高致病性PRRSV TJ株和致弱毒TJM株Nsp2测序及结构分析

参照GenBank中PRRSV VR-2332株全序列设计特异性引物,扩增高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)TJ株和其致弱毒株TJM株非结构蛋白2(Nonstructure protein 2,Nsp2)编...     

猪繁殖与呼吸综合征抗病指示性状的分子标记筛查及检测

为鉴定与猪感染猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)抗病指示性状相关的分子标记,以大白猪×通城猪高代横交群体为研究对象,选用159头健康仔猪进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respirato...     

高致病性猪蓝耳病及其防治

介绍了高致病性猪蓝耳病(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)的发生、传播途径、流行特点以及临床症状与危害,并阐述了综合防治高致病性猪蓝耳病的有效措施。     

CD163分子对PRRSV感染猪子宫内膜内皮细胞的影响

为探索猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染猪子宫内膜内皮细胞的机制,研究了CD163分子对PRRSV感染猪子宫内膜内皮细胞的影响。将CD163分子转染猪子宫内膜内皮细胞,构建稳定表达CD163分子的猪子宫内膜内皮细胞系,用0.1 MOI的VR2332株PRRSV感染表达CD163分子的猪子宫内膜内皮细胞,收获不同感染时间的子代病毒并测定病毒滴度。结果显示,同一时间点CD163转染细胞组的PRRSV子代病毒滴度与空载体转染细胞组无明显差异。可见,CD163分子对PRRSV感染猪子宫内膜内皮细胞无明显作用。     

类NADC30毒株致猪繁殖与呼吸综合征的诊断

通过临床症状观察、病理学检测、RT-PCR检测与序列分析等方法,对疑似患猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)的病猪进行诊断。送检病猪临床表现发热、呼吸困难、皮肤发绀;剖检病变为肺脏实变、淋巴结肿大出血;组织学变化主要包括间质性肺炎、淋巴结出血及多核巨细胞浸润;免疫组化结果显示,猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)抗原主要定位于肺泡上皮细胞和巨噬细胞;病料RT-PCR结果呈PRRSV(命名为SJZ201701株)阳性;序列分析结果表明,该病毒的核衣壳(Nucleocapsid,N)蛋白基因与NADC30株之间基因核苷酸、氨基酸的同源性最高,分别为96.3%和84.4%。遗传进化分析表明,SJZ201701株与NADC30参考毒株关系最近。综合判定该病例为类NADC30株PRRSV引起的感染。     

The Virosome as a Novel Concept for High Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus （HP-PRRSV） Vaccines

Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) is an envelope, positive, single-strand RNA virus and is a member of the Arteriviridae family, Nidovirales order. PRRSV is the viral pathogen responsible for porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) and caused reproductive failure and high rate of late abortion and early farrowing in sows and respiratory disease in all age. In 2006, a large scale outbreak of atypical PRRS occurred in China is characterized by high fever (41-42℃), high morbidity (50-100%) and high mortality (20-100%). The disease was caused by a highly pathogenic PRRSV with a 30 amino acid deletions in its Nsp2 coding region. Because the PRRSV strains are genetically heterogeneous, and elicit delayed and weak cell-mediated immune (CMI) and antibody responses after vaccination the current vaccines are failed to provide sustainable disease control. Virosomes are virus-like particles, consisting of reconstituted virus envelopes without genetic material of the native virus. Since the virosomes has being similar to the original virus in terms of morphology and cell entry characteristics. Virosomes provide a vaccine platform that has the capacity to combine the antigen and an adjuvant within a single particle that could activate both the humoral and the cellular arm of the immune system. Furthermore, the virosomes are also providing a novel promising approach for the development of an efficacious vaccine against HP-PRRSV.     

猪蓝耳病的综合防治

猪繁殖障碍与呼吸道综合症(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是20世纪80年代后期在美洲和欧洲发生的一种新猪病,因患病猪耳部发绀变蓝,又称为蓝耳病。该病由猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)所致,主要特征为母猪发热、厌食、流产、死胎、产木乃伊胎及弱仔等,仔猪出现呼吸系统症状和高死亡率,是近年来严重危害世界养猪业的猪病之一。尤其是2006年下半年至今,猪高热病给我国养猪业造成了严重的经济损失,据有关部门研究发现引起此次高热病的主要原因是猪蓝耳病病毒基因变异造成的,故蓝耳病的诊断与防治问题就显得尤为重要。     

通城猪抗蓝耳病的遗传基础研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS),俗称猪蓝耳病,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种猪繁殖和呼吸系统障碍的严重传染病。笔者发现,通城猪对蓝耳病具有抗病性。本文总结了近年来的研究工作,利用通城猪和国外品种大白猪进行人工感染试验,研究在免疫应答上的品种差异;通过转录组测序和生物信息分析发现两品种间存在的差异表达基因以及同一品种感染和未感染PRRSV间的差异表达基因,进一步对差异表达基因和病毒受体基因开展功能研究。研究结果为抗病基因鉴定奠定了基础。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光定量PCR检测方法的建立

