段为家蚕Ｎ．ｂ孢子所特有。与ＭＧ１（Ｎｏｓｅｍａｓｐ．），蓖麻蚕微孢子虫、蓝萤叶甲微孢子虫及蚕卵的ＤＮＡ均无同源性。用双脱氧链终止法测定４个克隆株插入片段的部分ＤＮＡ的序列，经检索尚未发现同源性的基因序列。讨论了ＰＣＲ技术诊断家蚕微孢子虫孢子与近缘种的问题。     

家蚕微粒子病药物治疗研究初探

TAAL对人工接种的家蚕微粒子病的实际治疗试验表明:以0.5-1mg/ml的TAAL1次/日,8小时/次药物添食,对家蚕微粒子病有明显的治疗效果.TAAL的疗效与治疗次数、二次用药的间隔时间、蚕体感染微孢子的数量、蚕体发病程度关系十分密切.治疗次数增加,疗效增加;二次用药间隔时间超过36小时疗效明显下降;蚕体感染微孢子浓度越低疗效越明显,当微孢子感染浓度低于10~8个孢子/毫升时表现出良好的效果.感染48小时前与48小时后使用TAAL的效果截然不同.推测该药物主要作用于微孢子原虫的裂殖体阶段.     

家蚕微孢子虫表面抗原蛋白对家蚕致病性的影响

家蚕微粒子病是由家蚕微孢子虫通过食下传染和胚种传染引起的,对蚕业生产影响很大,历来是蚕种的检疫对象,为此对家蚕微孢子虫的研究一直是一个重要课题。除Ｐａｓｔｅｕｒ(1870)提出的母蛾检验外,相继出现了双向免疫扩散法,凝集法,荧光抗体法,酶联免疫吸附法,酶标抗体法,免疫过氧化物酶染色法及单克隆抗体法等方法[1],这些方法各有特色。但基本上都是以识别检测微孢子虫的表面抗原蛋白为基础。河原勇[2]根据微孢子虫表面抗原蛋白的不同将家蚕Ｎｏｓｅｍａ属分为3种类型,即Ｂｏｍｂｙｃｉｓ型、Ｍ11型、Ｍ12型。本文以家蚕微孢子虫的表面抗…     

家蚕微粒子病的PCR诊断技术研究

在ＤＮＡ水平上，以聚合酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｏｎ，ＰＣＲ）技术检测家蚕微孢子虫的结果。设计、合成了两对引物，其中引物Ⅰ是针对家蚕微泡子虫（ＮｏｓｅｍａｂｏｍｂｙｃｉｓＮ．ｂ．）引物Ⅱ是针对变形孢子虫（ＶａｉｒｉｍｏｒｐｈａｎｅｃａｔｒｉｘＶ．ｎ，）的。用这两对引物分别对“桑尺蠖微孢子虫”孢子ＤＮＡ和Ｎ．ｂ．（镇江株）的纯孢子及其感染的幼虫、蛹及蛾的ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增，均获得预期的阳性条带；对不同引物扩增的产物进行了ＤＮＡ序列分析。初步认为引物Ⅰ可作为家蚕微孢子虫Ｎ．ｂ．特异性较高的检测引物，而引物１是微孢子虫共有的检测引物。进一步讨论了对家蚕微孢子的检测及分类上的问题。     

紧外昆虫与蚕种生产中的微粒子病防治

家蚕体内分离发现的５种微粒子虫中,除家蚕微粒子虫（Ｎｏｓｅｍａ ｂｏｍｂｙｅｉｓ）外来发现对家蚕具有较强致病性和胚传性的微粒子虫。野外昆虫中已有大量微粒子虫被发现,其中有些对家蚕也有很强的致病性和胚传性,但其原始寄主尚有诸我我不明之处。所以,蚕种生产中防止野外昆虫微粒子虫对生产影响的根本途径在于控制家蚕微粒子虫污染的扩散和桑园治虫。     

