检测冻肉中大肠杆菌O157∶H7的两种方法比较

大肠杆菌O157∶H7属于肠出血性大肠杆菌(en-terohemorrhagic E.coli,EHEC),是EHEC的主要血清型。感染大肠杆菌O157∶H7可使人患腹泻、出血性结肠炎,也可引发溶血性尿毒综合征及血栓形成性血小板减少性紫癜等严重并发征。笔者运用胶体金免疫(Colloidal gold immunoassay,GIA)检测卡和荧光PCR技术,对东莞市108份冻肉中的大肠杆菌O157∶H7进行了检测,并对2种方法的检测效果进行了分析比较。1材料与方法1.1材料东莞市各镇(区)冻肉库中的冻肉,共108份。大肠杆菌O157∶H7、O1、O48、沙门菌等菌株,由华南农业大学兽医学院郭霄峰教授惠赠…     

家兔出血性大肠杆菌O157：H7的感染试验研究

以出血性大肠杆菌O157：H7对家兔进行试验感染,观察了大肠杆菌O157：H7对家兔的影响,通过玻片凝集试验分析了粪中大肠杆菌O157：H7的变化,结果表明,大肠杆菌O157：H7可导致兔的肠道反应和腹泻,在腹泻期排出的菌体最高,并可维护较长时间的带菌,说明家兔依然是志贺样毒素大肠杆菌的易感性动物、应引起高度重视。     

肉类大肠杆菌O157∶H7污染情况调查

大肠杆菌O157∶H7是一种重要的人兽共患病原微生物,人感染大肠杆菌O157∶H7可出现腹泻、出血性结肠炎、溶血性尿毒综合征及血栓性血小板减少紫癜等严重并发征,严重者可导致死亡[1].1983年,Riley LW等[2]首先报道了一种罕见的可引起食物中毒的大肠杆菌,该菌即为大肠杆菌O157∶H7.目前,大肠杆菌O15...     

补充氯酸钠可降低牛体内大肠杆菌O157：H7的数量

牛是食源性大肠杆菌O157：H7的天然贮藏库。因此，在屠宰前先减少大肠杆菌O157：H7的数量，可降低人类感染这种急性致病菌的几率。当可以利用硝酸盐厌氧生长的细菌(例如大肠杆菌)与氯酸盐接触时，细胞内的硝酸盐还原酶在将硝酸盐转变为亚硝酸盐同时也将氯酸盐转变为亚氯酸盐，从而导致细菌死亡。由于氯酸盐只对具有硝酸盐还原能力的细菌起作用，这就意味着可以采用补饲氯酸盐的方法减少屠宰前牛体内的大肠杆菌O157：H7数量。饲喂育肥型高谷物日粮的实验牛(n=8)被人为地感染3株大肠杆菌O157：H7后，分别给饮用添加2．5mM硝酸钾与100mM氯化钠(对照，n=4)和2．5mM硝酸钾与100mM氯酸钠(氯酸盐处理，n=4)的水。24h后氯酸钠处理组的瘤胃内所有大肠杆菌O157：H7株的数量下降了2个数量组(104到102)，粪便中的数量则下降了3个数量级(106到103)。氯酸盐处理组瘤胃中总肠杆菌和大肠杆菌数从106减少到104，在其余的胃肠道段(回肠、盲肠、结肠和直肠)也降低了2个数量级。氯酸盐处理组减少了整个肠道中大肠杆菌O157：H7的数量，但没有改变可培养的厌氧菌总数或瘤胃发酵模式。因此，采用屠宰前补饲氯酸盐的方法来减少大肠杆菌O157：H7数量是可行的。     