针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)N基因保守序列设计引物与TaqMan探针,在建立常规PCR的基础上,设计并优化了TaqMan荧光定量PCR方法用于PRRSV核酸的检测.应用新建立的荧光定量PCR方法检测其它主要猪病病原,无任何非特异性反应;针对PRRSV阳性克隆质粒的检测灵敏度可以达到1.2×101 copy/ml,比常规PCR高100倍;通过对48份临床疑似样本的检测表明有29份样本为PRRSV阳性,与巢式PCR检测结果一致,而常规PCR只能检出其中19份阳性样本,灵敏度优于常规PCR方法.结果表明,试验建立的PRRSV TaqMan荧光定量PCR方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可为PRRSV临床诊断提供一个更为有效的方法.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株的致病性试验

【目的】研究从江西、湖南发生持续高热的病猪体内分离的4株NSP2基因缺失的猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)Jiangxi-3、Jiangxi-4、Hunan-1、Hunan-2的致病力。【方法】通过Reed-Muench法,测定4株PRRSV(第3代)的TCID50,将毒株分别接种PRRSV和猪圆环病毒2型(PCV2)抗原与抗体均为阴性的健康猪,各设同居试验猪,通过检测体温、临床症状观察、RT-PCR、ELISA、病理切片等方法检测病毒的致病性。【结果】4株病毒的TCID50为10-3.75~10-4.5/mL。攻毒试验猪和同居试验猪均表现典型猪繁殖与呼吸综合征临床症状,最后试验猪均死亡。病理切片也显示典型的猪繁殖与呼吸综合征病理变化,并在脑组织内检测到PRRSV核酸。【结论】4株PRRSV分离株的致病力增强。     

mTOR信号通路在调控猪繁殖与呼吸综合征病毒复制中的作用

[目的]为阐明哺乳动物雷帕霉素靶点(mammalian target of Rapamycin,mTOR)信号通路在调控猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)复制过程中的作用,探索防控该病传染的新途径.[方法]PRRS...     

CD163双等位基因编辑猪的制备及传代

【目的】猪繁殖与呼吸综合征（porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS）,俗称“蓝耳病”,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV）引起的一种高致死性传染病,对世界养猪业造成了巨大的经济损失。由于PRRSV遗传变异性较大,因此国内外并未有理想疫苗能够对此病进行有效防制。Cluster of differentiation 163（CD163）是PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞（porcine alveolar macrophage, PAM）的受体之一,研究旨在利用CRISPR/Cas9技术结合体细胞核移植技术制备CD163基因编辑的大白猪。【方法】针对猪CD163基因的第7外显子设计构建CRISPR/Cas9基因编辑载体;转染大白猪胎儿成纤维细胞,获得基因编辑阳性细胞克隆;以基因编辑细胞为核供体、体外成熟的猪卵母细胞为核受体构建克隆胚胎;胚胎移植到受体母猪生产CD163基因编辑猪,并进行后续的扩繁试验。【结果】设计的gRNA能够高效的识别靶位点。对获得的127个细胞单克隆进行PCR和测序显示,共有21个克隆发生突变,其中14个克隆为单等位基因突变或双等位基因杂合突变,7个克隆为双等位基因纯合突变。通过体细胞核移植技术,成功获得了CD163双等位基因编辑的纯合大白猪;并获得首批F₁代CD163基因编辑仔猪,目前健康状态良好。随后将有更多的F₁代CD163基因编辑猪陆续出生。【结论】制备的无抗性筛选标记的CD163双等位基因编辑猪,能够安全并快速地为培育抗PRRSV新品种猪提供育种材料。     

PAMs免疫粘附受体CR1-like对PRRSV感染的影响

[目的]本试验旨在探讨猪肺泡巨噬细胞（Porcine alveolar macrophages, PAMs）表面天然免疫粘附受体—猪I型补体受体（Porcine complement receptor 1-like, CR1-like）对猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV）感染PAMs的影响,为阐述CR1-like在PRRSV免疫应答中的生物学功能提供理论数据。[方法]采取PRRSV减毒活疫苗免疫接种PRRSV抗体为阴性的长白仔猪20～28 d后,提取分离抗病毒血清并检测抗PRRSV血清中和效价;将抗PRRSV血清进行不同倍比稀释,制备各类PRRSV抗原抗体复合物并接种于PAMs上,建立抗体依赖性增强（Antibody-dependent enhancement, ADE）模型,qRT-PCR技术检测各时间点PRRSV N基因拷贝数变化;PRRSV感染PAMs 9 h后,将抗血清和猪新鲜血清共处理细胞,运用ELISA测定不同时间点细胞上清液中猪新鲜血清C3b、C4b、CH50总活性...     