桑尺蠖和丝棉木金星尺蠖的微孢子虫对家蚕病原性和胚种传染性研究

从桑尺蠖（ＨｅｍｅｒｏｐｈｉｌａａｔｒｉｌｉｎｅａｔａＢｕｔｌｅｒ）中分离的微孢子虫（简称桑尺蠖微孢子虫），形态为长卵圆形，大小为３．５～４．１×１．６～１．９μｍ。从丝棉木金星尺蠖（ＣａｌｏｓｐｉｌｏｓｓｕｓｐｅｃｔａＷａｒｒｅｎ）中分离的微孢子虫（简称丝棉木金星尺蠖微孢子虫），形状为卵圆形，大小为３．２～３．７×１．６～２．１μｍ。两种微孢子虫均能感染寄生家蚕的主要组织器官，引起蚕儿发病，但致病力要比家蚕微孢子虫（Ｎｏｓｅｍａｂｏｍｂｙｃｉｓ）弱，且能经卵传染给下一代，其胚种传染率要比家蚕微孢子虫低。     

不同种微粒子感染家蚕后血液蛋白变化比较研究

本文报道了家蚕受不同种微粒子感染引起血液蛋白质组成发生变化,并对此做了比较研究。以蒸馏水做对照,添食微粒子正常种Nosema bombcis)(N.b)和变种MG_1,且在添食后一定时间间隔内取血,以几条蚕血液混合做为平均值,用SDS-PAGE检测其蛋白质变化,添食MG_1孢子与对照、N.b相比,家蚕血液中出现两条分子量较大的不同蛋白带,确定为脂酶同功酶蛋白A-1,A-2。用分光光度计检测480nm处的吸收值,添食后不同日数内,脂酶同功酶蛋白活力是不规则曲线,有两个活力高峰。     

家蚕微粒子病的综合防治

家蚕微粒子病是经蚕食下传染和胚种传染的一种毁灭性蚕病,严重威胁着蚕种场的生存和蚕桑事业的发展.目前,对家蚕微粒子病的防治可以从三个方向努力.首先是预防.主要是防止微粒子病对家蚕的感染.常以补正检查、预知检查、母蛾检查、环境及桑叶消毒等技术措施为有效手段,并已取得了系统有用的研究成果,广泛运用于家蚕繁育的全过程.第二为治疗.即主要是对家蚕添食抗微药品,如防微灵、克微宝等,以此来控制家蚕微粒子在蚕体的增殖.第三为育种防治.即用生物工程技术将抗微粒子病基因导入经济性状好的蚕品种内,培养出在感染微粒子病毒的任何浓度下绝对不会发生家蚕微粒子病的蚕种,不过该研究还只是一种设想.     

防微灵防治家蚕微粒子病机理研究初报

生物试验结果和以Giemsa液染色感病蚕体组织涂片的现察结果表明,防微灵对家蚕微粒子孢子无体外灭活作用,亦无预防效果,对孢子进入蚕体后的发芽和入侵组织无影响,蚕体内孢子发育进入孢子形成期再连续给药也无治疗效果,防微灵治疗家蚕微粒子病的作用阶段是抑制繁殖体的分裂增殖。     

拓展AcMNPV宿主域至家蚕的研究

将核型多角体病毒（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ　ｃａｌｉｐｈａｎｉｃ ｎｕｃｌｅａｒ ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ　ｖｉｒｕｓ，ＡｃＭＮＰＶ）与家蚕核型多角体病毒（Ｂｏｍｂｙｘｍｏｒｉ　ｎｕｃｌｅａｒ　ｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓ　ｖｉｒｕｓ，ＮｍＮＰＶ）基因组ＤＮＡ的Ｓｍａ　Ｉ酶切Ｃ片段共转染Ｓｆ细胞，共转染上清液接种到ＢｍＮ细胞中进行扩增，然后在ＢｎＮ中进行空斑分析，挑取多角体空斑进行扩增。发现所得到的病毒即能在Ｓｆ纫胞中增殖，也能在ＢｍＮ细胞中增殖，并产生多角体颗粒。用重组病毒的多角体口服感染幼虫，能引起家蚕幼虫发病。