大肠杆菌O157:H7的疫病生态学研究进展及其控制对策

大肠杆菌O157:H7是一种感染剂量低,致病性强,临床上无特效治疗药物的新型肠道致病菌,在世界范围内多次爆发流行,已构成严重的公共卫生问题。对大肠杆菌O157:H7的基本生物学特征,从非生物因素(包括传染源、气候等因素)和生物因素两个方面综述了影响大肠杆菌O157:H7传播的环境因子,最后从病原菌的监测诊断技术、废弃物堆肥处理、加强食品以及饮水安全管理等方面提出了控制大肠杆菌O157:H7的对策,最终为大肠杆菌O157:H7的疫病生态学研究提供了理论基础和参考依据。     

大肠杆菌O157显色培养基在饲料检测中的应用研究

为探讨大肠杆菌O157显色培养基在饲料微生物检测中的应用价值,试验利用免疫磁珠法和大肠杆菌O157显色培养基对60份饲料样品进行大肠杆菌O157分离鉴定,对疑似阳性的菌落提取基因组DNA,利用PCR扩增蜡样芽胞杆菌ofb基因进行测序验证。结果表明,饲料样本经过免疫磁珠法筛选后,亚碲酸钾山梨醇麦康凯(CT-SMAC)琼脂检出阳性的样本数为13例(21.67%);大肠杆菌O157显色培养基阳性样本为8例(13.33%);通过ofb基因测序验证CT-SMAC琼脂和显色培养基方法检测假阳性率分别为84.60%和75.00%。大肠杆菌O157显色培养基用于饲料中大肠杆菌O157的检测,能够有效抑制其他杂菌的生长,降低普通培养基检测的假阳性率,适合于饲料中大肠杆菌O157的检测。     

大肠杆菌O157:H7双重PCR快速检测试剂盒的研制

为了研制一种快速、准确诊断大肠杆菌O157:H7的PCR方法,试验根据GenBank收录的大肠杆菌O157:H7全基因组序列,设计并合成了2对可扩增rfbE(O157)和Flic(H7)基因片段的特异性引物,建立双重PCR快速检测大肠杆菌O157:H7的方法,并研制出检测试剂盒。结果表明:该检测试剂盒对大肠杆菌O157:H7能特异性地扩增出rfbE和Flic基因的目的片段;对大肠杆菌O157:H30、O157:H9、O157:H25、O157:H19只能扩增出rfbE而不能扩增出Flic基因的目的片段;对大肠杆菌DH5α、猪链球菌2型和副猪嗜血杆菌没有扩增出任何目的片段;细菌DNA的最低检测极限是50 pg;在-20℃条件下保存1,3,6,9,12个月后,其敏感性都没有发生改变,均能检测到50 pg的大肠杆菌O157:H7DNA模板。     

0157:H7型大肠杆菌感染与乳业生产的关系及调控措施

随着乳业生产规模的扩大和乳品消费人群的增加．由乳业生产和乳品消费而引发的人兽共患病引起了人们的高度重视。其中,因摄入被O157：H7型大肠杆菌污染的乳制品而引起的人消化道疾病是较常见且较严重的一种。奶牛是O157：H7型大肠杆菌的主要宿主之一,可在无症状的情况下向环境中排出致病菌,因此,国外乳业发达国家的牛场都特别重视O157：H7型大肠杆菌在牛群中的感染状况。而国内目前在此方面的研究还相对较薄弱,有待进一步深入研究。本文对O157：H7型大肠杆菌的传播特点、调控措施等作了简要综述,为我国开展此方面研究提供参考。     

动物性食品中O157：H7大肠杆菌污染及防止措施

O_(157):H_7大肠杆菌(Eschericha coli O_(157):H_7)是肠出血性大肠杆菌的最主要的一种血清型。对人的致病性很强。该菌污染动物性食品后随食物进入人体,引起出血性肠炎,导致出血性肠炎。 1.国内外流行情况 近年来由于O_(157):H_7大肠杆菌污染食品导致食用者感染的情况较为多见。在1982年美国发生了两起该菌食物中毒事件,有19人死亡,该事件是由当地一家快餐店售出的汉堡包中牛肉饼受O_(157):H_7大肠杆菌污染所致。在1983年美国西部地区也发     