Review for Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus

Abstract Porcine reproductive and respiratory syndrome(PRRS)is the severest disease of pigs worldwide,caused by a highly genetically diverse RNA virus,called Porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV).The research summarized the genome characteristics of PRRSV particles and the most updated knowledge of structure protein function,and introduced the intellectual of PRRSV transmission and host immune response,which is very important for prevention and control for PRRS.A report showed that mass vaccination can stabilize the immunity of the entire herd,and this is the first required step for a PRRS eradication plan.However,the attenuated live vaccines may not achieve a valid prevention.The final goal of the EU project is to develop new generation,efficacious and safe maker vaccines that can be adapted to temporary changes and geographical differences.Robinson reported that broadly antibodies could neutralize all rapidly evolving typeⅠand typeⅡviruses,while further studies are expected to elucidate mechanisms of neutralizing antibody production and maturation and to investigate conserved epitope targets of cross-neutralization in this rapidly evolving virus.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒入侵受体唾液酸黏附素的表达与纯化

为了探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)假定受体唾液酸黏附素(sialoadhesin,Sn)的结构生物学信息及其在PRRSV入侵过程中所发挥的作用,利用昆虫表达系统(果蝇胚胎细胞,S2细胞)表达了猪源Sn v-set Ig-like结构域重组蛋白,并进行了Western blotting检测、质谱检测及镍柱纯化试验。结果表明,成功表达了目的重组蛋白,表达的重组蛋白序列与Sn v-set Ig-like结构域目的蛋白序列100%匹配,且获得的重组蛋白具有生物学活性,纯度高达99%。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白2研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由PRRS病毒(PRRSV)引起的以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸困难、病毒血症为典型症状的一种传染性疾病,给世界养猪业带来巨大的经济损失。深入研究PRRSV的相关致病机制可为该病防控奠定理论依据。在对PRRSV的研究中,非结构蛋白2(non-structural protein 2, Nsp2)一直是研究的热点,文章综述了Nsp2与遗传变异、病毒致病性、病毒复制、免疫调控和重组疫苗与分子标签等相关的研究进展。Nsp2基因序列在对疫苗毒株的鉴别诊断中发挥重要作用。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫过氧化物酶单层细胞检测方法的建立

【目的】建立一种可直观判断猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)的检测方法。【方法】应用PRRSV多抗血清作为一抗,建立了PRRSV免疫过氧化物酶单层细胞检测体系,并对相关反应条件进行优化,对其特异性和敏感性进行检测。【结果】最佳病毒接种感染复数(multiplicity of infection,MOI)为0.1,最佳感染时间为24 h,一抗最佳稀释度为1∶1 000,所建立的PRRSV免疫过氧化物酶单层细胞检测方法与其他几种流行猪病无交叉反应。对300份来自不同地区的临床血清进行检测,IPMA与PCR检测阳性符合率达93%。【结论】该方法具有良好的特异性和敏感性,为PRRSV的临床检测提供新方法。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP4蛋白B细胞表位的初步筛选

GP4蛋白是猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的次要结构蛋白,在病毒的复制与侵染中起重要作用。通过合成GP4蛋白的重叠多肽,采用间接ELISA、dot-ELISA的方法对GP4蛋白的B细胞表位进行初步筛选,得到1个免疫显性肽段Ⅰ(50) SCLRHGDSSSPTIRKSS (67),并对其抗体水平进行测定,为PRRSV的抗体检测及其新型表位疫苗的研究奠定基础。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒17-ZJ-HZ毒株的分离鉴定与分子流行病学分析

杭州某猪场断奶仔猪群出现高热、呼吸困难等症状,疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染,3头病猪肺脏病变样本送本实验室检测,通过RT-PCR方法检测其病原核酸。肺脏匀浆液无菌处理接种到MARC-145细胞,细胞病变观察、Western-blot、间接免疫荧光等方法验证PRRSV病毒分离情况;RT-PCR方法分五段扩增获得全长病毒基因组序列,采用MEGA等软件分析该毒株的核苷酸序列以及GP5、NSP2氨基酸序列;分离病毒接种3日龄PRRSV阴性仔猪,评价该病毒的毒力。结果表明:该场送检样品为PRRSV阳性;成功分离得到17-ZJ-HZ病毒;获得15 325 bp的 PRRSV全基因组序列。序列分析表明,该毒株与经典北美株的NSP2存在典型的29+1个氨基酸的缺失,且进化分析归于HP-PRRSV亚群。攻毒60 h后猪只出现典型的PRRSV临床症状和病理变化,以上结果表明该毒株为高致病性PRRSV(highly pathogenic PRRSV, HP-PRRSV)的北美株。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒基因及其疫苗的研究

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）又称“蓝耳病”，该病在20世纪80年代初期就已经存在．由于当时不明病因．被称为“神秘病”。该病是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起．以成年母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道疾病为主要症状的猪的主要传染病之一，临床上主要以怀孕母猪发生流产、早产、死胎和木乃伊等严重的繁殖障碍，仔猪的呼吸系统症状和断奶前死亡率增高．育成猪呼吸困难．