肝素和钙离子载体诱导猪射出精子体外获能的研究

本文采用肝素和钙离子载体诱导猪射出精子体外获能,根据对去透明带仓鼠卵的穿透情况评价获能效果,并用台盼兰·姬姆萨染色观察精子的死活及顶体状态。结果表明,未经获能处理的猪精子不能穿透仓鼠卵,肝素和I-A均能诱导猪精子体外获能并引起顶体反应。经获能处理的精子,在授精后2小时穿透卵子,4小时开始形成雄原核,6小时形成发育良好的雄原核。肝素处理以100μg效果最好,穿透率达77.8%,有原核卵百分率达47.2%;I-A处理以0.3uM为宜,穿透率达66.7%,有原核卵百分率达42.4%。咖啡因与肝素和I-A具有协同作用,能提高精子的穿透能力。有顶体反应的活精子百分率与穿透率呈强正相关(肝素组:r=0.97,P<0.01;I-A组:r=0.94,P<0.01)。     

波尔山羊精子体外获能和体外受精研究

肝素和钙离子载体在多种动物身上被证实对精子的体外获能有很好的诱导作用.试验着重研究肝素、钙离子载体对波尔山羊精子体外获能体系的适用性,从而寻找一套适合波尔山羊精子体外获能的培养体系,并对波尔山羊体外受精进行简单的探讨.     

波尔山羊精子体外获能及穿卵效果的研究

通过不同培养液对精子获能效果、获能后穿卵效果的比较,确定培养液的适宜配方及获能液中肝素的适宜添加浓度。精子用含有肝素的3种培养液进行获能处理,每个处理4个重复。试验设计了5个不同的肝素水平,即0、5、10、15、20μg/mL。于获能处理后4 h检查精子的顶体反应率、活力和活精子率。结果表明,添加15μg/mL和20μg/mL肝素能促进精子的获能效果和获能精子的穿卵效果。     

咖啡因和肝素、钙离子载体对家畜冷冻精子体外获能的协同作用

本文报道了用咖啡因与肝素、钙离子载体(I-A)协同处理诱导马、驴、猪冷冻精子体外获能的研究结果.咖啡因与肝素、I-A均有协同作用.在肝素或I-A处理中添加咖啡因,不仅能提高穿透率,而且能促进卵内雄原核的形成和发育.精子先经洗涤,再用咖啡因与肝素或I-A协同处理,可得到良好的获能效果.     

肝素和钙离子载体诱导马 驴冻精体外获能的研究

80年代以来,牛、羊、猪的体外受精先后取得了成功,但马、驴体外受精的研究却一直无人问津,迄今未见成功的报道。为此,我们进行了肝素和钙离子载体(Ionopho-re A23187,I-A)诱导马、驴冻精体外获能的研究,并探讨咖啡因与二者的协同作用。用去透明带仓鼠卵检测获能效果,用台盼蓝·姬姆萨(TG)染色观察精子的死活及顶体形态。     

肝素或钙离子载体诱导牛、羊冻精体外获能的研究

本文采用肝素或钙离子载体(I-A)诱导牛、羊冻精体外获能,根据对去透明带仓鼠卵的穿透情况评定获能效果,并用台盼蓝·姬姆萨(TG)染色观察了精子的死活及顶体状态.结果发现,牛、羊冻精经肝素或I-A处理后与卵子一起培养,2 h穿透仓鼠卵,4 h开始形成雄原核,6 h形成发育良好的雄原核.牛冻精用50μg/mL肝素及0.1μmol/L I-A处理效果最好,穿透率分别为72.8％和92.3％;羊则以20μg/mL肝素及0.3μmol/L I-A为宜,穿透率分别为73.1％和68.O％.咖啡因与I-A或肝素并用均有协同作用,能提高精子的穿透能力,并能促进卵内原核的发育.肝素和I-A均能在体外诱导牛、羊冻精的顶体反应,有顶体反应活精子百分率与穿透率呈强正相关,羊冻精比较脆弱,获能处理后活力较低.     