如何降低宰后肉牛E.coli O_(157):H_7感染率

<正>肉牛体内溶血性大肠杆菌(EHEC)可以在肠道中和谐共生,但当肉牛屠宰后肠道内脱落的EHEC会感染肉质,致使人类食用感染EHEC的肉而致病。在美国每年治疗因EHEC导致的疾病耗资高达10亿美元。为了更好地控制溶血性大肠杆菌病暴发,可以在肉牛屠宰前对牛体进行处理,以达到降低肠道内E.coli O157:H7菌群数量,从而降低肉质感染的机率,控制疾病暴发的目的。1 E.coli O157:H7     

大肠杆菌O157:H7的疫病生态学研究进展及其控制对策

大肠杆菌O157：H7是一种感染剂量低,致病性强,临床上无特效治疗药物的新型肠道致病菌,在世界范围内多次爆发流行,已构成严重的公共卫生问题。对大肠杆菌O157：H7的基本生物学特征,从非生物因素（包括传染源、气候等因素）和生物因素两个方面综述了影响大肠杆菌O157：H7传播的环境因子,最后从病原菌的监测诊断技术、废弃物堆肥处理、加强食品以及饮水安全管理等方面提出了控制大肠杆菌O157：H7的对策,最终为大肠杆菌O157：H7的疫病生态学研究提供了理论基础和参考依据。     

大肠杆菌O_(157)多重PCR快速检测方法的建立

E. coli O157∶H7是肠出血性大肠杆菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)最有代表性的血清型,感染后能够导致人的出血性结肠炎(HC)、溶血性尿毒综合征(HUS)和血小板减少性紫癜(TTP)[1].     

肠出血性大肠杆菌强定殖株中新的双组份系统的鉴定

为了比较7株肠出血性大肠杆菌O157∶H7的定殖能力,采用灌胃感染的方式,将7株肠出血性大肠杆菌分别感染小鼠。对粪便中的细菌以及盲肠内定殖的细菌进行分离、计数,发现牛源菌株C1的定殖能力最强,且定殖维持时间最长。对C1菌株的基因组序列分析得到1对功能未知的双组份调节系统(TCS),N5512/N5520。PCR检测显示N5512/N5520存在于绝大多数肠出血性大肠杆菌O157∶H7临床分离株(98.5%),而在其他致病型的大肠杆菌中没有检测到。本研究为大肠杆菌O157∶H7的定殖和致病机制研究奠定了基础。     

EHEC O157:H7 stx基因缺失突变株的构建及其特性

针对肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157：H7的stx基因，通过PCR扩增出缺失了183bp的s灯基因片段，将其克隆到自杀性戢体pCVD442中，然后通过接合性转导将重组自杀性质粒pCVD442：：△stx从大肠杆菌SMIO转到O157：H7中，利用抗性标记和PCR方法筛选出O157：H7 stx基因缺失突变菌株。Vero细胞毒性试验证实，该突变株不能产生完整的Stx。动物试验表明，与强毒株相比该突变株的致病性明显降低。该突变株的构建为研究志贺毒素在EHEC O157感染中所起的作用和研制O157的基因工程减毒活菌苗奠定了基础。     

西宁市售动物性食品中肠出血型大肠杆菌O157：H7的检测

对西宁市售的动物性食品羊肉(20份)、牛肉(20份)、猪肉(20份)、鸡肉(20份)、牛奶(20份)、卤肉(10份)进行了大肠杆菌O157:H7检验,各样品先用mEC肉汤增菌,然后在选择性培养基TC-SMAC、MUG-LST培养此菌,经微量生化实验初步鉴定。结果是从110份样品中分离出1株大肠杆菌O157:H7,总检出率为0.9%;说明在西宁市售动物性食品中检出了大肠杆菌O157:H7。     