钙离子载体诱导猪冷冻精子体外获能的研究

本研究首次报道了猪冷冻精子的体外获能。用 I—A 诱导猪冷冻精子体外获能,可穿透去透明带仓鼠卵。I—A 浓度以0.3μM 为宜,穿透率为60%,有原核卵百分率为39.2%。咖啡因可促进 I—A 的作用,并能促进卵内原核的发育。I—A 可诱导猪冷冻精子的顶体反应,有顶体反应活精子百分率与穿透率呈强正相关(r=0.968,P<0.01,n=12)。结果说明,用 I—A 诱导获能的猪冻精可用于猪的卵子的体外受精。猪冻精在卵内的发育能力较低,推测这是猪冷冻精子受胎率低的一个主要原因。     

不同获能条件对猪精子体外获能和体外受精的影响

探讨猪精子在mTBM和TALP中分别获能2、3、4、5h和6h对体外获能的影响,并研究最适获能时间的精子体外受精的效果。结果表明:随着获能时间的延长,猪精子顶体反应率逐渐升高、质膜完整性逐渐下降,获能6h时的顶体反应率显著高于其他时间组,分别为52.5%和50.8%(P<0.05);质膜完整性显著低于其他时间组,分别为30.5%和31.4%(P<0.05);可获能4h的超激活运动率显著高于其他时间组,分别为56.6%和54.5%。将鲜精与冻融的精子获能4h后与成熟的猪卵母细胞进行体外受精,mTBM处理组的卵裂率显著高于TALP,分别为42.7%与40.2%和35.9%与33.4%,但鲜精与冷冻精液组间差异不显著。     

肝素浓度对辽宁绒山羊精子体外获能的影响

在TALP液中添加不同浓度(25、50、100μg/mL)的肝素对辽宁绒山羊精子进行获能处理,在显微镜下检测处理1、2、3、4、5h后的精子活力,用考马斯亮蓝染色法检测获能处理0.5、1、2、4h后的精子获能状况,探讨肝素浓度对绒山羊精子活力、存活时间、获能率的影响。结果发现,在38.5℃、5%CO2、饱和湿度条件下,精子活力随肝素浓度升高而下降,3 h以后25μg/mL肝素组精子活力显著高于其它肝素组(P<0.05)。添加肝素组获能率显著高于对照组(P<0.05),各肝素组精子获能率差异不显著(P>0.05)。对照组精子存活时间最长,25μg/mL肝素组精子存活时间为10.12 h,显著高于其它两组(P<0.05)。表明25μg/mL肝素处理辽宁绒山羊精子体外获能较为适宜。     

钙离子载体及咖啡因对绵羊精子获能的影响

通过添加不同浓度(0.05、0.1、0.2、0.5、1、5、10μmol/L)的钙离子载体(A23187,IA)及2 mmol/L咖啡因,探讨不同作用时间其对绵羊精子体外获能的影响。结果发现,IA浓度越高,精子的体外获能率越高,顶体反应率越低,活力越低,死精子就越多;而延长作用时间对获能、顶体反应的影响不明显。IA和咖啡因共同作用后,咖啡因能够促进IA诱导顶体反应的发生。建议用IA诱导绵羊精子获能时,其浓度以0.05~0.2μmol/L为宜,作用时间1 min。     

培养液中不同浓度肝素对蓝狐精子体外获能的影响

采用上游法分离优化精子,以mTyrod's液作为基础培养液检测培养液中不同质量浓度肝素对蓝狐精子体外获能的影响,试验设4个肝素质量浓度:0,10,20,50 μg/mL,38.5℃、5%C02培养箱进行孵育,获能培养时间为6h.利用考马斯亮蓝染色法检测精子顶体反应率,伊红-苯胺黑染色法检测活精子比率,观测法检测精子活力...     

牛精子体外获能的研究进展

文章从精子体外获能的分子机制和体外获能的影响因素等两个方面对牛精子体外获能的发展现状作了比较全面的概括.同时指出了各种处理精子方法的优缺点.并指出了牛精子体外获能的研究价值和意义.     

谷氨酰胺替代部分甘油对冻融猪精子获能和体外受精能力的影响

本试验旨在探索用谷氨酰胺（Gln）替代部分甘油对冻融猪精子体外获能和受精能力的影响,试验分为6组：3%甘油对照组和5个处理组（Ⅰ~Ⅴ组：2%甘油＋谷氨酰胺（0、20、40、80和100 mmol/L））。对冻融松辽黑猪精子的精子活力、质膜完整性、顶体完整性、线粒体膜电位、鱼精蛋白水平、获能及体外受精等指标进行了检测。结果显示,用谷氨酰胺替代部分甘油均对冻融精子质量有一定的改善作用,改善的程度受谷氨酰胺浓度的影响。与对照组相比,Ⅰ组精子的质量参数均显著下降（P<0.05）;与Ⅰ组相比,Ⅱ组精子活力、顶体完整性和活率显著提高（P<0.05）,Ⅲ组精子线粒体膜电位显著提高（P<0.05）,Ⅴ组精子活力、质膜完整性、顶体完整性、活率和线粒体膜电位均显著提高（P<0.05）。说明用谷氨酰胺替代部分甘油对精子质量具有很大的影响,且当谷氨酰胺为100 mmol/L时可得到更高质量的精子,因此,后续试验使用浓度为100 mmol/L的谷氨酰胺进行研究。与对照组相比,2%甘油＋100 mmol/L谷氨酰胺处理组精子鱼精蛋白缺失率显著下降（P<0.05）,精子获能无显著差异（P>0.05）,但胚胎卵裂率显著提高（P<0.05）。综上所述,谷氨酰胺可作为一种新型冷冻保护剂替代部分甘油来提高猪精液的质量,并降低甘油对猪精液的毒性作用,为猪精液的冷冻保存及商业化生产提供技术支撑。     

泛素激活酶抑制剂对猪精子获能状态、膜重构及体外受精的影响

【目的】评估泛素激活酶(E1)对猪精子获能、膜重构和体外受精的影响。【方法】选取5头长白猪采集精液,以硫醇酯法评估泛素激活酶(ubiquitin activating enzyme, E1)抑制剂(TAK-243)对精子中泛素(ubiquitin, Ub)与E1结合的影响;将精子分为鲜精组(Fresh)、DMSO组(DMSO)、获能组(Capacitated)及2.4、4.8和7.2 nmol/L TAK-243组,鲜精组用2 mL PBS重悬精子沉淀;获能组用2 mL获能液重悬精子沉淀;DMSO组及2.4、4.8和7.2 nmol/L TAK-243组分别用2 mL含0.07%DMSO及2.4、4.8和7.2 nmol/L TAK-243的获能液重悬精子沉淀,使用微生物动(静)态图像检测系统检测精子的动力学参数;以Western blotting法检测精子的酪氨酸磷酸化水平;Zn²⁺荧光探针检测精子的Zn²⁺含量;花生凝集素染色检测精子的顶体膜重构;免疫荧光法检测顶体表面精子黏附蛋白(AQN-1、AWN)的表达;体外受精法检测TAK-243...     

哺乳动物精子获能机理及体外研究

精子获能是哺乳动物精卵融合之前必须经历的一个阶段。自发现精子获能现象以来,对精子获能机制的研究已取得一些进展,但仍有不少问题需要进一步研究。精子获能为体外受精研究获得突破性进展,为人类直接观察受精过程和研究受精机理奠定了基础。文章主要对精子获能的变化、机制及体外研究进行了综述。     

山羊体外受精技术的研究进展

本文主要阐述了山羊体外受精技术,特别是山羊卵母细胞的采集和体外成熟,体外受精以及胚胎培养过程中的一些研究进展,及其山羊体外受精技术的非常广阔的前景。