大肠杆菌O157和其它产志贺毒素大肠杆菌的毒力因子——粘附素

大肠杆菌O157的致病性已引起全世界公众和微生物学家的关注，而O157的致病因子有很多，本文就大肠杆菌O157可能的粘附素：菌毛、OMP及紧密素在致病中的作用进行综合评价，并对这些因子在其它产志贺毒素大肠杆菌中的出现率及与致病的关系进行分析，以期对大肠杆菌O157的致病机理有一个比较清楚的认识，推动我国对大肠杆菌O157的研究，以填补我国在这方面的相对空白。     

大肠杆菌O_(157)SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测方法的建立及初步应用

肠出血性大肠埃希菌O157:H7 (E.coli O157:H7)是一种强致病的病原性细菌,可引起出血性结肠炎(HC)、溶血性尿毒综合征( HUS) 和血栓性血小板减少性紫癜( TTP)等[1].E.coli O157:H7对人的致病力较强,感染剂量较低,每克感染载体含菌10个以上即可能引起感染.感染此病菌的人会出现严重腹泻、发烧等症状,病情严重者更会引起肾脏衰竭并发症,甚至导致死亡 [2],我国部分地区在食品和动物中有此类检测方面的报道 [3,4].     

大肠杆菌O157:H7实时定量PCR检测方法的建立

根据GenBank公布的大肠杆菌O157:H7的Flic(H7)基因序列进行同源性比较分析,选择保守序列设计一对特异性扩增引物,通过优化反应条件,建立一个用于大肠杆菌O157:H7快速定量检测的实时定量PCR方法.该方法的最低检测极限是103CFU/mL,敏感性比常规PCR提高10倍.方法重复性好、特异性强,重复性检测的变异系数均小于2%;只能检测大肠杆菌O157:H7,对非大肠杆菌O157:H7血清型细菌、猪链球菌2型、副猪嗜血杆菌无反应.利用此方法对模拟样本进行定量检测,其结果与平板细菌计数基本一致,表明此方法可作为大肠杆菌O157:H7快速诊断和疫情监测的一种快速、准确、简便的检测工具.     

大肠杆菌O157：H7的生物学特性

O157:H7大肠埃希氏菌是一种新发现病原微生物,感染大肠杆菌O157:H7主要引起婴幼儿腹泻,出血性结肠炎(haemorrhagic colitis,HC)、溶血性尿毒综合症(Haemolytic Uraemic Syndrome,HUS)、血栓性血小板减少性紫癜(thrombocytopenlc purpura,rrP)及死亡等[1-4].     

肠出血性大肠杆菌O157多重PCR检测方法的建立

为了建立肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157的多重PCR检测方法,本研究选取调控基因fusR与n5512,联合经典的rfbE、stx1和stx2基因,共同作为靶基因,通过对引物浓度等参数优化,建立了稳定性好的检测EHEC O157的多重PCR方法。并检测了该方法的特异性与敏感性,结果显示,该方法对非O157的产志贺毒素的大肠杆菌、肠致病性大肠杆菌(EPEC)、沙门氏菌、假结核耶尔森菌等检测均为阴性,特异性强;对EHEC基因组DNA的检测下限约为2.27×10~(-2)ng/μL,对EHEC CFU的检测下限约为104cfu/mL。对人工感染菌的样品进行检测,增菌前与增菌后的检测限分别为:饲料,4×10~3cfu/g和4×10~(-4)cfu/g;土壤,4×103cfu/g和4×10~(-2)cfu/g;牛肉,8×10-1cfu/g和8×10-3cfu/g;废水,4×103cfu/g和4×10~(-3)cfu/g。该方法还能检出感染了EHEC O157小鼠的粪便。综上,本研究建立了一种优化的EHEC O157多重PCR检测方法,为动物养殖与肉品加工过程中EHEC O157的检测提供了便捷、灵敏、可靠的技术手段。